海南恶性疟原虫pfcrt等位基因多态性的单体型研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2007, Vol. 25 ›› Issue (2): 6-108.

海南恶性疟原虫pfcrt等位基因多态性的单体型研究

王安平1;高琪2;顾亚萍2;王善青3;王光泽3;林世干3;蒙锋3

1 常州市疾病预防控制中心，常州 213003； 2 江苏省寄生虫病防治研究所，无锡 214064； 3 海南省疾病预防控制中心，海口 570203

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-04-30 发布日期:2007-04-30

Study on the Haplotypes of pfcrt Polymorphism from Hainan Province

WANG An-ping1;GAO Qi2;GU Ya-ping2;WANG Shan-qing3;WANG Guang-ze3;LIN Shi-gan3;MENG Feng3

1 Changzhou Center for Disease Prevention and Control，Changzhou 213003，China；2 Jiangsu Provincial Institute of Parasitic Diseases, Wuxi 214064, China；3 Hainan Provincial Center for Disease Prevention and Control, Haikou 570203, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-04-30 Published:2007-04-30

摘要/Abstract

摘要： 目的建立恶性疟原虫pfcrt（Plasmodium falciparum chloroquine resistant transporter）等位基因多态性的单体型的研究方法，比较我国海南省与东南亚及非洲地区恶性疟原虫的pfcrt等位基因多态性的单体型的特征。方法来自海南省19份恶性疟滤纸血样提取DNA，通过巢式PCR反应，扩增出包含第72～76、97位密码子的基因片段，根据限制性片段长度多态性（RFLP）分析结果，各选取6份突变型和野生型PCR产物进行DNA测序，检测第72～76、97位密码子序列，从而建立并分析我国海南省恶性疟pfcrt等位基因的单体型。结果 19份滤纸血样本提取的DNA全部扩增出1条195 bp的片段，酶切消化后，有11份出现1条100 bp左右的酶切片段，为野生型pfcrt等位基因，其余8份为1条195 bp的片段，为突变型。基因序列分析发现，野生型pfcrt等位基因的第72～76位密码子单体型为CVMNK，突变型为CVIET，第97位密码子未发现突变。结论我国海南省氯喹抗药性恶性疟原虫pfcrt等位基因第72～76位密码子的单体型与东南亚和非洲地区抗氯喹恶性疟原虫相应单体型一致。

关键词: 恶性疟原虫, 氯喹抗药性, pfcrt基因, 巢式PCR, 单体型

Abstract: Objective To develop a method for comparing the haplotypes of pfcrt polymorphism of Hainan Province with those from other areas of the world. Methods Nested PCR was used to amplify the polymorphic region including codon 72 to 76 and 97 of pfcrt gene. The PCR products were digested by ApoI restriction endonuclease to determine the allelic types. According to the allelic types, 6 products from each of mutant type and wild type were sequenced to analyze the haplotypes of pfcrt polymorphism. Results Bands in size of 195 bp appeared in all 19 samples. After ApoI digestion, 11 samples contained one ApoI site when codon 76 of the pfcrt gene codes for lysine（K76）, which were visualized by the presence of 98 bp and 97 bp restriction fragments. The DNA sequencing revealed that 6 samples of cloroquine resistant P. falciparum carried pfcrt alleles encoding an amino acid haplotype of CVIET （residues 72-76）, and the haplotype of CVMNK was found in other 6 samples with wild type pfcrt gene. Conclusion Haplotypes of pfcrt polymorphism from Hainan were the same as those from southeast Asia and Africa.

Key words: Plasmodium falciparum, Chloroquine resistance, pfcrt gene, Nested PCR, Haplotype

王安平;高琪;顾亚萍;王善青;王光泽;林世干;蒙锋. 海南恶性疟原虫pfcrt等位基因多态性的单体型研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2007, 25(2): 6-108.

WANGAn-ping;GAOQi;GUYa-ping;WANGShan-qing;WANGGuang-ze;LINShi-gan;MENGFeng. Study on the Haplotypes of pfcrt Polymorphism from Hainan Province[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2007, 25(2): 6-108.

[1]	周瑞敏, 纪鹏慧, 李素华, 杨成运, 刘颖, 钱丹, 邓艳, 鲁德领, 赵玉玲, 赵东阳, 张红卫. 河南省自赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 593-600.
[2]	黎玉琼, 于有利, 郜军荣, 刘芸芸, 李红兵, 牛晓昊. 宁夏银川地区奶牛毕氏肠微孢子虫的感染情况与基因型鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 476-479.
[3]	徐少杰, 陈绅波, 陈军虎. 恶性疟原虫重复散布家族基因转录调控的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 374-379.
[4]	田斌, 廖瑜, 文岚, 肖芳, 张兵, 申晓君. 长沙市122例输入性恶性疟原虫多药抗性基因1拷贝数变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 127-131.
[5]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[6]	吴冬妮, 孙凌聪, 张华勋, 万伦, 张娟, 曹慕民, 夏菁. 湖北省输入性卵形疟的实验室检测能力分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(3): 406-409.
[7]	史善美, 陈军虎. 恶性疟原虫RIFIN蛋白的结构和功能研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 249-255.
[8]	张新峰, 刘运强, 张志君, 许艳, 李瑾, 张本光. 山东省泰安市2015—2019年输入性疟疾病例实验室诊断与复核结果分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 129-132.
[9]	张苍林, 聂仁华, 徐丹, 吕高伟, 王剑, 杨亚明, 邓艳, 刘言, 周红宁. 中缅边境地区恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和PfK13基因多态性与体外药物敏感性相关性的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 580-588.
[10]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 我国恶性疟原虫主要药物抗性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 631-636.
[11]	周水茂, 涂祖武, 杨燕, 陈芳, 贾西帅. 环介导等温扩增检测恶性疟原虫与其他疟原虫的效果评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 423-428.
[12]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 恶性疟原虫抗药性分子标记检测方法研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 490-495.
[13]	李仁清, 王小梅, 孙玉兰, 吕燕宁, 窦相峰, 王全意. 宏基因组学二代测序技术在输入性疟疾诊断中的应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(6): 727-729.
[14]	贾丁, 但佳明, 孙燕, 罗静怡, 朱子琦, 张雪萍, 刘海峰, 周紫峣, 马晓平, 彭广能, 钟志军. 四川省奶牛犊牛隐孢子虫流行情况及其分子特性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(4): 422-427.
[15]	王子玥, 杨益超, 陈智平, 石云良. 广西某猴场诺氏疟原虫和田鼠巴贝虫感染情况调查[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(4): 494-496.