恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体的制备

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (4): 6-216.

恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体的制备

汪俊云,包意芳,杨玥涛,汤林华

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心,上海 200025

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-08-30 发布日期:2005-08-30

Preparation of Monoclonal Antibodies Specific to Lactate Dehydrogenase of Plasmodiun falciparum

WANG Jun-yun,BAO Yi-fang,YANG Yue-tao,TANG Lin-hua

National Institute of Parasitic Diseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Shanghai,200025,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-08-30 Published:2005-08-30

摘要/Abstract

摘要： 目的制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体。方法克隆、表达恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,并以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价,蛋白质印迹法(Western blotting)分析其特异性。结果成功克隆并表达了恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白作为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了15株能高效分泌效价在1∶6 400～1∶51 200特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG1或IgG2。所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白Mr 33 000组分,而与疫区非疟疾发热病人的红细胞组分无交叉反应。结论以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白为免疫源成功制备了能识别天然恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的特异性单克隆抗体。

关键词: 恶性疟原虫, 乳酸脱氢酶, 单克隆抗体

Abstract: Objective To prepare monoclonal antibodies specific to lactate dehydrogenase of Plasmodiun falciparum. Methods The Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase (pLDH) gene was amplified from whole blood of malaria patients by PCR and cloned into expression vector pGEX-3X. Recombinant pLDH protein was expressed and purified, and used for immunizing mice to prepare monoclonal antibodies (McAbs). The McAbs were characterized by Western blotting analysis. Results The Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase gene was amplified and cloned into expression vector pGEX-3X. The recombinant pLDH plasmid was expressed in E.coli) BL-21 cells. 15 cell lines of McAbs with high titer against pLDH were obtained using the recombinant pLDH as immunogen. Western blotting analysis showed that these McAbs recognized a Mr 33 000 of native Plasmodiun falciparum protein without cross-reaction with constituents of red blood cell of febrile patients from endemic area of malaria. Conclusion Fifteen hybridoma cell lines secreting high titer of McAb specific to Plasmodium falciparum LDH were established based on the recombinant pLDH.

Key words: Plasmodium falciparum, Lactate dehydrogenase, Monoclonal antibodies

汪俊云;包意芳;杨玥涛;汤林华. 恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体的制备[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2005, 23(4): 6-216.

WANGJun-yun;BAOYi-fang;YANGYue-tao;TANGLin-hua. Preparation of Monoclonal Antibodies Specific to Lactate Dehydrogenase of Plasmodiun falciparum[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2005, 23(4): 6-216.

[1]	周瑞敏, 纪鹏慧, 李素华, 杨成运, 刘颖, 钱丹, 邓艳, 鲁德领, 赵玉玲, 赵东阳, 张红卫. 河南省自赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 593-600.
[2]	徐少杰, 陈绅波, 陈军虎. 恶性疟原虫重复散布家族基因转录调控的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 374-379.
[3]	邹伟浩, 吴蔚玲, 廖远鹏, 陈敏, 彭鸿娟. 刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 587-593.
[4]	田斌, 廖瑜, 文岚, 肖芳, 张兵, 申晓君. 长沙市122例输入性恶性疟原虫多药抗性基因1拷贝数变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 127-131.
[5]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[6]	李美, 涂宏, 夏志贵, 王真瑜, 周何军. 快速诊断靶蛋白恶性疟原虫富组氨酸蛋白Ⅱ和疟原虫乳酸脱氢酶的热稳定性[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 245-248.
[7]	史善美, 陈军虎. 恶性疟原虫RIFIN蛋白的结构和功能研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 249-255.
[8]	张苍林, 聂仁华, 徐丹, 吕高伟, 王剑, 杨亚明, 邓艳, 刘言, 周红宁. 中缅边境地区恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和PfK13基因多态性与体外药物敏感性相关性的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 580-588.
[9]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 我国恶性疟原虫主要药物抗性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 631-636.
[10]	周水茂, 涂祖武, 杨燕, 陈芳, 贾西帅. 环介导等温扩增检测恶性疟原虫与其他疟原虫的效果评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 423-428.
[11]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 恶性疟原虫抗药性分子标记检测方法研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 490-495.
[12]	李仁清, 王小梅, 孙玉兰, 吕燕宁, 窦相峰, 王全意. 宏基因组学二代测序技术在输入性疟疾诊断中的应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(6): 727-729.
[13]	牟畇珊, 李璐杰, 吴银娟, 李学荣. 疟原虫青蒿素耐药分子机制探索[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(6): 636-642.
[14]	刘纯, NdoumadiambaALFRED, MounzieGouGNONDA. 胶体金恶性疟原虫检测试剂盒在非洲加蓬的临床应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(6): 679-680.
[15]	毛强, 裴福全, 岑咏珍, 刘梦然, 张豪, 邓卓晖. 广东省1例输血性恶性疟病例的实验室检测和溯源调查[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(5): 529-533.