中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (1): 9-37-41.
康巍, 常志广, 陆慧君, 姜宁, 尹继刚, 陈启军*
KANG Wei, CHANG Zhi-An, LIU Hui-Jun, JIANG Ning, YIN Ji-Gang, CHEN Qi-Jun-*
摘要: 目的 克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy antigen-binding ligand, DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A, CSA)黏附能力的差异。 方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株基因组DNA中3个目的片段,将扩增产物与pMD18-T克隆载体连接,经酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,并用组氨酸标签融合蛋白纯化柱(His GraciTrap)纯化,经十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)检测目的蛋白。ELISA检测不同DBL区重组蛋白与CSA的结合情况。 结果 PCR扩增获得目的片段分别为996、859和894 bp,酶切及DNA测序结果均显示重组质粒构建成功,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达并纯化3个DBL区重组蛋白,DBL4区、DBL5区和DBL6区的相对分子质量分别为Mr 439 800,Mr 34 500,Mr 36 000。Western blotting检测结果显示,目的蛋白具有反应原性。ELISA结果显示,不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其他两个DBL区的吸光度(A405值)高(P<0.05),表明DBL5区与CSA的黏附能力较强。 结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白表达成功,DBL5区与CSA的黏附能力较强。