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    1. 基于RPA-CRISPR/Cas12a技术的日本血吸虫特异性核酸片段快速可视化检测方法的建立和应用评估
    徐国磊, 冯延叶, 胡薇
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (5): 608-614.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.05.007
    摘要650)   HTML23)    PDF(pc) (2051KB)(2117)    收藏

    目的 基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术和簇状规则间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR/Cas12a)技术,建立日本血吸虫特异性核酸片段的快速可视化检测方法,并初步评价其应用价值。 方法 以SjCHGCS20(GenBank:FN356222.1)为靶标序列,设计RPA引物、单链DNA(ssDNA)报告探针和CRISPR RNA(crRNA)序列,优化RPA反应体系中T4重组酶Y、T4重组酶X、T4单链结合蛋白和肌酸激酶的浓度以及RPA反应的温度和时间。建立RPA-CRISPR/Cas12a一管式方法:将优化的RPA反应体系、矿物油和Cas12a切割反应体系放入反应管中,采用优化的反应条件进行RPA扩增后,混合RPA反应产物和Cas12a切割反应体系,Cas12a切割反应后在蓝光割胶仪照射下观察结果,能观察到明亮的绿色荧光则反应产物呈阳性。以100、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6 ng的日本血吸虫成虫基因组DNA为模板进行RPA-CRISPR/Cas12a检测,评价该方法的敏感性;以1 ng日本血吸虫、曼氏血吸虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫的基因组DNA为模板进行RPA-CRISPR/Cas12a检测,评价该方法的特异性。取日本血吸虫DNA终浓度为0.2、2、20、200 ng/ml的模拟阳性血清和感染日本血吸虫后第3、7、14、21、28、35和42天小鼠的血清,提取DNA后进行RPA-CRISPR/Cas12a检测,评价该方法的检测效果。 结果 优化的RPA反应体系中,T4重组酶Y、T4重组酶X、T4单链结合蛋白和肌酸激酶的终浓度分别为50、440、200和120 ng/μl;优化的RPA反应条件为40 ℃ 30 min。建立的RPA-CRISPR/Cas12a方法敏感性评价结果显示,当日本血吸虫成虫基因组DNA含量≥ 10-5 ng时反应产物呈阳性;特异性评价结果显示,仅以日本血吸虫成虫基因组DNA为模板的反应产物呈阳性,以曼氏血吸虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫基因组DNA为模板的反应产物均呈阴性。日本血吸虫DNA终浓度为2、20、200 ng/ml的模拟阳性血清反应产物呈阳性,终浓度为0.2 ng/ml的模拟阳性血清反应产物呈弱阳性。血吸虫感染后第28和42天的小鼠血清反应产物呈阳性、第35天的呈弱阳性。 结论 本研究建立了检测SjCHGCS20序列的RPA-CRISPR/Cas12a一管式方法,最低检出限为10-5 ng DNA,且与卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫、曼氏血吸虫等基因组DNA均无交叉反应,操作简单、反应迅速、特异性高、可借助蓝光激发裸眼观察结果,具有较好的现场检测潜力。

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    2. 棘球绦虫和棘球蚴病的简明认知历史
    王旭, 王莹, 刘白雪, 张凯歌, 邓雪莹, 沈玉娟, 王正寰, 曹建平, 韩帅
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (3): 372-383.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.03.014
    摘要558)   HTML32)    PDF(pc) (1520KB)(1471)    收藏

    棘球蚴病是一类严重危害人群健康和经济发展的人兽共患寄生虫病,主要由棘球绦虫的幼虫在中间宿主体内寄生和发育所导致。目前的研究进展显示,全球范围内被认定的棘球绦虫包含9个有效自然种,可导致4种类型的棘球蚴病。这种共识的认知过程伴随着研究方法和科学技术的发展,持续了超过两千年的时间。本文通过汇总和梳理参考资料,介绍了人类对于棘球绦虫和棘球蚴病的探索、识别和认知的整个过程,其中几个标志性事件是:1801年Rudolphi建立了棘球绦虫属,之后在全球范围内陆续发现了多个棘球绦虫物种;1953年Rausch基于生物学特征对棘球绦虫属进行重新分类,逐渐演变出棘球绦虫的亚种概念及其分类法;1967年Rausch提出棘球绦虫的株系概念,并在20世纪90年代被Bowles通过分子生物学方法加以证实;2013年Nakao提出系统发育物种的概念,棘球绦虫被修订为9个有效自然种,并沿用至今。此外,自1908年开始,我国先后报道了5种棘球绦虫,其中包括青藏高原地区特有的石渠棘球绦虫。本文系统性地回顾了棘球绦虫和棘球蚴病的认知历史全貌,为进一步了解棘球绦虫分类学研究进展提供了丰富的历史资料。

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    3. 旋毛虫与旋毛虫病的若干术语释义
    崔晶, 王中全
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (4): 427-432.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.04.001
    摘要365)   HTML22)    PDF(pc) (1221KB)(1039)    收藏

    旋毛虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。在研究与教学工作中,一些旋毛虫和旋毛虫病术语(包括拉丁名和中文名)时常令人感到困惑。目前的相关教材与专著中尚未有这些术语的完整释义。本文对旋毛虫与旋毛虫病的若干术语进行释义,旨在为我国旋毛虫与旋毛虫病的教学与防治研究提供参考。

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    4. 白蛉携带病原体及其肠道微生物的研究进展
    崔蕾, 方圆, 周正斌, 何雅琦, 张仪
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2025, 43 (1): 129-134.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2025.01.020
    摘要529)   HTML10)    PDF(pc) (634KB)(1025)    收藏

    白蛉作为多种病原体的传播媒介具有重要的流行病学意义。白蛉肠道内定植着大量的微生物群落,对白蛉及其携带病原体的繁殖和生长发育有着重要影响。本文综述了白蛉携带病原体的种类和肠道微生物的组成,并揭示了白蛉-病原体-肠道微生物之间的相互关系。肠道微生物不仅能直接抑制病原体的感染和传播,也可通过参与白蛉的免疫应答和防御机制,间接改变其感染和传播病原体的能力。

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    5. 去氢骆驼蓬碱联合rad51抑制剂对细粒棘球蚴体外作用及DNA损伤水平的影响
    巩月红, 潘美驰, 孙佳佳, 马瑞佳, 吾斯曼江·艾买提, 赵一聪, 赵军, 王建华
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (6): 726-736.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.06.006
    摘要334)   HTML16)    PDF(pc) (4492KB)(925)    收藏

    目的 探讨去氢骆驼蓬碱联合rad51抑制剂(RI-1)对细粒棘球蚴体外作用及DNA损伤水平的影响。 方法 从绵羊肝脏的棘球蚴包囊中收集细粒棘球蚴,随机分组,各组分别用去氢骆驼蓬碱(0、20、30、40、50、100 μg/ml)与RI-1(0、5、10、20、40、80 μg/ml)培养5 d,0.1%亚甲基蓝染色计算存活率,选择接近去氢骆驼蓬碱抗细粒棘球蚴半抑制浓度组别的浓度为固定浓度,分别以去氢骆驼蓬碱与RI-1比例分别为40∶5、40∶10、40∶20的混合药物干预细粒棘球蚴,筛选最佳协同比例。设置去氢骆驼蓬碱和RI-1混合药物组,同浓度单独作用的去氢骆驼蓬碱组和RI-1组,并设置阳性对照组(添加阿苯达唑亚砜)与空白对照组,观察干预3 d后细粒棘球蚴与囊泡形态。DCFH-DA法检测各组干预后细粒棘球蚴活性氧含量;各组进行彗星实验(阳性对照为阿霉素),分析并测定Olive尾矩;试剂盒检测药物干预后细粒棘球蚴氧化应激水平及Caspase-3含量,以及三磷酸腺苷(ATP)和乳酸脱氢酶(LDH)含量;qRT-PCR反应检测DNA损伤修复相关基因的mRNA相对表达水平。 结果 0、20、30、40、50、100 μg/ml的去氢骆驼蓬碱干预5 d后细粒棘球蚴存活率分别为(94.67 ± 1.25)%、(83.00 ± 3.27)%、(64.67 ± 3.86)%、(55.33 ± 3.40)%、(29.67 ± 2.49)%、(9.33 ± 1.70)%,0、5、10、20、40、80 μg/ml的RI-1干预5 d后细粒棘球蚴存活率分别为(94.33 ± 0.94)%、(70.00 ± 2.94)%、(55.67 ± 3.86)%、(30.00 ± 5.09)%、(2.67 ± 1.25)%、0。以40 μg/ml∶10 μg/ml作为混合药物最佳协同比例干预细粒棘球蚴3 d后,混合药物组存活率为(48.67 ± 2.62)%,与空白对照组[(96.33 ± 1.25)%]、阳性对照组[(91.67 ± 1.25)%]、去氢骆驼蓬碱组[(72.67 ± 4.50)%]相比均下降(F = 78.85,P < 0.01;F = 437.92, P < 0.05;F = 42.49,P < 0.01)。混合药物组虫体结构塌陷,形态破坏严重,虫体显著缩小且表皮层呈现虫蚀样改变。混合药物组活性氧平均荧光强度(45.71 ± 1.52)与空白对照组(3.40 ± 0.55)、阳性对照组(12.98 ± 0.67)、去氢骆驼蓬碱组(39.79 ± 1.11)相比均增强(F = 339.795、773.96、76.99,均P < 0.01)。混合药物组Olive尾矩值(17.73 ± 1.11)高于空白对照组(0.03 ± 0.02)、阳性对照组(6.46 ± 0.56)和去氢骆驼蓬碱组(8.80 ± 0.61)(F = 230.32、165.59、151.44,均P < 0.01)。混合药物组总超氧化物歧化酶(SOD)含量为(0.71 ± 0.07)U/mg,与空白对照组[(2.32 ± 0.24)U/mg]、去氢骆驼蓬碱组[(1.26 ± 0.12)U/mg]相比均降低(F = 39.57、 15.74,均P < 0.01);混合药物组丙二醛(MDA)含量为(0.62 ± 0.03)mmol/mg,与空白对照组[(0.82 ± 0.05)mmol/mg]、去氢骆驼蓬碱组[(0.70 ± 0.03)mmol/mg]相比均降低(F = 22.78、28.37,P < 0.01);混合药物组Caspase-3水平为(1.82 ± 0.05)U/mg,与空白对照组[(0.70 ± 0.02)U/mg]、去氢骆驼蓬碱组为[(1.36 ± 0.19)U/mg]相比均升高(F = 26.24,P < 0.01;F = 7.52,P < 0.05)。混合药物组细粒棘球蚴线粒体ATP水平为(112.21 ± 2.72)µmol/ml,与空白对照组[(157.50 ± 5.23)µmol/ml]、去氢骆驼蓬碱组[(123.10 ± 4.73)µmol/ml]相比均降低(F = 60.73,P < 0.01;F = 67.42,P < 0.05)。混合药物组细粒棘球蚴LDH释放量为(1.83 ± 0.09)mU,与空白对照组[(0.70 ± 0.05)mU]相比升高(F = 146.79,P < 0.01),与去氢骆驼蓬碱组[(1.51 ± 0.05)mU]相比差异无统计学意义(F = 62.78,P > 0.05)。混合药物组细粒棘球蚴h2axrad51brca1mre11基因相对表达水平分别为2.34 ± 0.15、1.19 ± 0.14、1.35 ± 0.08、1.43 ± 0.10,与空白对照组(均为1.00 ± 0.00)相比均上调(F = 23.79,P < 0.01;F = 8.96,P < 0.05;F = 30.75,P < 0.05;F = 39.81,P < 0.01)。 结论 去氢骆驼蓬碱联合rad51抑制剂RI-1可增强去氢骆驼蓬碱体外抗细粒棘球蚴的作用,同时增强细粒棘球蚴DNA损伤。

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    6. 转录组测序分析粉尘螨抗辣根素的基因表达与机制
    许昕洁, 李镜, 吴伊可, 杨凤, 单文昕, 章治鼎, 叶长江, 孙恩涛
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2025, 43 (1): 112-118.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2025.01.017
    摘要434)   HTML13)    PDF(pc) (1901KB)(920)    收藏

    目的 通过转录组测序分析辣根素作用后粉尘螨差异表达基因(DEG)的变化及作用机制。方法 将90个熏蒸瓶随机均分为实验组和对照组。每瓶取80只粉尘螨背部朝下置于熏蒸瓶的胶板上,实验组熏蒸瓶中加入0.25 ml/L的辣根素稀释液25 μl,对照组加入石蜡。熏蒸24 h后,每组收集2 000只存活螨。实验组和对照组各重复6次,3次用于测序,3次用于实时荧光定量PCR(qPCR)验证。提取粉尘螨RNA并逆转录为cDNA,构建文库并进行转录组测序。测序数据进行质控组装后与非冗余蛋白(NR)、基因本体功能注释(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)等数据库进行比对。使用edgeR软件进行差异表达分析,对DEG进行GO与KEGG功能注释与富集。选取粉尘螨在辣根素作用后的DEG,进行qPCR验证,使用R软件对qPCR数据进行方差分析。结果 转录组测序获得56 625条转录本,总长度为72 418 610 nt。共获得的39 510条单基因簇,比对到NR数据库中的数量最多,为25 450个,其次分别为直系同源蛋白分组比对(eggNOG)数据库(17 643个)、蛋白质(Swiss-prot)数据库(13 338个)、GO数据库(13 234个)、KEGG数据库(9 445个)。辣根素作用粉尘螨后,共检测到2 719个DEG,其中上调基因1 185个,下调基因1 534个。GO功能注释结果显示,DEG主要与细胞过程、结合与催化活性等功能相关,GO富集分析结果显示,上调基因主要为ATP结合盒转运蛋白G亚家族(ABCG)、细胞色素P450(CYP450)、热休克蛋白、乙酰胆碱受体等;下调基因主要为钙调蛋白、RNA聚合酶等。KEGG注释显示,DEG主要参与运输与分解代谢、信号转导、翻译等过程。KEGG富集分析显示,DEG富集于30条通路,主要富集在核糖体、不同环境中微生物代谢以及次生代谢物的生物合成等通路。qPCR结果显示,实验组UDP-葡萄糖醛酸转移酶(UGT)、多重耐药相关蛋白1(MRP1)基因的相对转录水平分别为1.18 ± 0.22、6.22 ± 0.42,较对照组(0.76 ± 0.30、2.52 ± 1.75)显著上调(F = 11.22、16.83,均P < 0.05);线粒体核糖体相关GTP酶(MTG)的相对转录水平为0.05 ± 0.04,较对照组(1.23 ± 0.62)显著下调(F = 13.95,P < 0.05);均与转录组测序结果一致。结论 辣根素作用后粉尘螨体内多种基因存在表达差异,UGT、CYP450、MRP1、ABCG基因在对辣根素产生抗性或解毒代谢中起重要作用。

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    7. 2024年全国疟疾疫情特征分析
    张丽, 夏志贵, 李石柱
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2025, 43 (2): 162-166.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2025.02.002
    摘要1359)   HTML68)    PDF(pc) (2082KB)(912)    收藏

    收集监测报告管理系统中2024年全国31个省(自治区、直辖市,未包括台湾、香港和澳门地区)和新疆生产建设兵团疟疾流行病学个案调查表,对疟疾疫情特征进行统计分析。2024年全国报告疟疾病例3 157例,较2023年(2 488例)增加了26.9%;其中境外输入性病例3 155例,输血感染病例2例;恶性疟2 008例(占63.6%,2 008/3 157),间日疟798例(占25.3%,798/3 157),卵形疟274例(占8.7%,274/3 157),三日疟65例(占2.1%,65/3 157),混合感染12例(占0.4%,12/3 157)。男女性别比为12.4∶1;30~39岁年龄组的病例最多(占28.3%,895/3 157);以出境务工为主(占69.2%,2 183/3 155)。除西藏自治区和新疆生产建设兵团外,其余30个省份均有疟疾病例报告,病例数位居前5位的省份依次为云南(564例)、广东(246例)、河南(241例)、山东(232例)和四川(220例),累计报告1 503例(占47.6%,1 503/3 157)。全国报告疟疾危重症病例112例(占3.5%,112/3 157),死亡病例15例(占0.5%,15/3 157)。我国已经连续8年无本土原发蚊传疟疾病例报告,但境外输入性疟疾带来的风险持续存在,须提高监测系统敏感性,及时发现、救治病例,减少恶性疟发展为危重症甚至死亡,避免间日疟引起继发传播。

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    8. 蜱源抗凝血蛋白及其在医学领域的潜在价值
    贺晓菲, 高金亮
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (6): 767-775.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.06.012
    摘要317)   HTML6)    PDF(pc) (1241KB)(801)    收藏

    蜱是一种人兽共患的体表吸血寄生虫,其在吸血过程中会触发机体的凝血系统。为逃避宿主防御机制,蜱会分泌多种抗凝血蛋白来调节宿主凝血系统,以维持血液的持续流动。这些抗凝血蛋白多为蛋白酶抑制剂,可与宿主的凝血因子及血小板活性相关分子相互作用,从而有效调节宿主的血液凝固过程。目前已发现大量具有抗凝血活性的蜱源蛋白分子,这些蛋白分子的结构多样,且与宿主体内的目标分子具有较高的特异性和较强的亲和力。基于这些蜱源抗凝分子开发的抗凝药物有望兼具高效抗凝作用和较低的出血风险。本文综述了部分蜱源抗凝血分子的研究进展,讨论了它们的作用机制及潜在的临床应用价值,旨在为新型抗凝药物的研发提供参考。

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    9. 我国重点寄生虫病疫情形势及防控工作重点
    王强, 许静, 夏志贵, 韩帅, 张仪, 钱门宝, 李石柱, 周晓农
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (1): 1-7.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.01.001
    摘要891)   HTML115)    PDF(pc) (1524KB)(769)    收藏

    经过70余年有效防治,我国重点寄生虫病防治工作成效显著,正向控制和消除目标迈进。本文分析了近年来我国血吸虫病、疟疾、棘球蚴病、内脏利什曼病、华支睾吸虫病和土源性线虫病等重点寄生虫病的疫情形势和面临的挑战,提出了下一步工作方向和重点任务,为加快推进全国重点寄生虫病控制和消除进程提供参考。

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    10. 刚地弓形虫感染对小鼠脑组织转录本m6A甲基化修饰的影响
    解晓曼, 孙航, 代莉莎, 朱文菊, 王利磊, 谢环环, 董宏杰, 张俊梅, 王琦, 周贝贝, 赵桂华, 徐超, 尹昆
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (1): 27-35.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.01.004
    摘要401)   HTML31)    PDF(pc) (1494KB)(761)    收藏

    目的 分析刚地弓形虫感染对小鼠脑组织转录本的N6-甲基腺苷(m6A)甲基化修饰水平的影响。方法 20只雌性C57BL/6J小鼠随机分为TgCtwh6感染组(7只)、LHG感染组(7只)和对照组(TgCtwh6感染组、LHG感染组的对照各3只)。TgCtwh6感染组、LHG感染组分别灌胃接种中国Ⅰ型wh6株(TgCtwh6)和中国Ⅲ型LHG株刚地弓形虫感染小鼠脑组织悬液0.2 ml(20个包囊/鼠),对照组灌胃等量的生理盐水。分别在接种后15、30 和45 d,用抽签法随机抽取感染组小鼠各1只,麻醉后处死,取脑组织,于显微镜下分别记录大脑皮层区、海马区和嗅球区的包囊数。感染后45 d每组分别取3只小鼠的全脑组织,提取总RNA,制备基因组文库,进行转录组测序,筛选差异甲基化位点(DML),统计感染组和对照组的mRNA的差异m6A甲基化位点及其所在转录本;对甲基化位点所在转录本进行基因本体功能注释(GO)分析,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,对甲基化差异转录本进行基因集富集分析(GSEA)。选取甲基转移酶样3(METTL3)、肥胖相关蛋白(FTO)和YTH结构域3(YTHDF3)等3种m6A甲基化修饰蛋白基因,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因为内参,实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测其相对转录水平。结果 感染组小鼠均感染成功。感染后45 d,大脑皮层、海马和嗅球的包囊数分别为(5 676 ± 10)、(4 773 ± 9)、(243 ± 10)个。感染组和对照组共检出760 650个甲基化位点,其中GGACA、GGACC、GGACT、ACGAT等4种m6A模体的甲基化水平分别占16.8%(127 923/760 650)、4.6%(35 164/760 650)、3.8%(28 983/760 650)和0.4%(3 122/760 650);共检出高甲基化位点所在转录本127 016条,其中GGACA、GGACC、GGACT和ACGAT所在的转录本分别为71 727、27 754、24 556和2 979条。感染组与对照组小鼠脑组织转录组中ACGAT、GGACA、GGACC、GGACT等4种m6A模体的DML位点总数为9 233,其中高甲基化位点4 832个,低甲基化位点4 851个。GO分析结果显示,DML所在转录本显著富集于生物过程中的细胞过程、细胞组分中的细胞和分子功能中的结合等功能。DML所在转录本的KEGG富集分析结果显示,分子间相互作用网络主要富集在溶酶体、剪接体和多巴胺能突触信号通路等途径中。对生物过程的GO富集分析结果显示,DML所在的转录本中,生物过程相关的部分转录本主要富集于蛋白糖基化、神经元凋亡负调控、蛋白质的入核转运等过程。GSEA分析结果显示,对照组和两个感染组的组间差异甲基化高分富集于成纤维细胞增殖负调控通路和Hippo信号通路相关的转录本子集中,其中筛选出ENSMUST00000105393、ENSMUST00000006523、ENSMUST00000055261和ENSMUST00000038658等4个关键转录本,分别编码共刺激因子配体(ICOSL)、富含半胱氨酸肠蛋白1(CRIP1)、MOB激酶激活剂1A201(MOB1A201)和MOB1A202,与对照组相比,TgCtwh6感染组、LHG感染组的这4个基因表达均上调。qRT-PCR结果显示,TgCtwh6感染组、LHG感染组小鼠脑组织mettl3 mRNA相对表达水平分别为5.47 ± 1.09、1.63 ± 0.06,与对照组(1.01 ± 0.11)比较差异均有统计学意义(t = 4.05、5.03,均P < 0.05);ythdf3 mRNA相对表达水平分别为3.57 ± 0.08、1.80 ± 0.25,与对照组(1.01 ± 0.11)比较差异均有统计学意义(t = 18.95、2.85,均P < 0.05);fto mRNA相对表达水平分别为0.41 ± 0.04、0.60 ± 0.12,与对照组(1.00 ± 0.06)比较差异有统计学意义(t = 7.67、2.99,均P < 0.05);qRT-PCR结果与转录组测序获得的转录趋势一致。结论 弓形虫慢性感染可导致小鼠脑组织转录本m6A甲基化修饰水平升高,并可能通过对icoslcrip1mob1a等关键差异转录本的修饰调控,造成宿主脑组织内与精神行为相关的生物学进程和信号通路的改变。

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    11. 内蒙古全沟硬蜱的鉴定、人工饲养及生活史观察
    孙连阳, 崔浩, 董晓楠, 康佳美, 丁玉林, 习娟, 杨洋, 贺志雄, 刘永宏, 赵丽
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (3): 345-353.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.03.010
    摘要416)   HTML15)    PDF(pc) (3726KB)(637)    收藏

    目的 对采自内蒙古的全沟硬蜱进行形态学和分子生物学鉴定,并通过人工饲养了解全沟硬蜱的发育生活史和生物学特性。 方法 采集自内蒙古自治区东北部的蜱,利用3D超景深显微系统进行形态学鉴定。提取蜱DNA,PCR扩增线粒体12S rDNA和16S rDNA序列。取阳性扩增产物测序后进行BLAST比对,采用邻接法构建蜱线粒体12S rDNA和16S rDNA的系统进化树。以昆明小鼠为供血动物,在温度(25 ± 3)℃、相对湿度70%~90%条件下对蜱进行人工饲养,观察蜱生活史各阶段的时间等生物学特性。卵孵化实验随机选取10只饱血雌成蜱所产的卵各30枚,观察其孵化情况,并计算孵化率。幼蜱蜕皮实验随机选取饱血幼蜱200只,记录其蜕皮情况,并计算蜕皮率。若蜱蜕皮实验随机选取饱血若蜱100只,分为10组,每组10只,观察其蜕皮情况,并计算蜕皮率。将各阶段发育成功率统计后计算得出其综合发育率。 结果 形态学鉴定结果显示,采集的雌性和雄性硬蜱均符合硬蜱属的形态。PCR扩增和测序结果显示,硬蜱DNA扩增出长度为320 bp的12S rDNA序列和长度为455 bp的16S rDNA序列。BLAST序列比对分析显示,雌蜱和雄蜱线粒体12S rDNA序列与全沟硬蜱(GenBank:MF095801.1和JF758624.1)序列相似性最高,分别为99.69%和99.09%。雌蜱和雄蜱线粒体16S rDNA序列与全沟硬蜱(GenBank:MH790201.1和MH790200.1)的序列相似性最高,分别为99.75%和99.50%。进化树分析结果显示,雌蜱和雄蜱均与全沟硬蜱序列聚于同一分支上。人工饲养全沟硬蜱的生活史观察结果显示,饱血雌蜱产卵期为12~17 d,平均产卵期为14.6 d,总计产卵数约1 510~1 970枚/只,平均产卵数约1 817枚/只,日均产卵量约124枚/只;卵经21~28 d孵化为幼蜱,平均孵化期为24.8 d,孵化率为89.7%(269/300);幼蜱吸血期为3~5 d,平均吸血期为4.5 d,饱血幼蜱经18~25 d蜕皮为若蜱,平均蜕皮期为22.7 d,蜕皮率为86.5%(173/200);若蜱吸血期为5~8 d,平均吸血期为6.3 d,饱血若蜱经120~170 d蜕皮为成蜱,平均蜕皮期为157.2 d,蜕皮率为92.0%(92/100);从饱血雌成蜱开始产卵,发育至下一代成蜱平均需要241.6 d,综合发育率为71.4%。 结论 通过形态学和分子生物学鉴定,采自内蒙古的硬蜱为全沟硬蜱。人工饲养获得全沟硬蜱从卵、幼蜱、若蜱、成蜱的生活史及其生物学特征。

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    12. 我国外来入侵生物福寿螺的物种鉴定
    蒋玲, 赵永波, 李天美
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (3): 384-388.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.03.015
    摘要675)   HTML20)    PDF(pc) (1343KB)(602)    收藏

    福寿螺为我国外来入侵生物之一,是传播广州管圆线虫病的主要中间宿主,目前已在我国广泛扩散,并对入侵地的农林牧渔业生产、生态环境及人体健康造成严重威胁。准确、快速地鉴别福寿螺的种类是开展其入侵机制、扩散规律及种群遗传学等各项研究的基础,并对制定与实施防治策略有重大意义。目前福寿螺的鉴定方式主要基于传统形态学及分子生物学,其中福寿螺的分子鉴定主要基于特异性引物PCR快速鉴别技术和DNA条形码技术,本文对福寿螺的物种鉴定方式进行综述。

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    13. 基于CRISPR/Cas12a系统快速检测蚊种属及其携带的病原体
    李剑勇, 何彪, 李美林, 刘太平, 朱锋, 张健, 徐文岳
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2025, 43 (4): 518-525.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2025.04.011
    摘要189)   HTML10)    PDF(pc) (3106KB)(602)    收藏

    目的 建立基于规律间隔成簇短回文重复序列关联蛋白12a(CRISPR/Cas12a)系统的蚊种属及其携带病原体的快速检测方法,以提升虫媒传染病监测与防控效率。方法 分别取30只1日龄白纹伊蚊幼虫和10只1日龄斯氏按蚊成蚊,提取基因组DNA,重组酶聚合酶扩增(RPA)扩增蚊种特异性序列,以白纹伊蚊DNA为模板,利用斯氏按蚊RPA引物进行扩增,评价RPA扩增的特异性。采用CRISPR/Cas12a系统进行荧光检测,并以斯氏按蚊和白纹伊蚊的CRISPR RNA(crRNA)进行交叉检测,评价该系统的特异性。约氏疟原虫复苏后,取1 × 106个约氏疟原虫通过尾静脉感染小鼠3只,感染后第3天,供100只斯氏按蚊血餐后,取第1、2、3、4、5、10天的蚊中肠,显微镜下观察中肠上的疟原虫卵囊;分别取感染疟原虫后第1、2、3、4、5、10天的斯氏按蚊10只,提取疟原虫基因组DNA,RPA扩增疟原虫18S rRNA片段,并进行CRISPR/Cas12a荧光检测,以10-9、10-10、10-11、10-12、10-13、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18 mol/L的疟原虫DNA为模板进行CRISPR/Cas12a检测,评价该法的最低检出限。合成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型登革病毒种特异性序列,并装载于质粒pUC18。RPA扩增非结构蛋白5后,进行CRISPR/Cas12a荧光检测,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型登革病毒crRNA分别与其他登革病毒质粒模板混合后检测,以评价该方法的特异性。以10-9、10-10、10-11、10-12、10-13、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、10-19 mol/L的质粒为模板,评价该方法的最低检出限。采用Cas12专用核酸检测试纸条可视化检测斯氏按蚊、白纹伊蚊、疟原虫和登革病毒。结果 RPA扩增斯氏按蚊细胞色素c氧化酶亚基1基因片段长89 bp,白纹伊蚊87 bp。CRISPR/Cas12a检测结果表明,白纹伊蚊和斯氏按蚊的基因片段均可激活毛螺菌Cas12a的DNA剪切酶活性,反应5 min后即可产生明显的荧光信号,斯氏按蚊成蚊激发的荧光信号最强,13 min达检测平衡。RPA扩增约氏疟原虫18S rRNA片段长142 bp。CRISPR/Cas12a检测结果表明,斯氏按蚊感染约氏疟原虫第1、2、3、4、5、10天后,均可从蚊体内检测出疟原虫,最低检出限为3.3 × 10-17 mol/L。斯氏按蚊血餐后,第1~4天均未观察到卵囊,第5天可观察到2个卵囊,第10天卵囊的数量和体积均增加。RPA扩增Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ登革病毒非结构蛋白5基因片段长度分别为109、93、147和170 bp。CRISPR/Cas12a检测结果表明,均可从样品中检测到登革病毒序列,5 min即可产生明显荧光信号,最快17 min达到检测峰值;不同血清型登革病毒不会产生交叉反应,最低检出限为2.5 × 10-18 mol/L。Cas12专用核酸检测试纸条可于30 min检测出样品中的靶标序列。结论 本研究建立的基于CRISPR/Cas12a技术的蚊种属及病原体检测方法,具有快速、高灵敏度、高特异性和可视化等优势,可为虫媒传染病的早期预警和传播阻断提供有效检测工具。

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    14. 中国血吸虫病防控历史回顾与展望:从发现到阻断传播
    许静, 王强, 郭苏影, 张利娟, 周晓农, 李石柱
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2025, 43 (2): 155-161.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2025.02.001
    摘要1110)   HTML67)    PDF(pc) (1210KB)(594)    收藏

    我国发现首例现代确诊血吸虫病病例迄今已120年,经过几代人的努力,血吸虫病防治工作取得举世瞩目的成就。至2023年底,全国实现血吸虫病传播阻断目标,78.49%的流行县均达到了消除目标。但受气候变化、自然灾害、人口流动等因素影响,全国要实现血吸虫病消除目标并持续巩固消除成果仍面临挑战。各地应继续坚持“以传染源控制为主、强化重点环境钉螺控制”的综合防治策略,加强监测预警和风险评估,以科技赋能,创新防治手段,强化能力建设,高质量推进消除进程。

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    15. 抗阴道毛滴虫靶点及药物研究进展
    周欣, 黄翠兰
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (1): 105-110.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.01.015
    摘要665)   HTML27)    PDF(pc) (1274KB)(579)    收藏

    阴道毛滴虫主要侵犯人体泌尿生殖系统,是临床常见非病毒性传播病原。口服甲硝唑是目前普遍采用的治疗手段,但长期单一使用造成阴道毛滴虫对甲硝唑的耐药性不断增强,因此迫切需要寻找替代疗法。本文对近年来抗阴道毛滴虫靶点及药物的相关研究进行归纳分析,重点介绍取得的新进展,以期为后续研究和应用提供参考。

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    16. 非洲刚地弓形虫感染和弓形虫病流行概况
    张铃, 刘星卓, 吕芳丽
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2025, 43 (2): 241-251.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2025.02.015
    摘要400)   HTML10)    PDF(pc) (720KB)(557)    收藏

    截至目前,有关非洲的弓形虫感染和弓形虫病的研究报道较有限。本文在PubMed中使用关键词“弓形虫”“弓形虫病”和“非洲”系统检索2015—2024年报道的非洲一般人群的弓形虫感染状况、非洲孕妇的弓形虫感染状况、非洲儿童的弓形虫感染状况和先天性弓形虫病、非洲HIV阳性者/艾滋病患者和肿瘤患者的弓形虫感染状况、非洲的弓形虫虫株基因型和地理分布,以及非洲弓形虫感染的危险因素和感染方式的文献报道,以期为相关研究提供参考。

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    17. 迭宫属绦虫的分类学研究进展
    张玺, 茹丝丝, 龙绍蓉, 刘若丹, 姜鹏, 崔晶, 王中全
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (1): 98-104.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.01.014
    摘要392)   HTML43)    PDF(pc) (1258KB)(532)    收藏

    迭宫属绦虫是一类被长期忽视的医学绦虫类群,其中绦期幼虫裂头蚴可侵入人体多种组织和器官引起裂头蚴病,造成较大危害。迭宫绦虫的分类系统一直较混乱,给相关的科研和教学工作带来困难。本文对迭宫绦虫的系统地位变迁及其分类学研究进展进行系统综述,以期为相关问题提供答案,同时为相关物种的研究提供参考资料。

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    18. 上海市市售海鱼异尖线虫幼虫感染情况调查
    张瑞, 王子, 王佳慧, 李凤琴, 谢庆超, 赵勇
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (1): 117-120.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.01.017
    摘要528)   HTML25)    PDF(pc) (2162KB)(528)    收藏

    为了解上海市市售海鱼异尖线虫幼虫感染情况,2022年在上海市农贸市场、超市和海鲜市场中采集自东海海域捕捞的新鲜海鱼,解剖后分别在内脏和鱼肉中查找疑似异尖线虫的虫体,分别置于光学显微镜和扫描电子显微镜下进行观察,分析海鱼的异尖线虫感染情况。共采集海鱼16种338尾,从6种116尾体内检出异尖线虫1 065条,总感染率为34.3%(116/338),平均感染度为9.2条/尾。其中鮟鱇鱼的感染率最高(11/12),小黄鱼的感染度最高(13.0条/尾)。海鱼异尖线虫感染率从春季到冬季逐渐升高,冬季的感染率和感染度最高,分别为51.1%(46/90)和12.3条/尾。异尖线虫寄生的主要部位是海鱼的肠道和腹腔,分别占检出异尖线虫总数的54.6%(582/1 065)和40.7%(433/1 065)。本研究结果提示,上海市市售海鱼存在异尖线虫幼虫感染,感染率较高的鱼种有鮟鱇鱼、小黄鱼等常见食用海鱼。

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    19. 不同地理种群腐食酪螨遗传变异和遗传分化分析
    乔婷婷, 陶香林, 叶长江, 李政, 周笑妍, 孙恩涛
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (1): 69-77.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.01.010
    摘要381)   HTML25)    PDF(pc) (1522KB)(509)    收藏

    目的 分析不同地理种群腐食酪螨遗传多样性及遗传分化。方法 2018年6—7月在安徽省芜湖市(WH)、阜阳市(FY)和河北省石家庄市(SJZ)、张家口市(ZJK)4个地区的面粉厂和米厂采集螨虫标本并经形态学和细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)分子鉴定筛选出腐食酪螨,PCR扩增腐食酪螨线粒体细胞色素b(Cytb)和核糖体DNA内转录间隔区(ITS)并测序。使用Chromas 2和DNAStar 1.00软件对基因序列进行校对和拼接,使用DnaSP 5.10.00 软件计算各种群单倍型多样性(Hd)和核苷酸多态性(Pi),用MEGA 10.2 软件包分析种群遗传变异和遗传分化指数(Fst)及基因流(Nm),用Arlequin3.1软件计算Tajima’s D值和Fu’s FS值并进行中性检验和分子方差分析,使用Network 10.2基于Median-joining法构建单倍型网络关系图,采用最大似然法(ML)对单倍型构建系统进化树。结果 腐食酪螨呈椭圆形,表皮柔软,乳白色或黄棕色,口器高度变异或退化;本研究获得的cox1与GenBank中腐食酪螨cox1(登录号:LC190838.1)的序列一致性大于98%。腐食酪螨样本Cytb基因长度为372 bp,16个单倍型(H1~H16)中仅H4为共享单倍型(为来自WH和FY种群的9个个体共享),其余为独享单倍型。4个地理种群Hd较高,整体值为0.895(> 0.5),其中以WH种群最高(Hd = 0.867),SJZ种群最低(Hd = 0.464)。基于Cytb序列分析显示腐食酪螨4个地理种群遗传多样性较高(Pi > 0.005);分子方差分析可见腐食酪螨4个地理种群Fst > 0.15(P < 0.05);中性检验结果显示,腐食酪螨Tajima’s D值为-0.737 22,Fu’s FS值为2.336 33(均P > 0.05)。单倍型网络图与系统进化树结果一致,4个地理种群个体相互交织分布,仅ZJK种群个别个体聚为另外一支。ITS序列长度为1 259~1 405 bp,32个单倍型(G1~G2)均为独享单倍型。4个地理种群Hd较高,整体值与分别值为1.000(> 0.5)。基于ITS序列分析显示腐食酪螨4个地理种群遗传多样性较高(Pi > 0.005),Fst > 0.25(P < 0.05);Tajima’s D值和Fu’s FS值分别为2.030 29和3.044 54(均P > 0.05)。单倍型网络图与系统进化树结果一致,WH、FY、SJZ种群单倍型聚为一支,ZJK的单倍型单独聚为一支。结论 腐食酪螨4个地理种群遗传多样性较高,地理种群间存在较大遗传分化,FY种群可能有向WH种群扩张的历史,不同腐食酪螨地理种群间发生局部高水平基因交流,未发现明显地理分布格局。

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    20. 我国啮齿目动物隐孢子虫感染现状
    周珊珊, 姜岩岩, 曹建平
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志    2024, 42 (4): 512-520.   DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2024.04.013
    摘要400)   HTML28)    PDF(pc) (819KB)(508)    收藏

    隐孢子虫是一种在世界范围内广泛分布的人兽共患肠道原虫。隐孢子虫病主要通过粪-口途径进行传播。啮齿目动物是隐孢子虫的重要宿主,且与人类接触密切,是人类隐孢子虫感染的潜在来源之一。研究数据显示,我国23个省份开展了啮齿目动物感染隐孢子虫的调查,且不同来源和用途啮齿目动物隐孢子虫的感染存在差异。本文总结了我国不同地区、来源和用途啮齿目动物感染的隐孢子虫的虫种/基因型和基因亚型分布情况,分析了啮齿目动物感染隐孢子虫对其他动物以及周围环境的影响。考虑到啮齿目动物中报道的隐孢子虫在人、其他动物及其周围环境中也有检出,不能忽视啮齿目对隐孢子虫在人-动物-环境界面中传播的作用。

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