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2023年 第41卷 第5期    刊出日期：2023-10-30

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第41卷第5期封面和目录

2023, 41(5):  0-0. 

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特约综述

慢性弓形虫感染对宿主中枢神经系统的损伤及其作用机制

薛羽珊, 林萍, 程训佳, 冯萌

2023, 41(5):  527-531.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.001

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刚地弓形虫是一种在世界范围内广泛分布的专性细胞内寄生原虫，可引起人兽共患弓形虫病。脑内弓形虫感染可导致中枢神经系统病变，引起抑郁症、精神分裂症、癫痫等症状。本文就弓形虫通过血脑屏障建立慢性感染，引起中枢神经系统损伤和脑部疾病的机制进行综述。

论著

刚地弓形虫棒状体蛋白18和膜表面抗原30复合核酸疫苗对小鼠的免疫保护作用

姜文静, 孟雅莉, 赵利娜, 王春苗, 张晓磊

2023, 41(5):  532-538.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.002

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目的 研究刚地弓形虫棒状体蛋白18（ROP18）和膜表面抗原30（P30）复合核酸疫苗的免疫保护作用。 方法 PCR扩增弓形虫p30和rop18基因，构建pVAX1-p30、pVAX1-rop18-p30质粒并进行PCR鉴定、酶切鉴定、测序鉴定。用Lipofectamine^TM 3000转染试剂将pVAX1（2 μg）和pVAX1-rop18-p30质粒转染至HeLa细胞内，24 h后间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达情况。75只雌性BALB/c小鼠随机分为pVAX1-rop18-p30组、pVAX1-rop18组、pVAX1-p30组、pVAX1组和PBS组，每组15只，分别于股四头肌注射100 μg（100 μl）的pVAX1-rop18-p30、pVAX1-rop18（本实验室保存）、pVAX1-p30、pVAX1质粒或PBS（100 μl），共免疫3次，间隔2周，末次免疫时质粒剂量为200 μg。每次免疫前和末次免疫后2周采集小鼠血样，ELISA检测血清IgG抗体水平。末次免疫后2周每组取3只小鼠，无菌取脾细胞，培养后ELISA检测培养上清中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-10、IL-12的水平。末次免疫后2周，每组取12只小鼠，每鼠腹腔注射1 000个弓形虫RH株速殖子进行急性感染，记录小鼠存活时间，评价免疫保护性。组间比较采用单因素方差分析。 结果 弓形虫p30和rop18基因PCR扩增片段分别为789、1 665 bp。pVAX1-rop18-p30质粒经PCR、酶切鉴定均获得预期大小的条带，测序鉴定结果正确。pVAX1-rop18-p30转染HeLa细胞后，胞质内可见黄绿色荧光，pVAX1转染的HeLa细胞内无黄绿色荧光。ELISA检测结果显示，末次免疫后2周，pVAX1-rop18-p30组吸光度（A₄₅₀值）为0.788 ± 0.025，高于pVAX1-rop18组（0.512 ± 0.027）、pVAX1-p30组（0.498 ± 0.027）、pVAX1组（0.122 ± 0.014）和PBS组（0.109 ± 0.011）（F = 77.6，P < 0.05），pVAX1-rop18组和pVAX1-p30组之间A₄₅₀值差异无统计学意义（F = 67.80，P > 0.05）；小鼠血清IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间延长而升高。末次免疫后2周，pVAX1-rop18-p30组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的水平分别为（678.77 ± 3.69）、（375.28 ± 2.65）、（130.82 ± 4.72）、（279.68 ± 3.67）和（579.68 ± 3.67）pg/ml，pVAX1-rop18组分别为（448.59 ± 6.52）、（256.34 ± 5.58）、（126.28 ± 7.48）、（156.58 ± 4.59）和（231.50 ± 3.21）pg/ml；pVAX1-p30组分别为（423.67 ± 4.82）、（277.92 ± 4.23）、（115.17 ± 4.37）、（137.18 ± 5.62）和（190.47 ± 4.18）pg/ml，pVAX1组分别为（48.97 ± 2.65）、（47.65 ± 2.76）、（47.14 ± 2.04）、（45.29 ± 2.31）和（46.21 ± 2.17）pg/ml；PBS组分别为（47.69 ± 3.42）、（46.77 ± 3.35）、（48.59 ± 4.75）、（44.92 ± 4.91）和（46.88 ± 3.56）pg/ml。pVAX1-rop18-p30组、pVAX1-rop18组和pVAX1-p30组的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12水平均高于pVAX1组和PBS组（F = 1 582.0、531.5、268.7、215.0、170.5，均P < 0.05）；pVAX1-rop18-p30组的IFN-γ、IL-10、IL-12水平均高于pVAX1-rop18和pVAX1-p30组（F = 1 620.8、1 208.0、728.0，均P < 0.05）；pVAX1-rop18-p30组、pVAX1-rop18组和pVAX1-p30组间的IL-2和IL-4水平差异无统计学意义（F = 53.21，P > 0.05）。弓形虫急性感染后，pVAX1-rop18-p30组、pVAX1-rop18组、pVAX1-p30组、pVAX1组和PBS组小鼠平均存活时间分别为（288 ± 2）、（196 ± 3）、（230 ± 6）、（144 ± 2）和（146 ± 11）h。pVAX1-rop18-p30组、pVAX1-rop18组和pVAX1-p30组小鼠平均存活时间长于pVAX1组和PBS组（F = 100.1，P < 0.05）；pVAX1-rop18-p30组长于pVAX1-rop18组和pVAX1-p30组（F = 38.7，P < 0.05） 结论 pVAX1-rop18-p30复合核酸疫苗能诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫，对弓形虫感染的免疫保护效果优于pVAX1-rop18和pVAX1-p30单基因核酸疫苗。

鼠疟原虫感染大鼠和小鼠的种特异性分析

郭帅, 何彪, 高源利, 范永铃, 朱锋, 丁艳, 刘太平, 徐文岳

2023, 41(5):  539-545.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.003

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目的 用约氏疟原虫（P.y）BY265株和伯氏疟原虫（P.b）ANKA-luciferase株感染小鼠和大鼠，分析鼠疟原虫感染宿主的种特异性。 方法 制备P.y和P.b的子孢子和裂殖子。分别用5 × 10⁴的P.y和P.b子孢子经尾静脉注射感染SD大鼠、BALB/c小鼠（P.y感染组，5只/组）和SD大鼠、C57BL/6J小鼠（P.b感染组，5只/组），每日取尾静脉血涂片镜检，记录红内期疟原虫出现的时间。P.y子孢子感染SD大鼠和BALB/c小鼠后42 h取肝组织，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测肝组织疟原虫18S rRNA的相对表达量。P.b子孢子感染SD大鼠和C57BL/6J小鼠后42 h活体成像法检测肝脏荧光值。分别用1 × 10⁸、1 × 10⁷、1 × 10⁶的P.y和P.b被感染红细胞（iRBC）感染SD大鼠（P.y感染组、P.b感染组）和易感小鼠（BALB/c、C57BL/6J）（阳性对照组），每日取尾静脉血涂片镜检，计算原虫血症。分别用P.y、P.b裂殖子感染SD大鼠和易感小鼠，每日取尾静脉血涂片镜检，计算原虫血症；当大鼠、小鼠原虫血症达到峰值后，每隔8小时取尾静脉血涂片镜检，持续24 h，分析疟原虫发育节律；观察大鼠、小鼠实验性脑型疟（ECM）的发生情况。分别用P.y、P.b裂殖子感染T、B细胞缺陷的Rag2-KO SD大鼠、野生型SD大鼠和易感小鼠，每日取尾静脉血涂片观察，计算原虫血症。两组数据之间比较采用非配对t检验，组间原虫血症趋势比较采用双因素方差分析（two-way ANOVA）。 结果 P.y感染组的SD大鼠、BALB/c小鼠，P.b感染组的SD大鼠、C57BL/6J小鼠体内疟原虫均能完成肝期发育，于第3天进入红内期。qRT-PCR结果显示，P.y子孢子感染SD大鼠、BALB/c小鼠体内疟原虫特异性18S rRNA相对表达量分别为（1.63 ± 0.381）、（1.00 ± 0.232），二者差异有统计学意义（t = 2.801，P < 0.05）。活体成像结果显示，P.b子孢子感染SD大鼠体内荧光度值为（6.243 ± 1.425）× 10⁷，高于C57BL/6J小鼠的（1.624 ± 0.530）× 10⁷（t = 6.077，P < 0.01）。红内期iRBC感染结果显示，3种剂量的P.y感染组SD大鼠的原虫血症趋势[峰值分别为（3.500 ± 1.042）%、（2.850 ± 0.627）%、（3.400 ± 0.962）%]之间差异无统计学意义（F = 0.145，P > 0.05），但与阳性对照组[峰值为（43.928 ± 9.448%）]差异有统计学意义（F = 84.040、63.760、58.400，均P < 0.01）；P.b感染组SD大鼠的原虫血症趋势[峰值分别为（11.468 ± 1.362）%、（7.398 ± 2.387）%、（2.984 ± 1.881）%]随感染剂量降低而下降，其中1 × 10⁸、1 × 10⁶剂量组原虫血症趋势与阳性对照组[峰值为（10.682 ± 4.278）%]差异有统计学意义（F = 13.83、17.320，均P < 0.01），1 × 10⁷剂量组原虫血症趋势与阳性对照组差异无统计学意义（F = 2.234，P > 0.05）。裂殖子感染结果显示，感染后6 d，P.y感染组SD大鼠、BALB/c小鼠原虫血症分别为（0.902 ± 0.235）%、（17.420 ± 4.105）%，二者差异有统计学意义（t = 9.943，P < 0.01）；P.b感染组SD大鼠、C57BL/6J小鼠原虫血症分别为（6.804 ± 2.978）%、（9.290 ± 1.055）%，二者差异无统计学意义（t = 1.759，P > 0.05）；P.b感染组SD大鼠、C57BL/6J小鼠ECM累计发生率分别为11/15、13/15，二者差异无统计学意义（t = 1.414，P > 0.05）。发育节律分析结果显示，P.y感染组SD大鼠发育节律与BALB/c小鼠不同，未呈现24 h规律；P.b感染组SD大鼠发育节律与C57BL/6J小鼠相近，具有24 h规律。感染后18 d，P.y感染组Rag2-KO SD大鼠、野生型SD大鼠、BALB/c小鼠原虫血症分别为（1.326 ± 0.908）%、0、（33.937 ± 3.453）%，Rag2-KO SD大鼠与野生型SD大鼠之间原虫血症差异有统计学意义（t = 2.267，P < 0.05）；感染后17 d，P.b感染组Rag2-KO SD大鼠、野生型SD大鼠的原虫血症为（19.685 ± 5.752）%、（0.007 ± 0.013）%（t = 2.499，P < 0.05），阳性对照组仅存的1只C57BL/6J小鼠的原虫血症为25.410%。 结论 P.y和P.b子孢子均能感染大鼠并完成肝期发育进入红内期。鼠疟原虫不易感染大鼠的影响因素在红内期，大鼠体内鼠疟原虫可被清除；P.y对宿主种属表现出更强的选择性；P.b感染大鼠的急性期原虫血症和ECM发生率与小鼠差异均无统计学意义。适应性免疫在大鼠彻底清除体内鼠疟原虫中发挥重要作用。

日本血吸虫Sj26gst mRNA候选疫苗的免疫原性研究

谭潇, 朱琪, 刘众齐, 李佳, 彭丁晋

2023, 41(5):  546-551.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.004

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目的 制备日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶相对分子质量（M_r）26 000亚基（Sj26gst）mRNA并评价其免疫原性。 方法 根据Sj26gst编码区序列（NC_002544.1），用人类常用的密码子优化Sj26gst编码序列，两端加β球蛋白3'和5'非编码区（UTR），合成后连接至pcDNA3.1(+)，构建pcDNA3.1/Sj26gst质粒，以线性化的pcDNA3.1/Sj26gst质粒为模版，体外转录Sj26gst mRNA。用脂质体将Sj26gst mRNA转染至HeLa细胞中，转染后2、6、12、24、48 h取HeLa细胞，免疫荧光定量PCR（qRT-PCR）检测Sj26gst mRNA的相对水平，蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测Sj26GST蛋白的表达水平。雌性BALB/c小鼠随机均分为Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组（每组6只），分别于小鼠左后腿股四头肌肌内注射100 μg的Sj26gst mRNA、pcDNA3.1/Sj26gst质粒、pcDNA3.1质粒和PBS（100 μl），共免疫3次，每次间隔2周。分别采集免疫前（0），首次免疫后2、4、6、8周小鼠尾静脉血，制备血清，ELISA检测血清Sj26GST特异性IgG抗体水平。首次免疫后8周，无菌分离小鼠脾组织，制备脾淋巴细胞悬液，37 ℃培养48 h后，加入10 μl细胞增殖试剂培养4 h后测定脾细胞刺激指数，ELISA法检测脾淋巴细胞上清中Th1型[肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（INF-γ）]，Th2型[白细胞介素4（IL-4）、IL-10]和Th17型（IL-17）细胞因子的水平。组间比较采用单因素方差分析。 结果 优化后的Sj26gst编码序列长858 bp，GC含量为63.2%，二级结构的自由能变为-485.6 kcal/mol。电泳结果显示，体外转录的Sj26gst mRNA条带呈单一且无弥散的条带。RT-PCR结果显示，Sj26gst mRNA转染后2 h，HeLa细胞Sj26gst mRNA相对水平为6.21 ± 0.83，6 h达到峰值（14.26 ± 1.23），随后下降；Western blotting结果显示，Sj26gst mRNA转染后6、12、24、48 h均检出M_r 26 000的Sj26GST蛋白条带。ELISA检测结果显示，首次免疫后8周，Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组的A₄₅₀分别为0.85 ± 0.16、0.42 ± 0.21、0.14 ± 0.03和0.11 ± 0.02，Sj26gst mRNA组与pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1/Sj26gst组与pcDNA3.1组之间差异均有统计学意义（t = 16.46、12.35，均P < 0.05）。首次免疫后8周，Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组小鼠脾淋巴细胞增殖指数分别为11.25 ± 1.22、6.37 ± 2.45，高于pcDNA3.1组（2.56 ± 0.38）和PBS组（1.27 ± 0.45）（t = 9.98、5.25，均P < 0.05）。ELISA检测结果显示，Sj26gst mRNA组小鼠脾淋巴细胞上清中TNF-α、INF-γ、IL-10和IL-17的表达水平分别为（756.23 ± 134.35）、（598.46 ± 50.47）、（713.42 ± 118.25）、（301.45 ± 48.23）pg/ml，pcDNA3.1/Sj26gst组分别为（587.26 ± 32.48）、（401.45 ± 46.25）、（386.27 ± 23.75）、（175.24 ± 41.23），均高于pcDNA3.1组的（19.34 ± 2.01）、（35.14 ± 5.25）、（32.11 ± 15.20）、（19.75 ± 7.21）pg/ml和PBS组的（18.75 ± 1.98）、（34.12 ± 4.78）、（29.36 ± 8.72）、（15.34 ± 2.51）pg/ml（t = 54.59、19.57、52.36、26.47，均P < 0.05）。 结论 构建了稳定表达Sj26gst mRNA的质粒，Sj26gst mRNA可诱导产生高水平的特异性Sj26GST蛋白抗体并诱导Th1型细胞免疫应答。

日本血吸虫m6A修饰的性别相关circRNA鉴定

刘华熳, Bikash Giri, 方传涛, 郑亚萌, 吴慧欣, 曾敏浩, 李姗, 程国锋

2023, 41(5):  552-558.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.005

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目的 研究日本血吸虫雌雄成虫环状RNA (circRNA）的N6-腺苷酸甲基化（m6A）修饰，并对circRNA可能调控的miRNA进行预测。 方法 取（100 ± 2）条日本血吸虫尾蚴，经腹部皮肤感染小鼠20 min，28 d后麻醉小鼠，用肝门静脉灌洗法收集虫体，分离雌雄虫，提取雌雄虫总RNA，分别取0.5 μg和1.0 μg点样在尼龙膜上，转移至紫外交联仪中，依次与m6A抗体（1∶1 000）和HRP标记的二抗（1∶5 000）孵育，进行斑点杂交。取雌雄虫总RNA各1 µg，应用RNA甲基化共沉淀试剂盒进行免疫沉淀分离，RNA建库试剂盒进行建库，生物分析仪质量检测后在高通量测序仪上采用150 bp双端模式进行测序。应用Cutadapt软件（v1.9.3）除去序列中的接头与低质量序列，获得高质量序列。使用Bowtie2软件将序列与血吸虫基因组（Sja_WBPS14）匹配，以Find_circ软件识别序列中的circRNA，MACS软件识别序列中的甲基化位点。利用Heatmap2软件对差异表达的circRNA进行聚类分析，对差异有统计学意义的m6A修饰的circRNA进行来源基因的基因本体论（GO）富集分析。利用DiffReps软件分析m6A修饰的circRNA在雌雄虫的差异情况。通过RNAhybrid软件预测与circRNA相互作用的miRNA，将miRNA反转录后进行qPCR分析，2^-ΔCt法计算miRNA相对表达水平。 结果 斑点杂交结果显示，日本血吸虫总RNA存在m6A甲基化修饰，且随着RNA量的增多，m6A甲基化信号趋于增强。高通量测序结果显示，日本血吸虫高质量序列占比高于99.9%，RNA富集与文库构建效果良好。来源于重叠区的circRNA占49%，其次是外显子（占29%）和基因间（占12%），来源于内含子（占2%）和反义链（占8%）的circRNA较少。雄虫中高富集的circRNA来源的基因可能与细胞代谢进程、细胞成分组织生物发生和应激等相关，雌虫中高富集的circRNA来源的基因可能参与细胞分子结合等过程。雌虫高丰度的m6A修饰circRNA有57个，雄虫有81个，雄虫富集的m6A修饰的circRNA数量高于雌虫（P < 0.05，差异倍数 ≥ 2）。雌雄虫中m6A修饰circRNA可潜在与多个miRNA相互作用，如Sja-Bantam、Sja-miR-307在雌虫中呈现高表达，Sja-miR-8-3p、Sja-miR-3504等在雄虫中呈现高表达。 结论 本研究获得了日本血吸虫雌雄成虫m6A修饰的circRNA表达谱，初步揭示了m6A修饰circRNA可能调控的miRNA。

细粒棘球蚴感染诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR抑制炎症反应

逯君霞, 许军英, 赵彬, 王芊文, 李文华, 耿玉庆, 侯隽, 吴向未, 陈雪玲

2023, 41(5):  559-566.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.006

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目的 探究CD73/腺苷/腺苷A2A受体（A2AR）通路在细粒棘球蚴抑制巨噬细胞炎症反应中的作用及机制。 方法 取健康C57BL/6小鼠腹腔注射无菌淀粉肉汤（0.5 ml/只），3 d后抽取腹腔液，分离巨噬细胞，以1 × 10⁶/ml接种于6孔板中，待细胞贴壁后，加入细粒棘球蚴囊液（终浓度0.8 mg/ml）培养0、6、12、18和24 h后，qRT-PCR检测CD73、A2AR、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和精氨酸酶1（Arg-1）的相对转录水平，流式细胞术检测CD73的表达量，蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测A2AR、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）和磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）的表达量。取分离的巨噬细胞接种于6孔板（1 × 10⁶个细胞/孔），囊液组、给药组和对照组（每组3孔）分别加入囊液（终浓度0.8 mg/ml）、囊液（终浓度0.8 mg/ml）和药物（腺苷受体抑制剂SCH58261，终浓度50 μmol/L），以及等量培养基，培养24 h后，采用qRT-PCR检测TNF-α、Arg-1的相对转录水平，Western blotting检测ERK1/2、p-ERK1/2的表达量。取6~8周龄健康C57BL/6雌鼠，感染组小鼠于肝被膜下注射5 000个细粒棘球蚴原头节（20 μl/只），健康组小鼠不作处理。1个月后，两组各取6只小鼠，取肝脏，石蜡包埋后制备切片，HE染色观察肝组织病变情况，免疫组织化学染色检测A2AR的表达情况，流式细胞术检测包囊近端和远端肝组织的CD73表达情况。取感染小鼠，给药组（8只）和溶剂组（8只）小鼠分别腹腔注射腺苷受体抑制剂（SCH58261）1 mg/（kg•d）和等量的PBS，健康组小鼠（8只）不作处理，22 d后，称量小鼠的体质量，以及肝脏、脾脏、肾脏和心脏的质量，计算各脏器与体质量的比值；取小鼠肝组织，石蜡包埋后制备切片，HE染色观察包囊周围炎性细胞浸润情况。两组间数据比较采用独立样本t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析。 结果 巨噬细胞经细粒棘球蚴囊液处理后，CD73 mRNA相对转录水平，18 h组（1.66 ± 0.17）和24 h组（2.01 ± 0.15）均高于0 h组（1.00 ± 0.09）（t = 3.35，P < 0.05；t = 5.83，P < 0.01）；流式细胞术检测结果显示，CD73⁺巨噬细胞占比，18 h组[（2.74 ± 0.43）%]，高于0 h组[（1.53 ± 0.10）%]（t = 4.72，P < 0.01）。6、12、18、24 h组A2AR mRNA的相对转录水平分别为1.00 ± 0.14、1.02 ± 0.02、0.72 ± 0.08、1.03 ± 0.03，均高于0 h组（0.29 ± 0.03）（t = 4.84、17.55、5.21、15.26，均P < 0.01）；Western blotting结果显示，6、12、18、24 h组A2AR蛋白相对表达量分别为1.22 ± 0.05、1.32 ± 0.02、1.40 ± 0.05、1.46 ± 0.04，均高于0 h组（1.00 ± 0.00）（t = 5.89、18.35、9.14、15.06，均P < 0.01）。TNF-α mRNA的相对转录水平，6、12和18 h组分别为1.00 ± 0.04、0.31 ± 0.03、0.12 ± 0.01，均高于0 h组（0.01 ± 0.00）（t = 22.37、11.33、11.48，均P < 0.01）。Arg-1 mRNA的相对转录水平，18 h组（0.69 ± 0.09）和24 h组（2.10 ± 0.07）均高于0 h组（0.004 ± 0.00）（t = 7.61、28.64，均P < 0.01）。Western blotting结果显示，6、12、18 h组p-ERK1/2蛋白的相对表达量分别为3.07 ± 0.71、1.68 ± 0.18、1.43 ± 0.14，均高于0 h组（1.00 ± 0.00）（t = 4.15、5.40、4.50，均P < 0.05），且6 h组高于18 h组和24 h组（0.97 ± 0.34）（t = 3.23、3.80，均P < 0.05）。囊液组和给药组TNF-α mRNA的相对转录水平分别为0.85 ± 0.05和1.56 ± 0.13（t = 5.13，P < 0.01）；囊液组Arg-1 mRNA的相对转录水平为147.73 ± 10.06，高于给药组（13.94 ± 1.00）和对照组（59.59 ± 9.82）（t = 13.23、6.27，均P < 0.01），且给药组的相对转录水平低于对照组（t = 4.62，P < 0.01）；Western blotting结果显示，给药组p-ERK1/2的蛋白相对表达量（2.08 ± 0.38）高于囊液组（0.94 ± 0.29）和对照组（1.00 ± 0.00）（t = 3.42、4.04，均P < 0.05）。HE染色结果显示，感染组小鼠肝组织出现炎性细胞浸润带；免疫组织化学染色结果显示，感染组小鼠肝组织炎症细胞A2AR阳性。流式细胞术检测结果显示，包囊近端肝组织CD73⁺巨噬细胞占比为（12.31 ± 0.04）%，高于远端的（5.95 ± 2.36）%（t = 3.81，P < 0.05）。药物处理22 d后，健康组、溶剂组和给药组的小鼠肝脏、脾脏、肾脏、心脏的质量与体质量的比值分别为6.13 ± 0.66、5.90 ± 0.48、5.47 ± 0.87，0.44 ± 0.18、0.41 ± 0.29、0.33 ± 0.10，0.68 ± 0.03、0.64 ± 0.05、0.60 ± 0.09，0.99 ± 0.15、0.77 ± 0.13、0.78 ± 0.19，差异无统计学意义（F = 0.95、0.42、1.46、2.02，均P > 0.05）。HE染色结果显示，与溶剂组相比，给药组包囊周围炎性细胞增多。 结论 细粒棘球蚴通过诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR促进炎症抑制因子的分泌来逃避宿主免疫。

河南省信阳地区家畜寄生蜱感染巴贝虫的分子流行病学调查

纪鹏慧, 蒋甜甜, 贺志权, 王丹, 岳思宁, 李素华, 杨成运, 王昊, 张红卫, 周瑞敏

2023, 41(5):  567-572.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.007

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目的 了解河南省信阳地区家畜寄生蜱感染巴贝虫的情况。 方法 2022年6—8月在河南省信阳市光山县和商城县采集家畜动物体表寄生蜱，采用形态学和PCR扩增蜱虫16S rDNA鉴定蜱虫种类。提取蜱虫基因组DNA，采用巢式PCR扩增巴贝虫18S rRNA基因。目的条带经测序后，进行BLAST比对分析，采用邻接法构建系统进化树，采用MEGA7.0软件进行同源性分析。 结果 共釆集335只蜱，形态学和PCR扩增鉴定结果显示，长角血蜱49只、微小扇头蜱208只、褐黄血蜱1只、具环扇头蜱34只、刻点血蜱43只。PCR扩增结果显示，335份蜱虫样品中有2份样品扩增出巴贝虫400 bp大小的目的条带，蜱虫巴贝虫总阳性率为0.6%。BLAST比对分析结果显示，1份样品扩增出的18S rRNA序列与GenBank中来自美国（MK609547）、泰国（MG199181）、中国（KU204794）的田鼠巴贝虫序列相似性均达99.26%；另1份样品扩增出的18S rRNA序列与GenBank中来自美国（MH620203）、印度（MN161136）和中国（KP666166）的吉氏巴贝虫序列相似性均达100%。系统进化树分析结果显示，田鼠巴贝虫阳性样品与来自俄罗斯（KX987864）、中国（KU204794）、泰国（MG199179）等地的田鼠巴贝虫聚在同一分支上，同源性较高；吉氏巴贝虫阳性样品与来自中国（FJ769386）、美国（MH620203）和印度（KF606884）等地的吉氏巴贝虫聚在同一分支上，同源性较高。 结论 河南省信阳地区家畜寄生蜱存在田鼠巴贝虫和吉氏巴贝虫感染，可能对人和家畜有一定的致病风险。

云南省大理州棘球蚴病流行病学调查和病例回顾性分析

李奔福, 杨敬, 杨金玉, 罗瑞娟, 朱斌林, 陈泰林, 张丽娟, 李雪瑶, 严信留, 字金荣, 彭佳, 王正青, 李健雄, 蔡璇, 徐倩, 吴方伟, 杨亚明

2023, 41(5):  573-578.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.008

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目的 了解云南省大理白族自治州（简称大理州）2016—2022年棘球蚴病流行状况，为全省棘球蚴病防治提供参考依据。 方法 2016—2022年，按照《云南省包虫病防治技术方案》，对大理州第一人民医院、大理大学第一附属医院、大理市第一人民医院，洱源县、剑川县、鹤庆县、宾川县、漾濞县和云龙县第一人民医院及疾病预防控防控制中心，以及国家传染病报告信息管理系统中能追溯到的既往棘球蚴病病例进行回顾性调查。2016—2022年采取整群随机样方法，选择洱源县、剑川县、鹤庆县、宾川县、漾濞县和云龙县等6个县，每个县每年抽取3个乡（镇），每个乡（镇）抽取不少于3个村，对调查村不少于500名3岁以上常住居民进行腹部超声检查。每个调查村抽取50名6岁以上常住居民进行防治知识知晓情况调查。每个调查村随机抽取养犬户，每户采集1份犬粪样，ELISA检测犬粪棘球绦虫抗原。每个调查县随机抽取当地饲养、宰杀的牛、羊和猪，采用内脏剖解法检查家畜棘球蚴感染情况。数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。 结果 2016—2022年大理州共12个县（市）发现病例161例。其中，回顾性调查发现病例95例（占50.01%），现场调查发现病例66例（占40.99%）；确诊病例127例（占78.89%），临床病例34例（占21.12%）。男性、女性病例数分别为65例（占40.37%）、96例（占59.63%），差异无统计学意义（χ² = 3.851，P > 0.05）。年龄分布中，40~49岁年龄组病例数最多（36例），各年龄组之间差异有统计学意义（χ² = 188.520，P < 0.05）。病例职业以农民（87.58%，141/161）和学生（6.83%，11/161）为主，病例的民族以白族（63.35%，102/161）和汉族（22.36%，36/161）为主；各职业、各民族间差异有统计学意义（χ² = 286.898、101.030，均P < 0.05）。2016—2022年共超声筛查6个县（市）543村265 983人，发现棘球蚴病66例，人群棘球蚴病检出率为24.81/10万。其中，洱源县人群棘球蚴病检出率最高，为39.03/10万（23/51 248），云龙县最低，为5.23/10万（2/38 243）。犬粪棘球绦虫抗原阳性率为1.48%（218/14 766），其中云龙县阳性率最高，为2.40%（44/1 837），宾川县最低，为0.73%（18/2 470）。2017年人群棘球蚴病检出率最高（149.03/10万），2021年最低（11.41/10万），从2017年开始呈下降趋势。共检查家畜脏器18 416份，棘球蚴感染率为0.09%（16/18 416），其中洱源县和漾濞县的家畜棘球蚴感染率分别为0.45%（15/3 349）和0.03%（1/3 202），其他县未检出感染家畜；2017、2018和2019年家畜感染率分别为0.06%（3/5 369）、0.15%（7/4 771）、0.22%（6/2 769），其他年份未检出感染家畜；牛和猪感染率分别为0.02%（1/4 715）和0.13%（15/11 427），羊未发现感染。人群棘球蚴病防治知识合格率为72.71%（4 494/6 181），其中云龙县最高，为88.76%（1 137/1 281），剑川县最低，为40.23%（286/711），不同地区的合格率差异有统计学意义（χ² = 109.991，P < 0.05）。 结论 云南省大理州棘球蚴病呈中度流行，需加强对女性、40~49岁年龄组、农民和白族等重点人群的健康教育。

2005—2021年甘肃省陇南市内脏利什曼病流行特征

王小军, 蔡玉成, 邹轩, 李辉, 童波波

2023, 41(5):  579-585.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.009

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目的 分析2005—2021年甘肃省陇南市内脏利什曼病的流行病学特征，为内脏利什曼病防控策略制定提供科学依据。 方法 收集国家传染病报告信息管理系统中2005—2021年报告的现住址在陇南市的内脏利什曼病病例信息，使用Microsoft Excel 2013建立数据库，运用描述性流行病学方法分析内脏利什曼病病例的三间分布特征，用Arc GIS10.2绘制报告病例分布图，采用SPSS 25.0软件进行统计学分析。 结果 2005—2021年陇南市共报告内脏利什曼病病例1 109例，其中临床诊断病例577例、确诊病例532例，年均报告发病率为2.49/10万，呈低度流行状态；2005年发病率为2.76/10万，至2009年升高至4.53/10万，随后逐渐下降至2021年的0.46/10万，呈先升后降的趋势（χ² = 267.561，P < 0.01）。报告病例主要分布在武都区（606例）、文县（323例）、宕昌县（148例），占总报告病例数的97.11%（1 077/1 109）。内脏利什曼病流行县的部分乡（镇）呈现聚集性高发。男性、女性报告病例分别为633和476例，男女性别比为1.33∶1，男性、女性发病率分别为2.73/10万、2.23/10万（χ² = 2.699，P > 0.05）。0~4岁年龄组报告病例数占报告病例总数的50.50%（560/ 1 109），发病率最高，为19.62/10万；其次为5~9岁年龄组，报告病例数占报告病例总数的12.80%（142/1 109），发病率为4.84/10万；报告病例发病率随着年龄的增长呈下降趋势（χ² = 14.942，P < 0.01）。散居儿童报告病例数最多，占总报告病例数的41.12%（456/1 109），其次为农民，占24.71%（274/1 109）。 结论 甘肃省陇南市内脏利什曼病呈低度流行状态，报告病例以儿童居多，历史流行县疫情有复燃趋势。

2015—2022年江西省疟疾疫情特征分析

龚艳凤, 李紫芬, 唐乖, 黄美琴, 周炳华, 胡强

2023, 41(5):  586-592.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.010

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目的 对2015—2022年江西省疟疾疫情特征进行分析，为制定防治对策提供科学依据。 方法 从国家传染病报告信息管理系统和寄生虫病防治信息管理系统收集报告地为江西省、终审日期为2015年1月1日至2022年12月31日的疟疾病例，统计病例资料。按确诊病例（省级疟疾诊断参比实验室镜检和/或PCR疟原虫检测结果为阳性）、临床诊断病例（医疗机构血检结果为阳性但省级参比实验室镜检和PCR均为阴性）、重症病例（存在并发症）进行分类整理。采用SPSS 26.0软件，以LSD-t法和mann-whitney Test法进行统计学分析。 结果 2015—2022年江西省共报告疟疾病例241例，均为境外输入性疟疾，无死亡病例报告。各年报告病例分别为53、52、30、41、46、12、3和4例。其中确诊病例240例，临床诊断病例1例（2015年报告）。在确诊病例中，恶性疟153例（占63.75%）、间日疟50例（占20.83%）、卵形疟31例（占12.91%）、三日疟5例（占2.08%），恶性疟和间日疟混合感染1例（占0.41%）。感染来源分布于非洲、亚洲和大洋洲等34个国家，其中非洲（共27个国家）占92.53%（223/241）。各月份均有病例报告，各月累计以1月、6月和9月病例较多，10月、11月和12月病例较少。2015—2019年[新型冠状病毒感染（简称新冠）疫情发生前]和2020—2022年（新冠疫情期间），月平均报告病例数分别为3.7例和0.53例（t = 6.369，P < 0.05）。江西省11个设区市均有病例报告，报告病例居前3位的设区市分别是南昌市（51.45%，124/241）、赣州市（15.77%，38/241）和宜春市（7.05%，17/241）；报告病例前3位的县（市、区）分别是南昌市青山湖区（33.19%，80/241）、南昌市东湖区（9.54%，23/241）和赣州市章贡区（7.88%，19/241）。报告疟疾病例中男性占95.44%（230/241），女性占4.56%（11/241），发病年龄主要集中在20~50岁（97.11%，234/241），主要由县级以上医疗机构和疾病控制中心报告（99.59%，240/241）。发病到初次就诊时间间隔中位数为1 d；新冠疫情发生前平均数为（2.76 ± 5.00）d，新冠疫情期间平均数为（1.79 ± 1.81）d，差异无统计学意义（Z = -0.155，P > 0.05）。初诊到确诊时间间隔中位数为2 d；新冠疫情发生前平均数为（3.36 ± 3.30）d，新冠疫情期间平均数为（2.74 ± 2.90）d，差异无统计学意义（Z = -0.103，P > 0.05）。重症病例28例（11.62%），非重症病例213例（88.38%）。重症病例发病到确诊间隔时间（中位数 6 d）与非重症病例（中位数4 d）相比，差异无统计学意义（Z = -1.242，P > 0.05）。 结论 疟疾消除后阶段，江西省输入性疟疾引起输入再传播风险仍然存在，应当继续加强监测，防止重症疟疾和死亡的发生。

河南省自赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析

周瑞敏, 纪鹏慧, 李素华, 杨成运, 刘颖, 钱丹, 邓艳, 鲁德领, 赵玉玲, 赵东阳, 张红卫

2023, 41(5):  593-600.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.011

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目的 分析河南省自赤道几内亚输入性恶性疟原虫抗药性基因多态性，了解恶性疟原虫基因突变情况，评估其流行特征。 方法 收集河南省2012—2019年自赤道几内亚输入性恶性疟病例信息和外周血样，提取血样中恶性疟原虫基因组DNA，巢式PCR扩增恶性疟原虫Kelch 13螺旋体（PfK13）基因、恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白（Pfcrt）基因、恶性疟原虫多药物抗性基因1（Pfmdr1）、恶性疟原虫二氢叶酸还原酶（Pfdhfr）基因和恶性疟原虫二氢蝶酸合酶（Pfdhps）基因，琼脂糖凝胶电泳后进行双向测序。获得的基因序列通过MEGA7软件与参考基因组进行比较获得突变位点信息，参考基因组来自GenBank的恶性疟原虫3D7野生虫株（GenBank登录号分别为PF3D7_1343700、PF3D7_0709000、PF3D7_0523000、PF3D7_0417200和PF3D7_1324800）。使用SPPS 21.0软件对数据进行统计学分析。 结果 2012—2019年，河南省共报告输入性疟疾病例1 522例，其中自赤道几内亚输入病例117例，包括恶性疟病例97例、卵形疟病例16例、间日疟和三日疟病例各1例、恶性疟原虫/三日疟原虫混合感染和恶性疟原虫/卵形疟原虫混合感染病例各1例。测序获得91份恶性疟原虫样品的PfK13基因序列，基因突变率为8.8%（8/91）；突变样品中共检测出7个非同义突变位点和3个同义突变位点，其中非同义突变位点分别为M476I混合型（混）、A481V混、A564E混、P574L混、A578S、V589I和N609I混，同义突变位点分别为G625G、N664N和C469C。测序获得91份恶性疟原虫样品的Pfcrt基因序列，基因突变率为18.7%（17/91）；检测出3种Pfcrt基因型，分别为野生型C₇₂V₇₃M₇₄N₇₅K₇₆（81.3%，74/91）、突变型C₇₂V₇₃I₇₄E₇₅T₇₆（12.1%，11/91）和混合型C₇₂V₇₃M/I₇₄N/E₇₅K/T₇₆（6.6%，6/91）。测序获得92份恶性疟原虫样品的Pfmdr1基因序列，基因突变率为77.2%（71/92）；检测出3个突变位点，分别为N86Y（41.3%，38/92）、Y184F（75.0%，69/92）和D1246Y（1.1%，1/92），其中N86Y突变率从2012年的68.8%（11/16）下降到2016年的11.1%（1/9）（χ² = 11.58，P < 0.05）；检测出5种Pfmdr1基因型，分别为野生型N₈₆Y₁₈₄D₁₂₄₆（22.8%，21/92），单基因突变型Y₈₆Y₁₈₄D₁₂₄₆（1.1%，1/92）、N₈₆F₁₈₄D₁₂₄₆（34.8%，32/92）、N₈₆Y₁₈₄Y₁₂₄₆（1.1%，1/92）和双重突变型Y₈₆F₁₈₄D₁₂₄₆（40.2%，37/92）。测序获得90份恶性疟原虫样品的Pfdhfr基因序列，基因突变率为96.7%（87/90）；检测出3个突变位点，分别为N51I（91.1%，82/90）、C59R（93.3%，84/90）和S108N（96.7%，87/90）；检测出5种Pfdhfr基因型，分别为野生型N₅₁C₅₉S₁₀₈（3.3%，3/90），单基因突变型N₅₁C₅₉N₁₀₈（2.2%，2/90），双重突变型I₅₁C₅₉N₁₀₈（1.1%，2/90）、N₅₁R₅₉N₁₀₈（3.3%，3/90）和三重突变型I₅₁R₅₉N₁₀₈（90.0%，81/90）。测序获得90份恶性疟原虫样品的Pfdhps基因序列，基因突变率为97.8%（88/90）；检测出6个突变位点，分别为I431V（8.9%，8/90）、S436A（27.8%，25/90）、A437G（92.2%，83/90）、K540E（3.3%，3/90）、A581G（1.1%，1/90）和A613S（2.2%，2/90）；检测出8种Pfdhps基因型，分别为野生型I₄₃₁S₄₃₆A₄₃₇K₅₄₀A₅₈₁A₆₁₃（2.2%，2/90），单基因突变型I₄₃₁A₄₃₆A₄₃₇K₅₄₀A₅₈₁A₆₁₃（5.6%，5/90）、I₄₃₁S₄₃₆G₄₃₇K₅₄₀A₅₈₁A₆₁₃（66.7%，60/90），双重突变型I₄₃₁A₄₃₆G₄₃₇K₅₄₀A₅₈₁A₆₁₃（10.0%，9/90）、I₄₃₁S₄₃₆G₄₃₇E₅₄₀A₅₈₁A₆₁₃（3.3%，3/90），三重突变型V₄₃₁A₄₃₆G₄₃₇K₅₄₀A₅₈₁A₆₁₃（8.9%，8/90）、I₄₃₁A₄₃₆G₄₃₇K₅₄₀G₅₈₁A₆₁₃（1.1%，1/90）和I₄₃₁A₄₃₆G₄₃₇K₅₄₀A₅₈₁S₆₁₃（2.2%，2/90）。89份恶性疟原虫样品的Pfdhfr和Pfdhps基因同时测序成功，其中84例（94.4%）同时发生双基因突变，四重突变体I₅₁R₅₉N₁₀₈-G₄₃₇占比最高（64.0%，57/89）。 结论 自赤道几内亚输入的恶性疟原虫样品中检出多个PfK13基因突变位点，其中M476I和P574L已被证实与青蒿素类药物抗性相关；随着氯喹的停用，与青蒿素配伍药物抗性相关的Pfcrt和Pfmdr1基因突变率呈下降趋势；恶性疟原虫对磺胺多辛-乙胺嘧啶药物抗性水平多为“部分抗性”，未检出“超级抗性”样品。

华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构观察

李晓芹, 赖雅诗, 陈豫, 吕嘉慧, 韦帅, 张立林, 何姗姗, 石云良, 李艳文

2023, 41(5):  601-608.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.012

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目的 利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构进行观察和分析。 方法 取华支睾吸虫阳性麦穗鱼，去除头、鱼鳞和内脏，称重后绞碎，按1 g∶10 ml比例加入人工消化液（成分为0.6 g胃蛋白酶，100 ml生理盐水，1 ml浓盐酸），于37 ℃消化过夜后反复过滤，体视显微镜下分离成熟囊蚴。加入0.025%胰蛋白酶溶液（pH = 7.4），37 ℃孵育约3 min，将脱囊后尾蚴、未完全脱出后尾蚴、外形较完整囊蚴及脱下空囊分开收集，使用3%戊二醛与1%四氧化锇固定制样。样品使用50%、70%、80%、90%、100%乙醇逐级浸泡脱水（每级10 min，100%乙醇脱水重复3次），100%六甲基二硅烷浸泡3次（每次10 min），干燥后镀膜喷金，使用扫描电子显微镜观察样品；按50%、70%、90%乙醇、1∶1混合液（90%乙醇∶90%丙酮）、90%、100%丙酮逐级脱水（每级10 min，100%丙酮脱水重复3次），依次于丙酮与包埋剂（环氧树脂618）1∶1、1∶3混合液与全包埋剂中浸泡后聚合处理，修块、切片、醋酸铀-柠檬酸铅双重染色，使用透射电子显微镜观察样品。 结果 扫描电镜下可见囊蚴外观出现了局部膨胀或凹陷、褶皱及塌陷、囊壁内外层分离；脱囊形成的线状裂口长、边缘平整，未能脱出的后尾蚴被软塌的囊壁包裹，其上皮棘刺穿囊壁；脱囊后尾蚴背、腹面遍布体棘，腹吸盘明显大于口吸盘，口、腹吸盘内壁结构不同；排泄囊内填满大小不一圆球形排泄颗粒。透射电镜下显示，脱囊后尾蚴体壁为合胞体结构，由外向内可见皮层外质膜下为电子致密的颗粒状基质，基质向表面形成突起，基质内含许多分泌颗粒及大小不等囊泡；皮棘根部从基质膜发出，穿过基质从皮层表面穿出；基层厚度差异较大，内含多个高电子密度分泌小体；外环肌和内纵肌发达，深入到细胞层，经胞质管运送的物质在远端形成囊泡；皮层细胞间物质发达，充满杂乱分布的管状、大小不等的囊泡结构及线粒体。 结论 囊蚴凭借发达的肌肉组织剧烈运动，在脱囊中起积极作用；皮棘有助于后尾蚴尽快摆脱软化囊壁的包裹；囊内后尾蚴可能借助运动触碰囊壁方式使皮层分泌物可直接作用于内壁，发挥化学性软化内壁作用来协助脱囊。

基于文献计量分析的蜱及蜱传疾病研究领域发展趋势

费思伟, 赵翰卿, 尹静娴, 孙芷珊, 郭晓奎, KASSEGNE Kokouvi, 周晓农

2023, 41(5):  609-618.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.013

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目的 通过文献计量，比较分析国内外近20年蜱及蜱传疾病研究的现状、热点和发展前景，为我国蜱及蜱传疾病研究的发展提出建议。 方法 在中国学术期刊全文数据库（CNKI）和科学引文索引数据库（WoS）检索2003年1月1日至2022年12月31日有关蜱及蜱传疾病文献，使用CiteSpace6.2.R2对关键词、作者、机构等进行可视化分析。 结果 经过筛选后纳入中文文献944篇，英文文献27 428篇。国内外蜱及蜱传疾病主题文献量均呈逐年增长的趋势，英文文献数远超过中文文献。国内研究热点为森林脑炎、莱姆病、非洲猪瘟、长角血蜱、草原革蜱等；国外研究热点为莱姆病、森林脑炎、埃立克体病、无形体病、蓖子硬蜱、微小扇头蜱等。国内外研究热点整体方向一致，但又各有不同的侧重点。国内研究前沿依旧侧重于森林脑炎、巴贝虫病、非洲猪瘟等疾病，并逐渐将分子技术应用于蜱传病原体检测等；国外研究前沿侧重于分子检测、疫苗、复合感染诊断等。 结论 近20年，蜱及蜱传疾病造成的疾病负担越来越重，国内外均在加强该领域的研究，将多学科前沿技术和One Health（全健康）理念应用于蜱及蜱传疾病的防控。我国在该领域的研究虽然起步较晚，但研究水平不断提升，处于世界前列。但我国的研究热点及发展趋势与国外相比，仍需扩大先进技术的应用、完善与其他各国研究机构的合作网络，以全健康理念为防治我国蜱及蜱传疾病提供新思路。

综述

疟原虫有性阶段转录调控的研究进展

梁柯嘉, 刘聪, 李彦霖, 李小鸽, 刘彦, 李贞魁

2023, 41(5):  619-624.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.014

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疟疾是由疟原虫感染所致的传染性疾病。疟疾的传播依赖于疟原虫在脊椎动物和按蚊两个宿主内的交替发育。疟原虫有性配子体阶段是其从脊椎动物传递至按蚊的唯一阶段。疟原虫的有性转化、有性发育和配子发生对疟原虫的传播起重要作用。深入了解疟原虫有性阶段的基因表达及相关调控机制，有助于筛选新的抗疟药物或疫苗靶点。本文对疟原虫有性阶段基因表达转录调控的研究进展进行综述，以期为阻断疟疾传播提供参考。

蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制分子的结构与功能研究进展

刘岳青, 马林源, 陈开廷, 高金亮, 王鹏

2023, 41(5):  625-630.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.015

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蜱是一类体外吸血寄生虫，在吸血过程中蜱会向宿主体内释放多种抗凝血物质以保证血液的供应。其中含Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂在抗凝血作用中占主要地位。不同的Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂具有相似的保守序列，但总体结构不同，在凝血级联中通过抑制丝氨酸蛋白酶类的凝血因子而阻断下游凝血因子的活化，以达到抑制凝血的效果。蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂在凝血系统中的靶点繁多且抑制机制各异。本文对该类蛋白酶抑制剂的抗凝靶点及作用机制进行归纳，有助于抗凝和抗血栓药物的研发，同时进一步解释蜱与宿主间的相互作用以及蜱源抗凝药物的药理作用，为预防蜱对宿主的侵害提供参考资料。

研究简报

芽囊原虫体外培养特性的研究

原慧真, 李栋梁, 程书琪, 菅复春

2023, 41(5):  631-635.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.016

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探究体外培养的芽囊原虫的形态、体外增殖规律及不同温度保存的降解情况。从腹泻患者芽囊原虫阳性粪便中分离芽囊原虫，在IMDM培养基中培养，观察虫体形态和生殖方式。采用显微镜计数法和荧光定量PCR法（qPCR）测定芽囊原虫18S小亚基核糖体DNA（SSU rDNA）的拷贝数分析体外培养芽囊原虫的增殖情况，绘制增殖曲线，分析两种方法的相关性。芽囊原虫分别置4 ℃、-20 ℃、-80 ℃保存，第1~7天和第1~5周，提取虫体DNA，qPCR法检测芽囊原虫SSU rDNA，分析芽囊原虫的降解情况。形态学研究结果显示，IMDM培养基培养的芽囊原虫，可观察到空泡形、颗粒形、阿米巴形和包囊等4种常见形态和分裂生殖、出芽生殖和胞内生殖等3种生殖方式。芽囊原虫体外培养的第3~7天为快速增长期，第7天虫体密度达到峰值，显微镜计数和qPCR法测定结果分别为2.5 × 10⁶个/ml和1.1 × 10⁶拷贝/μl。相关性分析显示，显微镜计数和qPCR法测定结果绘制的增殖曲线的皮尔逊相关系数为0.95，呈高度相关。在4、-20和-80 ℃保存第7天，芽囊原虫SSU rDNA拷贝数分别为（2.75 ± 0.20）× 10⁴、（6.84 ± 1.33）× 10⁴、（1.39 ± 0.06）× 10⁵ 拷贝/μl，为第1天拷贝数[（2.36 ± 0.06）× 10⁵、（2.39 ± 0.06）× 10⁵、（2.23 ± 0.21）× 10⁵ 拷贝/μl）]的11.6%、28.3%和63.6%，差异有统计学意义（F = 130.67，P < 0.05）；在4、-20和-80 ℃保存第5周时，芽囊原虫SSU rDNA拷贝数分别为（3.77 ± 0.23）× 10⁴、（4.37 ± 0.59）× 10⁴、（3.86 ± 0.26）× 10⁵ 拷贝/μl，为第1周拷贝数[（2.23 ± 0.21）× 10⁵、（2.23 ± 0.21）× 10⁵、（2.23 ± 0.21）× 10⁵ 拷贝/μl]的2.98%、3.41%和28.74%，差异有统计学意义（F = 500.51，P < 0.05）。体外培养的芽囊原虫高峰期虫体形态多样，显微镜计数法和qPCR法均可用于芽囊原虫的定量，芽囊原虫在4、-20 和-80 ℃保存均会发生降解，-80 ℃保存的降解程度小于4、-20 ℃。

2015—2022年江苏省棘球蚴病网络报告病例流行病学特征分析

倪碧娴, 徐祥珍, 张强, 唐凤, 张嘉尧, 茅范贞, 戴洋, 刘耀宝, 曹俊

2023, 41(5):  636-639.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.017

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通过中国疾病预防控制信息系统收集2015—2022年江苏省棘球蚴病报告病例资料并进行个案流行病学调查，选择既往疑似本地病例集中出现的溧阳市及宜兴市2个棘球蚴病重点地区开展中间宿主、终末宿主感染情况调查，每年在两市屠宰场抽取100~200份羊脏器样品，采用内脏剖检法检查羊棘球蚴感染情况，采集1~3个行政村不少于100只家犬的粪样，ELISA检测犬粪棘球绦虫抗原。采用PASW 18.0对报告病例的时间、地区、人群分布、诊疗情况和中间宿主、终末宿主监测结果等进行描述性分析。结果显示，2015—2022年，江苏省累计报告棘球蚴病病例29例，其中确诊病例占62.07%（18/29），临床诊断病例占37.93%（11/29）。疑似本地感染病例共14例，外地输入性病例共15例。输入性病例中12例来源于新疆，2例来源于西藏，1例来源于巴基斯坦。常州市报告病例数最多，为13例（其中10例为溧阳市的疑似本地感染病例）。报告的29例病例中，男性、女性报告病例数分别占34.48%（10/29）和65.52%（19/29）；40~60岁报告病例数最多，占51.73%（15/29）；职业以农民为主，占41.38%（12/29）。报告病例均为细粒棘球蚴病，上腹部不适等症状出现最多，占51.72%（15/29），主要寄生部位为肝（93.10%，27/29）。75.86%（22/29）的病例接受了手术治疗。终宿主犬棘球绦虫粪抗原阳性率为0.74%（15/2 028），且在其中的2份犬粪中发现了疑似棘球绦虫虫卵。2015—2022年江苏省每年均有棘球蚴病病例报告，除输入病例外，还存在疑似本地感染病例，局部地区可能存在棘球蚴病传播链，后续应强化棘球蚴病监测，针对重点地区和重点人群积极开展棘球蚴病筛查和健康教育工作。

海口市湿地公园褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染情况调查

黄梦宇, 陈帝坤, 陈慧儒, 范梦培, 柳俊有, 权云帆

2023, 41(5):  640-643.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.018

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为了解海口市湿地公园褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫情况，分别于2021、2022年3—7月采集海口市某湿地公园两岸的公共绿地和乱石下的螺类并鉴定螺种，鉴定为褐云玛瑙螺的螺进行压片后镜检肺囊，“肺检法”检测褐云玛瑙螺的广州管圆线虫感染情况。提取阳性螺广州管圆线虫基因组DNA进行PCR扩增核糖体大亚基rRNA基因，测序后进行BLAST比对。2021—2022年从调查点共采集到褐云玛瑙螺207只，其中23只广州管圆线虫阳性，阳性率为11.11%（23/207）。PCR扩增结果显示在约400 bp处有特异性条带，符合预期大小。BLAST比对结果显示，PCR扩增产物测序结果与NCBI基因库中广州管圆线虫基因序列（GenBank序列号：AY295821.1、FM207759.1、AM039758.1和ON747308.1）的一致性为98.49%~99.75%。结果提示该湿地公园存在广州管圆线虫阳性的褐云玛瑙螺，接触、进食生或半生的螺肉存在较高的感染风险。

病例报告

脑室型脑囊尾蚴病伴脑积水1例

刘文虎, 黄铭, 梁金, 刘建雄, 温兆孟, 马少波

2023, 41(5):  644-646.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.019

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患者，男，53岁，农民，甘肃宕昌人。2021年11月19日因“头痛、头晕伴恶心、呕吐1周”就诊于甘肃省人民医院神经内科门诊。入院颅脑CT平扫示透明隔结节状稍高密度灶，头颅MRI示脑室轻度扩张。行腰椎穿刺术，颅内压180 mmH₂O（1 mmH₂O = 9.779 Pa）；取脑脊液进行检测，总蛋白0.74 g/L。次日再行腰椎穿刺术，颅内压为300 mmH₂O，遂转至神经外科作进一步治疗。患者颅压高，呈嗜睡状态，唤醒后不能正确对答，复查CT提示侧脑室扩张，考虑脑积水形成，存在脑疝风险。患者近年来有食未熟肉史，有肝棘球蚴病史。为降低患者颅压，11月26日行第1次脑室穿刺引流术，术后予重症监护。期间血清学检查提示猪囊尾蚴IgG抗体和弓形虫IgG抗体阳性，予吡奎酮（400 mg/8 h）和阿苯达唑（0.4 g/d）治疗3个疗程（7 d/疗程，疗程间隔5 d）。为改善患者脑积水症状，12月13日行第三脑室造瘘术（ETV），术后予驱虫治疗的同时行腰大池引流，但治疗效果不佳。12月28日和2022年1月11日行第2、3次脑室穿刺术以降低颅内压，术后驱虫治疗的同时予替加环素（50 mg/12 h）和舒普深（3 g/8 h）抗感染。1月25日患者颅内感染指标转阴，增强颅脑MRI未见明显脑囊尾蚴病灶。考虑堵管概率小，1月27日行脑室-腹腔分流术，术后患者意识清楚，复查头颅CT示脑室积水较前明显改善。患者于2月11日出院，出院时患者神志清楚，无明显头晕头痛、恶心呕吐和癫痫等症状。出院3个月后随访，患者病情恢复良好，生活可自理。

结肠小袋纤毛虫感染1例

王登辉, 张艳, 聂蔷, 刘红威

2023, 41(5):  647-649.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.020

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患者，男，87岁，农民，河南永城人。患者自述于2023年6月25日无明显诱因出现纳差、食欲下降，伴有腹泻（4~5次/d）和低热（体温37.5 ℃）。就诊于当地社区医院，未予详细检查，输液（具体药物不详）治疗后无好转，于7月5日转诊至河南省永城市中心医院。患者长期务农，家中饲养猫、犬等动物，无猪饲养史及密切接触史，无猪粪施肥，无饮用生水史。入院查体：体型消瘦，心肺听诊无明显异常，腹部平软，未见胃肠型及蠕动波，未见腹部静脉曲张，肝脾肋下未触及，下腹部有压痛，其余部位无压痛及反跳痛，移动性浊音阴性，肠鸣音活跃，未闻及气过水声。血常规示：白细胞计数11.9 × 10⁹/L，红细胞计数4.11 × 10¹²/L，血小板计数358 × 10⁹/L，血红蛋白119 g/L，血钾3.13 mmol/L，肝功能白蛋白32.5 g/L。粪常规示：墨绿色稀便，隐血试验阳性，未见红细胞、白细胞，未检出寄生虫或虫卵，粪样培养无异常。行全腹部CT平扫+增强，示胆囊体积增大，肝门区胆管、胆总管及胰管稍扩张，胃底近贲门处胃壁稍增厚，直肠、乙状结肠肠壁弥漫性增厚、水肿。予以补液、维持水电解质平衡、纠正电解质紊乱治疗，同时口服小檗碱片（每次0.1 g，3次/d）、蒙脱石散（每次3 g，3次/d）、双歧杆菌（每次1 g，3次/d，与蒙脱石散间隔2 h服用），患者排便次数逐渐减少，逐渐转为黄色软便。7月11、12日粪样经显微镜下观察，均检测到疑似结肠小袋纤毛虫包囊，经永城市疾病预防控制中心会诊确认为结肠小袋纤毛虫包囊。调整为口服小檗碱（每次0.1 g，3次/d）和甲硝唑片（每次0.2 g，2次/d），继续予营养支持治疗。7月13日，患者排便已转为每日1次，黄色软便，镜检未见寄生虫。7月18日，患者经综合治疗后痊愈出院，随访观察显示预后良好。

肝毛细线虫感染1例

张丽, 缪峰, 申艳梅

2023, 41(5):  650-652.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2023.05.021

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患者，女，45岁，农民，山东省菏泽人。2020年6—7月在河南务工期间，无明显诱因出现反复持续高热，就诊于当地医院，经验性予左氧氟沙星、哌拉西林他唑巴坦等治疗，症状无好转。影像学检查示肝脏肿大，未见明显占位，肝脏穿刺活检组织病理，疑似寄生虫感染但未能鉴定虫种。8月12日转诊至山东第一医科大学附属消化病医院。入院查体：反复持续高热（最高体温达42 ℃），精神差；血常规示嗜酸粒细胞5.49 × 10⁹/L↑，血红蛋白93 g/L↓；粪样镜检未见寄生虫虫卵。患者有饮用生水、吃剩饭剩菜的习惯。居住环境卫生条件差，常有大鼠出入。捕获大鼠并解剖，可见大鼠肝脏表面有多灶黄色小斑片状及颗粒状肝损伤，病理切片可见肝脏实质大量虫卵聚集，另见成虫横断面。取患者血样，ELISA检测血清抗体，结果示仅抗旋毛虫抗体呈弱阳性。腹部B超示肝脏肿大，密度欠均匀。调取外院肝脏穿刺组织病理切片复阅，于肝实质内查见数灶少量寄生虫卵，周围淋巴细胞及大量嗜酸粒细胞浸润，局部可见多核巨噬细胞吞噬虫卵形成的肉芽肿性炎。患者肝组织中的虫卵和大鼠肝组织中的虫卵形态相同，经鉴定均为肝毛细线虫虫卵。予口服阿苯达唑片20 mg/（kg•d），72 h后体温降至正常范围，服药7 d后，无明显不适，出院。1个月后患者回医院随访，未再出现发热症状，恢复良好。

消息

《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》2024 年征稿启事

2023, 41(5):  653-653. 

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