目的 探索肠上皮细胞环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激蛋白(STING)在调控微小隐孢子虫感染免疫中的作用机制。 方法 用微小隐孢子虫卵囊感染人结直肠癌细胞系HCT-8细胞(卵囊:细胞2:1),于感染后0、4、8、12、24、36和48 h提取各组细胞总蛋白,利用蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测STING的相对表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)分别建立cGAS和STING敲低的细胞模型并感染微小隐孢子虫虫卵,于感染后24 h用Western blotting检测HCT-8细胞cGAS、STING、TANK结合激酶1(TBK1)、p-TBK-1、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3、核转录因子κB(NF-κB)、p-NF-κB、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的相对表达水平。流式细胞术检测STING敲低前后的细胞凋亡水平。实时荧光定量PCR(qPCR)检测STING敲低前后微小隐孢子虫18S mRNA的相对转录水平。数据采用独立样本t检验进行统计学分析。 结果 Western blotting检测结果显示,微小隐孢子虫感染后4、8、12、24、36和48 h,STING的相对表达水平分别为3.000 ± 0.743、2.756 ± 0.847、2.397 ± 0.701、3.645 ± 0.306、3.773 ± 0.471、3.982 ± 0.468,均高于未感染组(0 h)的1.000 ± 0.039(t = 4.655、3.587、3.448、14.870、10.160、11.000,均P < 0.05)。STING敲低感染HCT-8细胞中,STING、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、p-TBK-1/TBK-1、p-IRF3/IRF3、IFN-β相对表达水平分别为1.024 ± 0.093、1.042 ± 0.160、1.060 ± 0.108、0.665 ± 0.297、0.929 ± 0.207、0.740 ± 0.104,均较感染组(1.757 ± 0.332、2.329 ± 0.336、1.522 ± 0.230、1.339 ± 0.088、1.332 ± 0.036)降低(t = 10.250、3.360、6.231、3.949、3.159、9.362,均P < 0.05)。cGAS敲低感染HCT-8细胞中,cGAS和STING的相对表达水平分别为0.771 ± 0.038和0.696 ± 0.094,均较感染组(1.231 ± 0.074和1.238 ± 0.023)降低(t = 9.608、9.674,均P < 0.05)。流式细胞术检测结果显示,STING敲低感染组细胞的凋亡水平为(18.90 ± 0.75)%,较感染组的(23.72 ± 2.55)%降低(t = 3.141,P < 0.05)。qRT-PCR结果显示,STING敲低感染后细胞中微小隐孢子虫18S mRNA相对转录水平为1.335 ± 0.037,较感染组(1.002 ± 0.071)增加(t = 7.195,P < 0.05)。 结论 cGAS-STING在微小隐孢子虫感染中通过激活TBK1和NF-κB信号通路,参与宿主抗微小隐孢子虫免疫应答。