恶性疟原虫(海南株)cDNA表达文库的构建及初步鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 1997, Vol. 15 ›› Issue (1): 5-25.

恶性疟原虫(海南株)cDNA表达文库的构建及初步鉴定

王燕妮1,肖谷田2,毕惠祥1,李明1,金丽娟2,李英杰1,谢毅2

1　第一军医大学疟疾免疫研究室　广州5105152　复旦大学遗传工程国家重点实验室　上海200433

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:1997-02-28 发布日期:1997-02-28

CONSTRUCTION AND PRIMARY CHARACTERIZATION OF ERYTHROCYTIC PLASMODIUM FALCIPARUM (FCC/HN) cDNA EXPRESSION LIBRARY

Wang Yanni1, Xiao Gutian2, Bi Huixiang1, Jin Lijuan2, LiMing1, Li Yingjie1, Xie Yi2

1　Department of Malaria Immunology, The First Military Medical University, Guangzhou 5105152　State Key Laboratory of Genetic Engineering, Institute of Genetics, Fudan University, Shanghai 200433

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:1997-02-28 Published:1997-02-28

摘要/Abstract

摘要：

目的: 构建恶性疟原虫cDNA 表达文库。方法: 采用“一步法”提取红内期恶性疟原虫1224μg RNA , 经Oligo (dT) 纤维素柱纯化得到35.84μg poly (A)⁺ mRNA。取10μg mRNA反转录得到1.75μg 平端双链cDNA , 与含EcoRI, NotI, SalI 酶切位点的衔接头连接后, 经分级分离柱纯化回收到200ng 大小主要在500 bp - 7 kb 左右的cDNA 片段。取50ng cDNA 与λgt11噬菌体臂连接后体外包装, 完成建库。并采用PCR 方法初步鉴定该文库。结果: 已构建一个含10⁶个重组子的cDNA 表达文库。结论: 文库容量及插入cDNA 片段的大小适合于进一步研究。

关键词: 恶性疟原虫, 红内期, cDNA 表达文库

Abstract:

AIM: To construct a cDNA expression library from erythrocytic Plasmodium falciparum (FCC/HN). METHODS: 1224 μg total RNA and 35.84 μg poly (A)⁺ mRNA have been successively obtained from the blood-stage Plasmodium falciparum mainly consisting of trophozoites using“single-step method”and by chromatography on oligo-(dT) cellulose. With the reverse transcriptase (M-MLV ) , 10 μg mRNA was synthesized into 1.75 μg blunt cDNA. After the cDNA was ligated to EcoRI (NotI, SalI) adapter and purified by fractionation, 200 ng cDNA of about 500 bp - 7 kb was collected. Of which 50 ng cDNA was ligated into λgt11 phage particles and was packaged with the packagen extract system in vitro. This library was characterized primarily by PCR. RESULTS: A cDNA library containing 10⁶ recombinants has been constructed. CONCLUSION: The capacity of this library and the size of cDNA is suitable for further study.

Key words: Plasmodium falciparum, blood-stage parasites, cDNA expression library

王燕妮;肖谷田;毕惠祥;李明;金丽娟;李英杰;谢毅. 恶性疟原虫(海南株)cDNA表达文库的构建及初步鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1997, 15(1): 5-25.

WangYanni;XiaoGutian;BiHuixiang;JinLijuan;LiMing;LiYingjie;XieYi. CONSTRUCTION AND PRIMARY CHARACTERIZATION OF ERYTHROCYTIC PLASMODIUM FALCIPARUM (FCC/HN) cDNA EXPRESSION LIBRARY[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 1997, 15(1): 5-25.

[1]	郭帅, 何彪, 高源利, 范永铃, 朱锋, 丁艳, 刘太平, 徐文岳. 鼠疟原虫感染大鼠和小鼠的种特异性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 539-545.
[2]	周瑞敏, 纪鹏慧, 李素华, 杨成运, 刘颖, 钱丹, 邓艳, 鲁德领, 赵玉玲, 赵东阳, 张红卫. 河南省自赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 593-600.
[3]	徐少杰, 陈绅波, 陈军虎. 恶性疟原虫重复散布家族基因转录调控的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 374-379.
[4]	田斌, 廖瑜, 文岚, 肖芳, 张兵, 申晓君. 长沙市122例输入性恶性疟原虫多药抗性基因1拷贝数变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 127-131.
[5]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[6]	陈穗林, 刘太平, 徐文岳. 疟疾疫苗研制及其存在的问题[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(3): 283-295.
[7]	史善美, 陈军虎. 恶性疟原虫RIFIN蛋白的结构和功能研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 249-255.
[8]	张苍林, 聂仁华, 徐丹, 吕高伟, 王剑, 杨亚明, 邓艳, 刘言, 周红宁. 中缅边境地区恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和PfK13基因多态性与体外药物敏感性相关性的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 580-588.
[9]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 我国恶性疟原虫主要药物抗性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 631-636.
[10]	周水茂, 涂祖武, 杨燕, 陈芳, 贾西帅. 环介导等温扩增检测恶性疟原虫与其他疟原虫的效果评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 423-428.
[11]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 恶性疟原虫抗药性分子标记检测方法研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 490-495.
[12]	李仁清, 王小梅, 孙玉兰, 吕燕宁, 窦相峰, 王全意. 宏基因组学二代测序技术在输入性疟疾诊断中的应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(6): 727-729.
[13]	程祥云, 刘太平, 陈穗林, 徐文岳. 蛋白激酶9在约氏疟原虫生长发育中的作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(3): 248-253.
[14]	牟畇珊, 李璐杰, 吴银娟, 李学荣. 疟原虫青蒿素耐药分子机制探索[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(6): 636-642.
[15]	刘纯, NdoumadiambaALFRED, MounzieGouGNONDA. 胶体金恶性疟原虫检测试剂盒在非洲加蓬的临床应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(6): 679-680.