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    2026年 第44卷 第2期    刊出日期:2026-04-30
    上一期   
    封面和目录
    第44卷第2期封面和目录
    2026, 44(2):  0-0. 
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    相关文章 | 计量指标
    专题报道
    2025年全国疟疾流行病学特征分析
    张丽, 夏志贵, 李石柱
    2026, 44(2):  153-157.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.001
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (2383KB) ( )  
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    收集监测报告管理系统中2025年全国31个省(直辖市、自治区,未包括台湾、香港和澳门地区)和新疆生产建设兵团的《疟疾流行病学个案调查表》,对疟疾病例流行病学特征进行统计分析。2025年全国报告疟疾病例4 314例,较2017年(2 861例)、2021年(799例)、2024年(3 157例)分别增加了50.8%、439.9%、36.6%;死亡病例11例,较2024年(15例)减少4例。恶性疟2 829例(占65.6%,2 829/4 314),间日疟963例(占22.3%,963/4 314),卵形疟372例(占8.6%,372/4 314),三日疟103例(占2.4%,103/4 314),混合感染47例(占1.1%,47/43 14)。境外输入性病例4 308例,非蚊传疟疾病例(输血感染)5例,长潜伏期再燃病例1例(三日疟)。除西藏自治区外,其余30个省份和新疆生产建设兵团均有疟疾病例报告,病例数居前5位的省份依次为云南(678例)、广东(359例)、河南(354例)、湖南(338例)和山东(307例),累计报告2 036例(占47.2%,2 036/4 314)。男女性别比为12.8 ∶ 1,30~39岁年龄组的病例最多(占29.1%,1 255/4 314),出境/入境事由以务工为主(占71.6%,3 086/4 308)。有27个省份报告危重症病例131例(占3.0%,131/4 314),较2024年(112例)增加了17.0%。近4年,我国疟疾疫情呈现持续上升趋势,数千例境外输入性病例给防止输入再传播工作带来压力和挑战。

    论著
    小鼠感染多房棘球蚴不同阶段脾树突状细胞亚群免疫特征变化
    唐娜, 阿依娜尔·吉恩斯, 肖雯颖, 阿比旦·艾尼瓦尔, 孙胜, 葛聪蕙, 王梦颖, 高毅, 胡秋, 李静, 张传山, 王慧
    2026, 44(2):  158-165.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.002
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (4344KB) ( )  
    数据和表 | 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

    目的 探讨多房棘球蚴感染小鼠不同阶段脾树突状细胞(DC)及其亚群的数量、比例和免疫特征变化。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组和感染组,感染组小鼠经肝门静脉注射4 000个多房棘球蚴原头节,对照组小鼠注射等体积生理盐水,分别于感染后2周和24周采集小鼠脾组织,石蜡切片后进行免疫组织化学染色(IHC),观察CD11c阳性细胞在脾组织的定位。提取小鼠脾淋巴细胞,利用流式细胞术检测两组小鼠脾脏中DC及其亚群数量、比例和表面共刺激分子CD40和CD80的表达变化。结果 IHC结果显示,对照组和感染组小鼠脾CD11c阳性细胞在不同感染阶段均主要定位于脾脏白髓边缘区,区域占比的差异无统计学意义(t = 0.473、-1.885,均P > 0.05)。流式细胞术检测结果显示,感染后2周和24周,感染组小鼠脾DC分别占脾淋巴细胞总数的(11.33 ± 2.67)%和(15.24 ± 3.63)%,均低于对照组的(18.08 ± 3.47)%和(22.06 ± 4.58)%(t = 3.449、2.761,P < 0.01、0.05)。对照组和感染组小鼠脾浆细胞样DC(pDC)在感染后2周分别占脾DC的(11.41 ± 3.82)%和(9.71 ± 3.22)%,感染后24周分别占(4.26 ± 1.59)%和(4.85 ± 1.16)%,差异均无统计学意义(t = 0.760、-0.707,均P > 0.05)。对照组和感染组小鼠脾传统DC(cDC)在感染后2周分别占脾DC的(52.38 ± 5.13)%和(35.96 ± 4.31)%,感染组低于对照组(t = 5.479,P < 0.01);在感染后24周分别占(30.46 ± 5.44)%和(32.18 ± 3.22)%,差异无统计学意义(t = -0.654,P > 0.05)。感染组小鼠脾cDC中CD103+CD11b-细胞在感染后2周和24周分别占(14.24 ± 2.29)%和(7.97 ± 1.75)%,均高于对照组的(8.63 ± 0.60)%和(4.50 ± 1.28)%(t = -5.294、-3.681,均P < 0.01);感染组小鼠脾cDC中CD103-CD11b+细胞在感染后2周占(45.74 ± 4.43)%、高于对照组的(38.12 ± 4.58)%(t = -2.672,P < 0.05),在感染后24周占(50.42 ± 6.97)%、低于对照组的(59.06 ± 4.51)%(t = 2.378,P < 0.05)。感染后2周,感染组小鼠脾DC、pDC和cDC中CD40+细胞分别占(13.89 ± 2.96)%、(2.33 ± 0.64)%和(11.10 ± 1.93)%,均低于对照组的(23.98 ± 2.94)%、(3.75 ± 0.93)%和(20.22 ± 2.84)%(t = 5.412、2.818、5.943,P < 0.01、0.05、0.01)。感染后2周,感染组小鼠脾DC和cDC中CD80+细胞分别占(27.78 ± 11.22)%和(19.36 ± 9.64)%,均低于对照组的(44.16 ± 8.11)%和(33.42 ± 7.61)%(t = 2.645、2.559,均P < 0.05);感染后24周,感染组小鼠脾DC和cDC中CD80+细胞分别占(47.22 ± 2.42)%和(31.00 ± 2.56)%,均高于对照组的(29.26 ± 7.88)%和(20.30 ± 7.45)%(t = -5.338、-3.321,均P < 0.01)。结论 多房棘球蚴感染早期,小鼠脾DC和cDC数量减少,CD40和CD80表达下调,提示DC成熟受抑;感染晚期,DC与cDC数量增多,CD80表达增强,反映了感染后期免疫应答状态的演变。

    多房棘球蚴感染小鼠脾1型先天淋巴细胞亚群及其相关因子表达变化
    肖雯颖, 阿比旦·艾尼瓦尔, 葛聪蕙, 唐娜, 孙胜, 王梦颖, 高毅, 阿依娜尔·吉恩斯, 胡秋, 李静, 王慧, 张传山
    2026, 44(2):  166-173.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.003
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (2010KB) ( )  
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    目的 探讨多房棘球蚴感染对小鼠脾脏1型先天淋巴细胞(ILC1)亚群及其相关因子表达水平的影响。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组和感染组,感染组小鼠经门静脉注射3 000个原头节,对照组小鼠注射相同体积的生理盐水。感染24周后,取小鼠脾组织制备石蜡切片,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠脾脏病理变化。提取小鼠脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾ILC1亚群数量和分化状态、免疫检查点受体表达和细胞因子分泌水平。结果 HE染色显示,感染组小鼠脾组织红髓与白髓边缘区模糊,白髓区产生铁血素沉积。流式细胞术检测结果显示,对照组小鼠脾自然杀伤(NK)细胞占脾淋巴细胞总数的(2.52 ± 0.44)%,高于感染组的(1.25 ± 0.28)%(t = 6.42,P < 0.01);对照组小鼠脾ILC1占脾NK细胞的(20.07 ± 2.70)%,低于感染组的(31.49 ± 3.28)%(t = 7.10,P < 0.01);感染组小鼠脾常规NK(cNK)细胞占脾NK细胞的(68.89 ± 3.28)%,低于对照组的(80.14 ± 3.49)%(t = 6.22,P < 0.01)。感染组小鼠脾ILC1中CD27-CD11b+细胞占(21.37 ± 7.48)%,低于对照组的(43.49 ± 8.05)%(t = 5.33,P < 0.01);CD27+CD11b-和CD27+CD11b+细胞分别占(39.64 ± 8.80)%和(6.77 ± 1.51)%,高于对照组的(24.51 ± 8.35)%和(4.12 ± 1.71)%(t = 3.30、3.06,均P < 0.01)。感染组小鼠脾ILC1中分泌程序性死亡受体1(PD-1)和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)的细胞分别占(5.04 ± 1.54)%和(16.14 ± 4.53)%,高于对照组的(2.57 ± 1.52)%和(10.81 ± 4.03)%(t = 3.02、2.33,均P < 0.05);分泌颗粒酶B(Gr-B)和γ干扰素(IFN-γ)的细胞分别占(6.16 ± 1.23)%和(16.13 ± 6.64)%,低于对照组的(9.42 ± 2.16)%和(30.68 ± 6.81)%(t = 2.94、3.42,P < 0.05、0.01);分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的细胞占(22.26 ± 6.69)%,高于对照组的(10.80 ± 3.92)%(t = 3.31,P < 0.05)。结论 多房棘球蚴感染晚期,小鼠脾脏ILC1比例及未成熟ILC1比例增加,抑制性免疫检查点受体PD-1高表达,分泌细胞因子Gr-B和IFN-γ的能力下降,提示ILC1功能抑制可能促进了多房棘球蚴的慢性感染。

    肝脏固有淋巴细胞在多房棘球蚴感染小鼠肝纤维化进展中的动态变化
    陈雨晴, 苏雅馨, 王莹, 周浩, 崔丽君, 江楠, 张璟, 王相清, 曹建平, 姜斌, 霍乐乐, 沈玉娟
    2026, 44(2):  174-181.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.004
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (4210KB) ( )  
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    目的 分析多房棘球蚴感染小鼠在不同感染时期的肝纤维化进展情况和肝脏固有淋巴细胞(ILC)及其亚型的比例动态变化,探讨多房棘球蚴感染所致肝纤维化与固有淋巴细胞的相关性,为揭示多房棘球蚴感染所致肝纤维化的免疫调节机制提供理论基础。方法 将BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组(每组18只),感染组每鼠注射1 500个多房棘球蚴原头节,分别于感染后30、90、180 d安乐处死。采用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察肝组织结构变化、炎症程度和胶原沉积情况;采用免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转移生长因子β1(TGF-β1)、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ等纤维化相关蛋白的表达情况;利用流式细胞术检测肝脏ILC在肝脏免疫细胞中的占比及其亚型(ILC1、ILC2、ILC3)在总ILC中的比例变化情况;实时荧光定量PCR检测IL-33的相对表达量。采用Pearson相关分析探讨ILC各亚型与纤维化指标的相关性。结果 多房棘球蚴感染30 d后,小鼠肝脏出现囊泡样病灶,病灶随感染时间延长逐渐增大,并侵袭周围的肝组织导致炎症发生,甚至出现纤维化病变。HE染色结果显示,炎症随感染时间增加而加重,感染后180 d纤维间隔逐渐形成。Masson染色结果显示,感染后90、180 d胶原面积占比分别为(37.26 ± 7.83)%、(55.36 ± 8.21)%,相比同期对照组[(1.57 ± 1.17)%、(0.83 ± 0.73)%]升高(t = 7.80、11.47,均P < 0.01)。免疫荧光结果显示,α-SMA、TGF-β1、Collagen Ⅰ及Collagen Ⅲ在感染组中的荧光强度与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的比值分别为1.08%、0.94%、3.33%和1.55%,均高于对照组(0.51%、0.12%、0.20%、0.62%)(t = 4.62、5.42、4.12、5.54,均P < 0.01)。流式细胞术分析显示,感染后30 d,感染组小鼠表达CD45.2+的肝脏白细胞中ILC占比为(2.54 ± 0.43)%,与对照组的(2.29 ± 0.31)%相比差异无统计学意义(t = 0.91,P > 0.05);感染后90 d,感染组ILC占比为(1.16 ± 0.51)%,低于对照组的(1.88 ± 0.31)%(t = 2.69,P < 0.05);感染后180 d,感染组ILC占比为(0.56 ± 0.13)%,高于对照组的(0.31 ± 0.07)%(t = 3.02,P < 0.05)。在ILC亚群中,感染后90、180 d感染组小鼠ILC1占ILC的比例分别为(61.22 ± 4.38)%和(11.11 ± 3.61)%,低于对照组的(75.96 ± 4.81)%和(47.50 ± 4.95)%(t = 5.067、10.29,P均 < 0.01),与Masson染色胶原面积比呈负相关(r < 0,P < 0.05);感染后180 d,感染组ILC2占比为(78.50 ± 4.10)%,高于对照组的(33.23 ± 4.57)%(t = 12.78,P < 0.01),与Masson染色胶原面积比呈正相关(r = 0.72,P < 0.05);感染后30、90、180 d,感染组ILC3占比分别为(5.58 ± 2.37)%、(2.90 ± 0.84)%和(4.07 ± 2.94)%,与同期对照组[(6.08 ± 0.83)%、(2.66 ± 0.68)%和(5.24 ± 3.74)%]相比差异均无统计学意义(t = 0.40、0.49、0.43,P均 > 0.05),与纤维化指标间未显示显著相关性。肝组织IL-33 mRNA的表达在感染后30 d(1.37 ± 0.28)与对照组(1.03 ± 0.17)相比差异无统计学意义(t = 1.06,P > 0.05);感染后90 d(2.88 ± 0.49)与对照组(0.74 ± 0.14)相比升高(t = 3.62,P < 0.05);感染后180 d(1.55 ± 0.31)与对照组(1.06 ± 0.26)相比差异无统计学意义(t = 1.10,P > 0.05)。结论 多房棘球蚴感染可致小鼠肝纤维化并诱导ILCs及其亚型在肝脏免疫细胞中的比例改变,其中ILC2在感染晚期显著上调,可能参与了调控肝星状细胞活化及促进纤维化进程。

    日本血吸虫感染小鼠脾脏滤泡辅助性T细胞的转录组分析
    李佳佳, 王熙, 仇佳音, 周新杰, 吕超, 王味思, 秦志强
    2026, 44(2):  182-188.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.005
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    目的 探讨日本血吸虫感染小鼠脾脏滤泡辅助性T(Tfh)细胞的转录组学特征,筛选并验证关键差异基因,旨在揭示Tfh细胞在血吸虫感染免疫应答中的潜在调控作用。方法 选取C57BL/6小鼠随机分为感染组和对照组(各8只),感染组经皮肤接触感染日本血吸虫尾蚴,对照组不作处理。于感染后6周采集脾脏,通过磁珠负选联合流式细胞术依据白细胞分化抗原3、白细胞分化抗原4、程序性死亡受体1、程序性死亡受体1阳性(CD3⁺ CD4⁺ CXCR5⁺ PD-1⁺)的免疫表型设门分选Tfh细胞,RNA提取试剂盒提取细胞样品总RNA并纯化。利用Illumina平台进行Bulk RNA-seq测序,筛选差异表达基因,筛选标准为|log2差异倍数| > 1且P < 0.05,并进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。将筛选出的基因进行逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证,采用ELISA法检测感染后不同时间点(2、4、6、8周)小鼠血清中白细胞介素5(IL-5)和IL-13的蛋白表达水平。结果 转录组测序共筛选出1 379个差异基因,其中上调基因327个,下调基因1 052个。GO、KEGG功能富集分析显示,差异基因主要富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化性及免疫效应过程调控等信号通路。筛选出il5il13、前列腺素D2受体2(ptgdr2)、神经介素U受体1(nmur1)等4个差异基因进行RT-qPCR验证,结果显示感染组中il5il13的mRNA相对转录水平分别为13.520 ± 1.540、22.930 ± 0.720,高于对照组的1.060 ± 0.225、1.137 ± 0.425(t = 10.52、28.41,P < 0.01);nmur1ptgdr2在感染组中的相对转录水平分别为11.210 ± 4.480、4.405 ± 2.575,与对照组(1.007 ± 0.084、1.143 ± 0.443)相比差异无统计学意义(t = 3.054、1.629,P > 0.05)。ELISA结果显示,在未感染及感染早期(第2周)时,IL-5和IL-13的浓度均处于极低水平(中位数分别为2.00和4.00 pg/mL),感染后第4周IL-13浓度中位数升至68.20 pg/mL,第6周IL-5浓度中位数升至77.06 pg/mL(均P < 0.05),且在后续感染阶段持续维持较高水平。结论 日本血吸虫感染显著重塑了小鼠脾脏Tfh细胞的转录组特征,使其处于高度活化状态;Tfh细胞可能通过显著上调il5il13的表达,参与宿主Th2型免疫微环境的维持及免疫病理调控。

    日本血吸虫感染自然杀伤细胞tigit敲除小鼠肝组织转录组分析
    彭荟, 崔丽君, 章孝成, 张璟, 尹建海, 陆绍红, 曹建平
    2026, 44(2):  189-195.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.006
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    目的 在小鼠血吸虫病肝纤维化模型中,探究自然杀伤(NK)细胞条件性敲除抑制性受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(tigit)对疾病进程的影响及其潜在作用机制。方法 取4只NK细胞条件性敲除tigit小鼠作为实验组,4只同窝野生型小鼠作为对照组,小鼠经皮肤感染日本血吸虫尾蚴[(20 ± 2)条/只],感染后第6周收集小鼠肝组织,苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察虫卵肉芽肿形态结构、炎细胞浸润程度和胶原纤维沉积情况,兔抗鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色观察肝组织纤维化程度,采用ImageJ软件计算阳性染色面积百分比;逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测α平滑肌肌动蛋白(acta2)、Ⅰ型胶原蛋白(I-c)及tigit的mRNA相对转录水平。对两组小鼠肝组织RNA进行转录组测序,筛选差异表达基因,并进行基因本体(GO)功能富集分类。采用GraphPad Prism 9软件进行统计学分析,数据采用独立样本t检验。结果 HE染色显示,相较于对照组,实验组小鼠虫卵肉芽肿面积较小,炎症细胞浸润程度较轻。Masson染色显示,实验组小鼠肝组织胶原沉积减少,沉积范围局限,多呈纤细的纤维条索状,对照组小鼠肝组织内可见大量蓝色胶原纤维沉积,并且在虫卵肉芽肿周围形成明显的纤维包裹。实验组胶原沉积评分(8.07 ± 0.52)较对照组(26.07 ± 1.54)降低(t = 19.22, P < 0.01)。α-SMA免疫组化染色显示,实验组小鼠肝组织内α-SMA阳性表达明显减少,染色强度减弱,对照组α-SMA阳性表达广泛,主要见于肉芽肿周围活化的肝星状细胞及窦周隙。半定量分析证实,实验组α-SMA阳性面积百分比(3.39 ± 1.25)较对照组(8.60 ± 2.47)下降(t = 5.92, P < 0.01)。RT-qPCR结果显示,实验组小鼠肝组织纤维化指标acta2I-ctigit基因mRNA相对转录水平分别为0.87 ± 0.06、0.88 ± 0.03、1.03 ± 0.11,低于对照组的1.40 ± 0.03、1.2 ± 0.02、1.67 ± 0.15(t = 14.93、14.99、6.216,均P < 0.01)。转录组测序共鉴定出431个差异表达基因(上调基因365个,下调基因66个)。GO富集分析显示,上调基因显著富集于免疫应答相关通路,涵盖NK细胞脱颗粒、肝星状细胞激活负向调控、中性粒细胞趋化与迁移等通路。结论 NK细胞条件性敲除tigit可能通过恢复NK细胞功能及抑制肝星状细胞活化减轻小鼠血吸虫病肝纤维化,并影响中性粒细胞通路,提示其在肝脏免疫微环境中具有复杂调控作用。

    日本血吸虫感染小鼠脾脏B细胞的转录组分析
    仇佳音, 李佳佳, 周新杰, 李银龙, 冯婷, 郑茂, 吕超, 秦志强
    2026, 44(2):  196-202.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.007
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (2727KB) ( )  
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    目的 分析日本血吸虫感染后小鼠脾脏中B细胞的转录组学特征,筛选并验证差异表达基因(DEG),为揭示日本血吸虫感染B细胞的调控机制提供依据。方法 将BALB/C小鼠随机分为对照组(NC组)、感染4周组(Sj_4W组)和感染6周组(Sj_6W组),Sj_4W组和Sj_6W组小鼠使用贴片法经皮肤感染(25 ± 1)尾日本血吸虫尾蚴,感染第4、6周分别剖杀对应组小鼠,收集小鼠脾组织,通过磁珠富集分选获得脾B细胞。提取脾B细胞总RNA,构建转录组文库,基于Illumina平台进行RNA转录组测序,利用limma和edgeR软件包进行差异表达分析,筛选DEG,对DEG进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路富集分析和基因本体(GO)功能富集分类。筛选出3个高表达基因进行逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证。结果 聚类分析发现,Sj_6W组和NC组间共鉴定出6 443个DEG,其中上调基因4 421个、下调基因2 022个;Sj_6W组和Sj_4W组间共鉴定出6 757个DEG,其中上调基因4 754个、下调基因2 003个。GO功能富集分析结果显示,下调基因主要涉及淋巴细胞分化、免疫应答调节信号通路、淋巴细胞增殖等条目,上调基因主要富集在淋巴细胞介导的免疫、免疫应答分子介质的产生、B细胞介导的免疫与体液免疫等条目;KEGG代谢通路富集分析结果显示,下调基因主要富集在丝裂原活化蛋白激酶信号通路、Th1与Th2细胞分化、Th17细胞分化等条目,上调基因主要富集细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞外基质-受体相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路等条目。RT-qPCR验证结果显示,Sj_6W组小鼠脾B细胞中白细胞介素27(IL-27)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)和嗜酸粒细胞蛋白X(EPX)的mRNA相对转录水平分别为2.14 ± 1.18、21.86 ± 14.06、324.40 ± 252.40,高于Sj_4W组的0.31 ± 0.18、0.03 ± 0.02、0.44 ± 0.72(Mann-Whitney U检验,P < 0.01),亦高于NC组的1.04 ± 0.29、1.20 ± 0.72、1.17 ± 0.69(Mann-Whitney U检验,P < 0.05)。结论 感染日本血吸虫后,小鼠脾B细胞发生了转录重编程,IL-27、EPX和MMP-8等基因表达均上调,淋巴细胞分化与增殖、Th1/Th2及Th17细胞分化、免疫应答分子介质的产生、B细胞介导的免疫及体液免疫调节、细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞外基质-受体相互作用等通路发生改变。

    刚地弓形虫内质网应激相关蛋白TgBip与TgeIF2α多克隆抗体的制备及应用
    田思雨, 牟亚妮, 谭峰
    2026, 44(2):  203-208.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.008
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    目的 制备刚地弓形虫免疫球蛋白重链结合蛋白(TgBip)和真核翻译起始因子2α(TgeIF2α)多克隆抗体,并评价其特异性。方法 利用生物信息学方法设计TgBipTgeIF2α基因的特异性引物,以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增目的基因,采用无缝克隆技术,构建pColdⅢ-His-TgBip和pColdⅢ-His-TgeIF2α重组质粒,转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况,采用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白。以纯化后的TgBip和TgeIF2α蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性抗TgBip和TgeIF2α多克隆抗体。通过增强化学发光法分析多抗对内源性TgBip和TgeIF2α蛋白的识别情况,间接免疫荧光实验(IFA)检测TgBip蛋白在内质网应激过程中的变化,Western blotting检测内质网应激过程中TgeIF2α磷酸化水平的变化。结果 PCR结果显示,TgBipTgeIF2α基因特异性扩增片段大小分别为1 920、1 044 bp,与预期片段大小相符。pColdⅢ-His-TgBip和pColdⅢ-His-TgeIF2α重组质粒构建成功。SDS-PAGE和Western Blotting结果表明,TgBip和TgeIF2α蛋白在BL21感受态细胞中高效表达,相对分子质量(Mr)约71 000和40 000,与理论值接近。Western blotting结果表明,制备的抗体可特异性识别弓形虫内源性TgBip和TgeIF2α蛋白,与宿主细胞蛋白无交叉反应。IFA结果表明,TgBip分布于弓形虫内质网,在诱导内质网应激前,TgBip分布在虫体细胞核周围;在内质网应激后,TgBip分布弥散。Western blotting结果表明,诱导内质网应激后磷酸化TgeIF2α相对表达水平为2.199 ± 0.376,高于诱导前的1.217 ± 0.099(t = 4.379,P < 0.05)。结论 制备的特异性抗TgBip和TgeIF2α多克隆抗体可用于检测弓形虫内质网结构与应激水平。

    刚地弓形虫感染对小鼠小肠黏膜免疫病理的影响
    张铃, 林鑫埕, 吕芳丽
    2026, 44(2):  209-213.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.009
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    目的 了解刚地弓形虫(以下简称弓形虫)急性感染对小鼠小肠黏膜免疫应答和免疫病理的影响及其机制。方法 将15只昆明小鼠随机分成感染组(10只)和对照组(5只)。感染组小鼠腹腔注射弓形虫RH株速殖子(1 × 10³个),对照组小鼠注射等量PBS。感染后第7天,取小鼠回肠后段2 cm和肠系膜淋巴结,进行石蜡包埋、切片和苏木素-伊红染色后,观察小肠和肠系膜淋巴结的病理变化,测量小肠绒毛长度和隐窝深度,计数杯状细胞和潘氏细胞数量;进行免疫组织化学染色,计数小肠组织中CD68阳性细胞数量。使用GraphPad Prism10.1.2软件对数据进行独立样本t检验。结果 对照组小鼠小肠绒毛和肠系膜淋巴结组织结构完整,形态正常。感染组小鼠小肠病理损伤严重,小肠绒毛上皮细胞坏死,肠绒毛脱落或缩短,肠隐窝变深,小肠黏膜组织中可见大量炎症细胞浸润;肠系膜淋巴结组织结构破坏,可见弥漫性坏死病灶,感染组小鼠小肠和肠系膜淋巴结组织中均可观察到弓形虫速殖子和假包囊。感染组小鼠小肠绒毛长度为(93.07 ± 2.158)μm,短于对照组的(125.0 ± 19.36)μm(t = 2.756,P < 0.05);感染组小鼠的小肠隐窝深度为(49.04 ± 8.809)μm,深于对照组的(39.9 ± 4.174)μm(t = 2.382,P < 0.05)。感染组小鼠10根小肠绒毛中的杯状细胞数量为(78.70 ± 14.01)个,少于对照组的(96.71 ± 13.89)个(t = 2.618,P < 0.05);感染组小鼠10个小肠隐窝中的杯状细胞数量为(31.60 ± 8.60)个,少于对照组的(53.17 ± 13.03)个(t = 4.014,P < 0.05)。感染组小鼠20个小肠隐窝中的潘氏细胞数量为(69.80 ± 8.90)个,少于对照组的(103.0 ± 4.86)个(t = 8.342,P < 0.01)。感染组小鼠小肠组织每个高倍视野下CD68+巨噬细胞数量为(42.33 ± 11.41)个,多于对照组的(15.75 ± 2.754)个(t = 4.496,P < 0.01);感染组小鼠小肠派尔集合淋巴结组织每个高倍视野下CD68+巨噬细胞数量为(185.0 ± 23.80)个,多于对照组的(15.75 ± 2.754)个(t = 9.286,P < 0.01)。结论 弓形虫急性感染可诱导小鼠小肠损伤,小肠组织中的杯状细胞和潘氏细胞数量减少,CD68+巨噬细胞数量增加,提示杯状细胞、潘氏细胞和巨噬细胞可能参与小肠黏膜免疫应答和免疫病理。

    早孕期刚地弓形虫感染对蜕膜免疫细胞Tim-3表达水平的影响及差异分析
    张晗, 杨若晗, 陈子欢, 张海霞, 冯晓雨, 魏殿芳, 王雯霄, 刘现兵, 胡雪梅
    2026, 44(2):  214-221.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.010
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    目的 探索孕期刚地弓形虫感染对蜕膜免疫细胞T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)表达的影响及差异关系。方法 取孕鼠分为野生型(WT)孕鼠对照组、WT孕鼠感染组和Tim-3-/-孕鼠感染组,每组20只。2个感染组小鼠于孕8 d,经腹腔感染250条弓形虫RH株速殖子(250 μl/鼠),对照组注射等量生理盐水。于孕14天,观察各组孕鼠精神状态;安乐死处死各组孕鼠后,解剖并记录妊娠结局,计算异常胎鼠率;取孕鼠胎盘、胎鼠并称重,比较3组间不良妊娠结局差异。取早孕期自愿终止妊娠的健康孕妇的蜕膜组织,采用密度梯度离心法收集蜕膜单个核细胞,分为对照组和感染组(每组1 × 107个细胞)。感染组按细胞∶弓形虫为3∶1的比例进行感染,对照组加入等量的不含弓形虫的培养基,20 h后收集两组细胞,采用流式细胞术检测蜕膜自然杀伤(dNK)细胞、蜕膜巨噬细胞(dMϕ)、蜕膜髓源性抑制细胞(dMDSC)和蜕膜树突状细胞(dDC)Tim-3的表达水平。采用免疫磁珠自蜕膜单个核细胞中分别分选出dNK细胞、dMϕ、dMDSC和dDC,将各类细胞分为感染组和对照组。感染组按细胞∶弓形虫为3∶1的比例进行感染,对照组加入等量培养基,20 h后收集细胞,提纯蛋白,利用蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析各类蜕膜免疫细胞Tim-3的表达水平。组间差异比较采用独立样本t检验(体内实验)或配对t检验(体外实验)。结果 WT感染组孕鼠胎盘和胎鼠质量分别为(83.13 ± 9.13)和(96.81 ± 11.63)mg,较WT对照组的(105.18 ± 9.64)和(122.86 ± 3.67)mg明显下降(t = 4.394、5.655,P < 0.01);Tim-3-/-感染组孕鼠的胎盘和胎鼠质量分别为(66.31 ± 9.00)和(74.32 ± 6.33)mg,均低于WT感染组(t = 3.471,P < 0.01;t = 4.495,P < 0.05)。WT感染组流产率为(30.14 ± 9.87)%,较WT对照组(无流产胎鼠)明显升高(t = 8.076,P < 0.01);Tim-3-/-感染组流产率为(66.85 ± 26.17)%,高于WT感染组(t = 3.473,P < 0.01)。Tim-3-/-感染组孕鼠的不良妊娠结局较WT感染组孕鼠明显加重。流式细胞术检测结果显示,感染组人dNK细胞、dMϕ、dMDSC、dDC中的Tim-3阳性细胞占比分别为(12.22 ± 4.61)%、(23.87 ± 5.26)%、(10.07 ± 1.02)%、11.01 ± 4.10)%,均低于对照组的(24.50 ± 7.10)%、(41.23 ± 3.84)%、(17.53 ± 0.65)%、(18.53 ± 4.93)%(t = 7.717、5.865、7.798、9.592,均P < 0.05)。Western blotting检测结果显示,感染组人dNK细胞、dMϕ、dMDSC、dDC中的Tim-3相对表达水平分别为0.69 ± 0.09、0.74 ± 0.09、0.79 ± 0.08、0.84 ± 0.04,均低于对照组的1.03 ± 0.06、0.98 ± 0.06、0.95 ± 0.02、0.97 ± 0.06(t = 7.562、4.099、4.398、5.455,P < 0.05或P < 0.01)。流式细胞术检测结果比较显示,弓形虫感染后,Tim-3在dNK细胞内的降幅最大,为(50.82 ± 5.92)%;在dMDSC和dMϕ内的降幅分别为(42.37 ± 7.96)%、(42.08 ± 12.31)%;在dDC内的降幅最小,为(41.45 ± 7.64)%。Western blotting检测比较结果与流式细胞术基本一致,即弓形虫感染后,各蜕膜免疫细胞Tim-3表达均下调,在dNK细胞内的降幅最大,为(33.06 ± 8.52)%;在dMϕ内次之,为(22.84 ± 10.64)%;在dMDSC和dDC内的降幅较小,分别为(16.25 ± 7.44)%和(13.6 ± 4.42)%。结论 早孕期刚地弓形虫感染可显著下调母胎界面各类主要蜕膜免疫细胞Tim-3的表达水平,其中对dNK细胞影响最大,其他依次为dMϕ、dMDSC、dDC。弓形虫感染后各类蜕膜免疫细胞Tim-3表达水平的下调在不良妊娠结局的发生中发挥重要作用。

    烯醇酶1调控刚地弓形虫速殖子生物学功能及速殖子与缓殖子转化的研究
    朱弟, 吴蔚玲, 孔德豪, 周志豪, 彭鸿娟
    2026, 44(2):  222-228.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.011
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    目的 探讨刚地弓形虫缓殖子阶段特异性烯醇酶1(ENO1)在速殖子与缓殖子相互转化过程中的生物学功能,分析ENO家族在弓形虫期转化调控网络中的作用及分子机制。方法 利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建eno1敲除虫株ME49-Δeno1及ME49-Δeno1-Comp-eno1和ME49-Δeno1-Comp-eno2两种回补虫株;采用空斑实验、增殖实验和入侵实验,比较ME49-Δku80、ME49-Δeno1、ME49-Δeno1-Comp-eno1和ME49-Δeno1-Comp-eno2等4种虫株感染人包皮成纤维细胞后的生长、增殖和入侵能力。采用体外碱性诱导后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测ME49-Δku80、ME49-Δeno1速殖子期特异性基因表面抗原1(sag1)和缓殖子期特异性基因缓殖子抗原1(bag1)的相对转录水平,评价eno1敲除对弓形虫速殖子向缓殖子转化能力的影响。采用嘌呤霉素标记与蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测ME49-Δku80和ME49-Δeno1两种虫株新生肽链合成情况,验证eno1敲除对弓形虫蛋白质合成的影响。结果 成功构建了ME49-Δeno1虫株,以及ME49-Δeno1-Comp-eno1与ME49-Δeno1-Comp-eno2两种回补虫株。空斑实验、增殖实验和入侵实验结果显示,ME49-Δku80、ME49-Δeno1、ME49-Δeno1-Comp-eno1和ME49-Δeno1-Comp-eno2虫株形成的空斑面积分别为(16 538 ± 14 310)、(4 376 ± 5 355)、(17 377 ± 14 333)和(8 710 ± 8 207)μm2,平均每个纳虫泡的弓形虫速殖子数量分别为(5.836 ± 0.382)、(4.792 ± 0.150)、(5.165 ± 1.243)和(3.872 ± 0.301)个,入侵效率分别为(57.802 ± 6.932)%、(19.679 ± 4.508)%、(63.833 ± 1.198)%和(35.901 ± 8.098)%,eno1敲除抑制了弓形虫的生长(F = 38.290,P < 0.01)、胞内增殖(F = 4.467,P < 0.05)及入侵能力(F = 36.650, P < 0.01)。eno1的回补完全恢复了弓形虫的生长等上述能力,ME49-Δeno1-Comp-eno1虫株形成的空斑面积、纳虫泡内平均速殖子数量和入侵效率均与ME49-Δku80虫株相比差异无统计学意义(t = 0.459、0.895、1.485,P > 0.05)。eno2回补部分恢复了弓形虫的生长等能力,ME49-Δeno1-Comp-eno2虫株形成的空斑面积大于ME49-Δeno1虫株(t = 5.263,P < 0.05),但小于ME49-Δku80虫株(t = 4.905,P < 0.01);纳虫泡内平均速殖子数量少于ME49-Δku80t = 6.998,P < 0.05);入侵效率高于ME49-Δeno1虫株(t = 3.032,P < 0.05),但低于ME49-Δku80虫株(t = 3.559,P < 0.05)。碱性条件诱导48 h后,ME49-Δeno1虫株sag1基因的相对转录水平为1.067 ± 0.115,与ME49-Δku80株的1.002 ± 0.154相比差异无统计学意义(t = 0.584,P > 0.05);ME49-Δeno1虫株bag1基因的相对转录水平为13.172 ± 1.679,低于ME49-Δku80株的20.338 ± 1.344(t = 5.770,P < 0.01)。碱性诱导96 h后,ME49-Δeno1虫株sag1基因的相对转录水平为0.957 ± 0.132,高于ME49-Δku80的0.727 ± 0.053(t = 2.803,P < 0.05);ME49-Δeno1虫株bag1基因的相对转录水平为162.248 ± 23.377,低于ME49-Δku80的231.413 ± 12.910(t = 4.486,P < 0.05)。Western blotting检测结果显示,ME49-Δku80和ME49-Δeno1虫株在新生肽链合成水平上无明显差异,eno1敲除对弓形虫蛋白质合成能力无明显影响。结论 缓殖子特异性烯醇酶ENO1促进弓形虫速殖子生长,并正向调控速殖子向缓殖子的转化,是该过程中的关键调控分子,但并非必需分子,而且ENO1在弓形虫速殖子增殖中不可被ENO2所替代。

    早孕期刚地弓形虫感染对蜕膜T细胞表面免疫抑制分子LAG-3表达水平的影响
    杨若晗, 张晗, 任立芹, 吕琳瑶, 魏殿芳, 冯晓雨, 王雯霄, 刘现兵, 胡雪梅
    2026, 44(2):  229-236.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.012
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    目的 探索刚地弓形虫感染对早孕期母胎界面蜕膜T细胞表面淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和相关功能分子表达水平的影响,探讨其与不良妊娠结局发生的潜在关系。方法 取健康人早孕期蜕膜组织分离单个核细胞,设对照组、弓形虫感染组和感染 + LAG-3抑制剂组(每组1.0 × 107个细胞),对照组不做任何处理,感染组和感染 + LAG-3抑制剂(10 μmol/L Relatlimab)组按照弓形虫速殖子与细胞1∶3的比例进行感染,体外共培养19 h后收集细胞。采用流式细胞术检测蜕膜CD4+ T(dCD4+ T)、dCD8+ T细胞表面LAG-3及胞内功能分子γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B的表达水平。使用CD4、CD8分选磁珠从单个核细胞中分离纯化获得人dCD4+ T、dCD8+ T细胞,分别设对照组、弓形虫感染组,检测单纯感染情况下LAG-3、IFN-γ、颗粒酶B的表达情况;将dCD4+ T、dCD8+ T细胞均分为感染组和感染 + LAG-3抑制剂组,检测阻断LAG-3后弓形虫感染对蜕膜T细胞内IFN-γ和颗粒酶B表达水平的影响。对照组不做任何处理,感染组和感染 + 抑制剂组按照弓形虫速殖子与细胞为1∶3的比例进行感染(每组1.5 × 107个细胞),体外共培养19 h后收集细胞并提取蛋白,利用蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测蜕膜CD4+ T、CD8+ T细胞LAG-3、IFN-γ和颗粒酶B的表达水平。利用GraphPad Prism 10.3.0软件进行数据分析,组间数据分析采用独立样本Student’s t检验。结果 流式细胞术检测人蜕膜单个核细胞结果显示,人dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染组LAG-3阳性细胞数分别为(17.30 ± 1.50)%、(22.20 ± 2.98)%,均低于对照组的(27.13 ± 1.45)%、(35.50 ± 3.60)%(t = 19.750,P < 0.01;t = 6.389,P < 0.05)。人dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染组IFN-γ阳性率分别为(7.15 ± 6.90)%、(3.94 ± 0.27)%,均高于对照组的(5.46 ± 0.47)%、(3.02 ± 0.48)%(t = 6.230、7.101,均P < 0.05);感染 + LAG-3抑制剂组分别为(8.51 ± 0.36)%、(5.83 ± 1.01)%,均高于感染组(t = 13.350,P < 0.01;t = 4.372,P < 0.05)。人dCD4+ T、dCD8+ T细胞中颗粒酶B感染组的阳性率为(78.30 ± 1.01)%、(49.00 ± 6.44)%,均高于对照组的(72.30 ± 1.50)%、(39.12 ± 10.25)%(t = 8.260、5.164,均P < 0.05);感染 + LAG-3抑制剂组分别为(87.00 ± 0.65)%、(57.30 ± 3.93)%,均高于感染组(t = 18.710,P < 0.01;t = 5.636,P < 0.05)。Western blotting检测结果显示,人dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染组LAG-3蛋白相对表达水平分别为0.89 ± 0.06、0.78 ± 0.06,与对照组的1.09 ± 0.04、0.99 ± 0.10相比均明显降低(t = 10.790,P < 0.01;t = 4.503,P < 0.05)。人dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染组胞内IFN-γ蛋白相对表达水平分别为0.85 ± 0.05、0.94 ± 0.08,高于对照组的0.64 ± 0.04、0.66 ± 0.07(t = 16.770,P < 0.01;t = 6.193,P < 0.05);人dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染组颗粒酶B表达水平为0.75 ± 0.05、0.80 ± 0.08,与对照组的0.61 ± 0.09、0.44 ± 0.09相比明显上调(t = 5.141、t = 4.446,均P < 0.05)。dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染 + LAG-3抑制剂组胞内IFN-γ蛋白表达水平为0.97 ± 0.06、1.15 ± 0.11,与感染组的0.77 ± 0.08、0.86 ± 0.07相比明显上调(t = 13.940,P < 0.01;t = 5.346,P < 0.05);dCD4+ T、dCD8+ T细胞感染 + LAG-3抑制剂组颗粒酶B表达水平分别为0.96 ± 0.04、1.03 ± 0.30,均高于感染组的0.70 ± 0.08、0.78 ± 0.14(t = 10.250、10.520,均P < 0.01)。结论 早孕期弓形虫感染可下调dCD4+ T、dCD8+ T细胞表面LAG-3的表达水平,进而上调功能分子IFN-γ和颗粒酶B的表达水平,这是导致不良妊娠结局发生的重要机制之一。

    抗巴贝虫化合物高通量筛选体系的建立及其应用
    张玉婷, 拜娅楠, 殷宏, 关贵全, 马永华, 王锦明
    2026, 44(2):  237-243.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.013
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    目的 建立高通量抗巴贝虫化合物筛选体系,筛选高效抗巴贝虫候选化合物,并通过动物感染模型评价其体内疗效。方法 以邓肯巴贝虫组蛋白样转录因子(histf,GenBank登录号:XM_067945812)为靶基因设计特异性引物,将初始染虫率为21.48%的邓肯巴贝虫培养物进行梯度稀释,制备7个染虫率梯度样品(2.148 × 10-1~1.375 × 10-5),提取各样品基因组DNA,实时荧光定量PCR(qPCR)扩增邓肯巴贝虫histf基因,构建虫体数量与循环阈值(Ct值)关联的qPCR标准曲线。将邓肯巴贝虫染虫红细胞接种于96孔板中(5.5 × 104个/孔),加入抗感染化合物库中的1 212种化合物(1 × 10-5 mol/L),评价抑虫效果。将抑虫效果前20的化合物倍比稀释(1 × 10-7~3 × 10-5 mol/L),分别作用48、72 h。提取各组虫体基因组DNA,qPCR扩增histf基因获得Ct值,计算抑制率和体外半数抑制浓度(IC50)。将HEK-293T细胞接种于96孔板中(8 000个/孔),将抑虫效果前20的化合物倍比稀释为1 × 10-6、3 × 10-6、1 × 10-5、3 × 10-5、1 × 10-4和3 × 10-4 mol/L加入各孔,设未加药对照组,采用CCK-8法检测细胞活力,测定吸光度(A450值),计算细胞半数毒性浓度(CC50)。20只金黄地鼠腹腔接种邓肯巴贝虫染虫红细胞(1 × 10²个/只);12只BALB/c小鼠腹腔接种田鼠巴贝虫染虫红细胞(1 × 10⁴个/只),随机分为实验组和对照组, 感染后第2天,实验组腹腔注射达西司特(10 mg/kg),连续给药15 d,对照组注射等量溶剂,每日吉氏染色镜检,计数红细胞并计算染虫率,评价体内疗效。采用GraphPad Prism 10.1.2软件进行统计学分析,组间比较采用非配对样本t检验。结果 qPCR扩增结果显示,以组蛋白样转录因子histf为靶基因形成的扩增曲线形态正常,溶解曲线呈单一峰型,qPCR反应体系稳定、扩增产物特异性良好,Ct值与染虫率呈现良好的线性关系,标准曲线斜率为-3.734,相关系数R2为0.993,直线方程为y = -3.734x + 32.272。标准曲线显示,Ct值随染虫率的下降而出现递增趋势。筛选化合物库1 212种化合物,对邓肯巴贝虫的抑制率为-47.1%~98.1%,其中31种化合物抑制率 > 80%。20种化合物对邓肯巴贝虫具有体外抑制作用,IC50为3.3 × 10-8~1.325 × 10-5 mol/L。达西司特抑制活性最强,IC50为3.3 × 10-8 mol/L。各化合物对HEK-293T细胞的毒性均随作用时间延长而升高,达西司特、甲磺酸卡莫司他和葑醇等6种化合物表现为较高抑虫活性且细胞毒性较低。在邓肯巴贝虫感染金黄地鼠模型中,达西司特可延迟虫体检出时间,感染后第12天染虫率为(1.75 ± 0.94)%,低于对照组的(17.24 ± 3.15)%,差异有统计学意义(t = 4.798,P < 0.05),试验结束时存活2只,对照组全部死亡。在田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠模型中,达西司特组和对照组感染后第15天染虫率分别为(0.06 ± 0.02)%、(6.99 ± 1.19)%,差异有统计学意义(t = 5.813,P < 0.05),且至感染后第23天前染虫率维持在0.9%~1.0%的较低水平。结论 成功建立了高通量巴贝虫药物筛选方法,获得多种体外高活性抑虫化合物,其中达西司特对邓肯巴贝虫与田鼠巴贝虫均具有良好治疗效果。

    PCNA与NEDD8作为华支睾吸虫病早期血清学诊断抗原的筛选与效能评价
    李圆圆, 高宇微, 易海波, 杜新月, 周品丞, 吴琛耘, 诸廷俊, 郭斯敏, 钱门宝, 王兆军
    2026, 44(2):  244-251.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.014
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (1950KB) ( )  
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    目的 从5个功能不同的华支睾吸虫候选蛋白中筛选出适用于华支睾吸虫病早期血清学诊断的最佳抗原。方法 选取公开数据库NCBI序列读取档案库的华支睾吸虫转录组数据并结合蛋白功能信息,筛选出果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)、半胱氨酸蛋白酶1(CP1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、尼曼匹克C2型蛋白(NPC2)和神经前体细胞表达发育下调蛋白8(NEDD8)等5个候选诊断抗原。分析抗原在华支睾吸虫新脱囊幼虫和成虫阶段的表达情况,利用免疫表位数据库和蛋白抗原空间表位预测工具预测抗原表位,并从华支睾吸虫cDNA中PCR扩增对应基因,构建pET-302/NT-His原核表达载体。在大肠埃希菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达并通过镍-次氮基三乙酸亲和层析纯化重组蛋白。采集经口灌胃感染法感染华支睾吸虫囊蚴后6周的新西兰白兔和BALB/c小鼠阳性血清、华支睾吸虫病早期患者血清(感染后2周~6周)、晚期患者血清(感染后6周以上),及健康对照人群血清和其他寄生虫感染者血清。采用间接ELISA法检测血清中特异性IgM,以华支睾吸虫成虫抗原作为阳性对照,并以阳性血清与阴性血清的标准化450 nm吸光度(ΔA450值)的比值(P/N)作为评价指标。使用GraphPad Prism 10软件计算敏感性、特异性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并评估曲线下面积(AUC)。结果 转录组学分析表明,5个候选蛋白在新脱囊幼虫和成虫阶段均呈高水平表达。结构及表位预测提示候选蛋白均含多种线性和构象性B细胞表位,关键残基位于表位暴露区域,具有良好抗原潜力。FBA、CP1、PCNA、NPC2和NEDD8等5种蛋白均成功重组表达并纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示条带清晰、相对分子质量与理论一致,重组蛋白的纯度分别为86.2%、90.6%、97.1%、82.5%、93.6%,蛋白浓度分别为1 780、514、594、375、1 263 μg/mL。ELISA结果显示,PCNA和NEDD8的IgM反应最强,其P/N值(兔/小鼠)分别为1.675/4.176与1.521/4.076;CP1、FBA和NPC2的反应性相对较弱(1.478/1.870、0.952/2.531、1.040/2.413)。对患者血清的检测结果显示,PCNA、NEDD8及其组合抗原在早期患者中ΔA450值明显升高(0.304 ± 0.302、0.506 ± 0.383和0.553 ± 0.358),均高于健康对照组(0.028 ± 0.017、0.066 ± 0.044、0.066 ± 0.041)(Z = 3.924、3.763、4.116,P < 0.01),也高于晚期感染组患者(0.035 ± 0.030、0.070 ± 0.060、0.076 ± 0.071)(Z = 3.890、4.116、4.386,P < 0.01)。在早期感染患者中,PCNA、NEDD8及其组合抗原的敏感性分别为10/14、11/14、12/14,特异性均为95.5%(21/22)。ROC曲线分析显示,PCNA、NEDD8及其组合抗原的AUC分别为0.873 4、0.879 9和0.915 6。结论 PCNA和 NEDD8作为诊断抗原可用于华支睾吸虫早期感染的血清IgM检测,其联合应用可进一步提升早期诊断性能,具有开发为血清学早期诊断试剂的潜力。

    青藏高原东部石渠县虻类昆虫的遗传进化特征及寄生虫携带状况调查
    李梦晴, 王旭, 杨扬, 薛垂召, 左清秋, 尹建海, 曹建平
    2026, 44(2):  252-259.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.015
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (2850KB) ( )  
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    目的 分析青藏高原东部石渠县虻类昆虫的分布特征及其潜在携带寄生虫情况,为掌握该地区虻类昆虫的分布格局及制定虻传疾病防控策略提供基础资料。方法 2023年8月和2025年8月在四川省石渠县的尼呷镇、色须镇、洛须镇,于10:00—14:00采用网兜捕捉法采集虻,提取其组织DNA。使用28S rRNA特异性引物扩增目标片段并测序,使用Geneious Prime软件拼接序列,在GenBank中进行BLAST比对以确定虫种。利用DnaSP计算单倍型多样性,DAMBE检验碱基替换饱和度,jModelTest筛选核苷酸替代模型,并用MEGA最大似然法构建系统进化树。使用通用寄生虫引物开展高通量测序,测序数据经过质量控制、双端拼接、操作分类单位(OTU)聚类等,检测虻样品中潜在寄生虫。结果 共采集虻样品324份,经鉴定筛选共获得有效样品304份,鉴定为3属3种,分别为双斑瘤虻、红褐腹虻和毛肾角鹬虻。红褐腹虻共275只,为优势物种(占90.46%,275/304);双斑瘤虻共24只,占7.89%(24/304);毛肾角鹬虻共5只,占1.65%(5/304)。共检测到8个单倍型,其中双斑瘤虻2个单倍型,红褐腹虻和毛肾角鹬虻各3个单倍型。系统进化树分析显示,研究序列在科、属和种级水平均呈现清晰的分化结构,双斑瘤虻的2个单倍型(H3、H4)与参考序列M243434序列聚为一支,红褐腹虻的3个单倍型(H1、H6、H8)与参考序列AF238561聚为单系分支,毛肾角鹬虻的3个单倍型(H2、H5、H7)与参考序列AF238558形成高度支持的单系分支。高通量测序共获得1 499个OTU,包含2个潜在寄生虫相关OTU,分别为鼠突线虫、伊氏罗索线虫,均仅在双斑瘤虻中检出;红褐腹虻和毛肾角鹬虻中未检出寄生虫OTU。结论 石渠县虻类群落以红褐腹虻为主,整体遗传多样性较低。双斑瘤虻中检测到低丰度线虫相关序列,提示其在高原虻传病原传播中的潜在生态学意义。

    微小隐孢子虫核酸定性标准样品的制备及评估
    吴龙飞, 许会艳, 于常鸿, 陈心怡, 李俊强, 张素梅, 张龙现
    2026, 44(2):  260-265.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.016
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (1539KB) ( )  
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    目的 按照GB/T 15000《标准样品工作导则》所规定的标准样品制备流程和工艺制备微小隐孢子虫核酸检测用标准样品。方法 通过犊牛传代获取微小隐孢子虫虫株C1HN(亚型为ⅡdA19G1)卵囊,纯化后提取DNA并测序,溯源性检验正确后分装保存,通过微小隐孢子虫巢式PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)对制备的标准样品进行均匀性检验、冻融稳定性检验、短期和长期稳定性检验,通过多家单位合作的方式联合定值。采用SPSS 27.0软件进行统计学分析,数据采用单因素方差分析和配对样本t检验。结果 PCR结果显示,扩增片段大小约为830 bp,与国标检测方法结果一致。测序结果显示,该片段与C1HN虫株上的2号、7号、8号染色体上的SSU rRNA片段序列一致性为99.65%,与感染犊牛虫株完全一致,亚型为ⅡdA19G1。均匀性检验结果显示,样品Ct值为15.00 ± 0.36,组间均方为0.17,组内均方为0.11,差异无统计学意义(F = 1.49,P > 0.05)。冻融稳定性检验结果显示,样品反复冻融第0、3、7、14天的Ct值别为15.67 ± 0.25、15.68 ± 0.22、15.69 ± 0.27、15.71 ± 0.27,差异无统计学意义(t = 0.00、0.31、0.50、0.71,均P > 0.05)。短期稳定性检验结果显示,4 ℃下样品储存第0、1、2、3、4、5、10天的Ct值分别为16.48 ± 0.28、16.48 ± 0.25、16.49 ± 0.28、16.50 ± 0.25、16.53 ± 0.26、16.56 ± 0.25、16.57 ± 0.24,差异无统计学意义(t = 0.00、0.04、0.34、0.46、1.56、1.60、1.84,均P > 0.05);25 ℃下样品储存第0、1、2、3、4、5、10天的Ct值分别为16.20 ± 0.18、16.21 ± 0.14、16.21 ± 0.13、16.22 ± 0.14、16.23 ± 0.14、16.24 ± 0.14、16.25 ± 0.15,差异无统计学意义(t = 0.00、0.17、0.28、0.47、0.61、1.09、1.40,均P > 0.05);37 ℃下样品储存第0、1、2、3、4、5、10天的Ct值分别为16.21 ± 0.17、16.22 ± 0.16、16.23 ± 0.16、16.24 ± 0.17、16.26 ± 0.18、16.25 ± 0.18、16.26 ± 0.19,差异无统计学意义(t = 0.00、0.33、0.56、1.10、1.20、1.34、1.89,均P > 0.05)。长期稳定性结果显示,-20 ℃下样品储存第0、30、90、180、270、360天的Ct值分别为15.67 ± 0.11、15.67 ± 0.21、15.67 ± 0.21、15.67 ± 0.25、16.67 ± 0.24、15.67 ± 0.23,差异无统计学意义(t = 0.00、0.01、0.11、0.23、0.37、0.39,均P > 0.05);第180、360天巢式PCR结果显示,特异性条带大小均约为830 bp,测序结果与先前一致。9家单位出具的标准样品复核报告均证明制备的标准样品可作为微小隐孢子虫核酸检测阳性样品。结论 制备的标准样品达到了GB/T 15000《标准样品工作导则》的要求,溯源性可靠、均匀性良好、稳定性符合要求、定值结果正确。

    内科驱虫联合胸腔镜手术治疗儿童难治性并殖吸虫性胸腔包裹性积液:单中心15例经验与术式探讨
    王洁, 龚胜, 高一
    2026, 44(2):  266-270.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.017
    摘要 ( )   HTML ( )   PDF (2743KB) ( )  
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    目的 探讨吡喹酮内科驱虫联合胸腔镜手术外科干预对儿童难治性并殖吸虫性胸腔包裹性积液的临床疗效、手术时机选择及治疗价值。方法 回顾性分析2015年1月—2025年1月成都市公共卫生临床医疗中心收治的15例并殖吸虫性胸腔包裹性积液手术患儿病例。所有患儿术前经吡喹酮初步治疗,剂量按75 mg/(kg·d)计算,分3次口服,连续3 d为1个疗程,疗程间隔1个月。然后由同一组胸外科医师进行常规单孔胸腔镜手术。术后予抗生素抗感染、驱虫治疗、康复训练,并于术后1个月、3个月、6个月、12个月复查随访。结果 15例患儿中男性11例、女性4例,中位年龄为8.50(5.46,10.79)岁;临床表现均为胸肺型,其中含合并腹型7例,合并心包型3例,合并脑型1例,合并皮下结节型1例。血清呈并殖吸虫IgG抗体阳性的患儿14例,其余1例虽血清学阴性但胸膜病理确诊并殖吸虫感染。所有患儿术前胸部CT均显示存在包裹性积液伴胸膜增厚粘连,并接受吡喹酮治疗2~6个疗程。所有患儿均顺利完成胸腔镜手术,术中均见典型脓胸及纤维分隔。15例患儿术后病理标本均检出夏科-莱登结晶,其中2例查见虫体片段,1例查见虫卵。术后1个月复查,15例患儿的外周血嗜酸粒细胞绝对值由术前的3.70(1.32,8.33)× 109/L下降至术后的0.34(0.23,0.56)× 109/L(Z = -3.41,P < 0.01),嗜酸粒细胞占比由术前的33.00%(16.60%,44.70%)下降至术后的4.20%(2.10%,6.50%)(Z = -3.19,P < 0.01)。症状均缓解,影像学显示肺复张良好,无严重并发症。结论 对于内科治疗欠佳的儿童并殖吸虫性胸腔包裹性积液,联合胸腔镜手术治疗可有效清除病灶,促进肺复张,并能显著逆转机体的嗜酸粒细胞炎症反应。

    2020—2024年湖北省恶性疟流行病学特征及实验室检测分析
    易佳, 林文, 吴冬妮, 董小蓉, 孙凌聪, 朱红, 张聪, 涂珍, 夏菁
    2026, 44(2):  271-276.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.018
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    目的 了解2020—2024年湖北省恶性疟疫情流行特征,以及病例临床症状和实验室检测情况,为防止重症病例和死亡病例的发生提供参考。方法 采集传染病信息报告管理系统和寄生虫病防治信息管理系统中湖北省2020—2024年报告的恶性疟病例信息,对病例的三间分布、就诊情况和实验室检测情况等进行统计分析。结果 2020—2024年湖北省共报告恶性疟251例,99.60%(250/251)为境外输入病例,1例为输血感染。其中,重症病例占12.35%(31/251);死亡病例2例,占0.80%(2/251)。恶性疟病例数占疟疾病例总数的68.02%(251/369),各年度恶性疟病例数占比差异有统计学意义(χ2 = 35.431,P < 0.01)。恶性疟病例输入源以非洲国家为主(占98.80%,247/250),输入性病例数量前3位国家分别为刚果民主共和国(65例)、尼日利亚(46例)和几内亚(19例)。1月份报告恶性疟病例数最多,病例以31~50岁青壮年男性为主。报告病例数前3位市分别为武汉市(86例)、黄石市(41例)和宜昌市(33例),全省70.87%(73/103)的县(区)有恶性疟病例报告。恶性疟病例初诊确诊率为74.90%(188/251),村卫生室和个体医生初诊确诊率较低,仅1/13和1/8。省级、市级、县级和乡镇及以下医疗单位间的初诊确诊率分别为73.08%(19/26)、89.22%(91/102)、81.93%(68/83)、25.00%(10/40),差异有统计学意义(χ2 = 66.325,P < 0.01)。恶性疟病例发病至就诊时间间隔中位数为1 d,1 d内就诊病例占54.18%(136/251),3 d内就诊病例占81.67%(205/251);就诊至确诊时间间隔中位数为1 d,1 d内确诊病例占65.74%(165/251),3 d内确诊病例占88.45%(222/251)。98.41%(247/251)的病例有不同程度的发热,发冷、出汗、头痛、肌肉疼痛分别占57.37%(144/251)、42.23%(106/251)、47.41%(119/251)和10.36%(26/251)。16.33%(41/251)的恶性疟病例出现严重贫血、肝肾损伤等并发症。240份病例抗凝血样快速诊断检测、镜检和实时荧光定量PCR的恶性疟检出率分别是98.33%(236/240)、95.42%(229/240)和100%(240/240),差异有统计学意义(χ2 = 12.664,P < 0.05)。240份外周血涂片可查见疟原虫,70.42%(169/240)的血涂片只见单一环状体期,20.83%(50/240)的血涂片可见环状体期和滋养体期,5.00%(12/240)的血涂片可见环状体、滋养体、裂殖体和配子体等各期虫体。疟原虫密度为1~10万个/μL的血涂片占比最高,为34.17%(82/240);密度为25万个/μL以上的血涂片占21.25%(51/240)。多因素logistic回归分析显示,疟原虫密度是引起重症疟疾的独立危险因素(OR > 1,P < 0.05)。结论 2020—2024年湖北省恶性疟病例数较多且分布广泛,输入来源地主要为非洲,发热为主要临床症状,部分病例确诊时间较长,输入性恶性疟重症率较高,今后应提升患者就诊意识,缩短确诊时间,及时规范治疗,减少重症和死亡病例的发生。

    2014—2023年新疆棘球蚴病住院患者经济负担情况
    王乐, 古瑞娟, 童超, 牛姜水, 阿·孟克, 苏晓红, 任艳军, 柳荆东, 邓大伟, 温浩
    2026, 44(2):  277-283.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.019
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    目的 分析2014—2023年新疆棘球蚴病住院患者的经济负担情况,明确其经济负担的影响因素,为制定和完善新疆棘球蚴病治疗策略提供科学依据。方法 采用分层抽样与便利性抽样相结合的方法,在新疆选取8家医院(三级甲等医院4家、二级甲等医院4家),收集2014年1月1日至2023年12月31日主要诊断为棘球蚴病的住院患者病案首页信息,包括性别、年龄、民族、住院天数、住院费用、医院等级、地区、是否手术、是否医保及棘球蚴病类型等。采用描述性统计方法分析患者人口学特征及费用分布;采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验进行单因素分析;采用对数多元线性回归模型(逐步法)分析住院费用的独立影响因素。采用伤残调整寿命年(DALY)结合人力资本法测算间接经济负担,间接经济负担 = 人均国民生产总值 × DALY × 生产力权重,采用SPSS 24.0软件进行统计学分析。结果 共纳入棘球蚴病住院患者5 184例,2017年出院人数达峰值(865例),2022年降至最低点(230例,较峰值下降73.4%),2023年回升至361例。患者中位年龄为44岁,以45~59岁年龄组为主(32.9%,1 703例),男性占54.5%(2 823例),细粒棘球蚴病占90.1%(4 670例)。住院费用呈偏态分布,中位数从2014年的23 137.2元上升至2022年的34 921.0元。多房棘球蚴病患者平均住院费用(71 302.7元)高于细粒棘球蚴病(29 397.3元)(Z = -11.750,P < 0.05);北疆地区患者平均住院费用(36 283.3元)高于南疆地区(17 703.7元)(Z = -19.701,P < 0.05);住院超过30 d的患者费用均值最高(106 761.4元)(H = 1 263.033,P < 0.05)。对数多元线性回归分析显示,住院天数(标准偏回归系数 = 0.414)、是否手术(标准偏回归系数 = -0.471)、医院等级(标准偏回归系数 = 0.210)、地区、棘球蚴病类型、年龄、是否医保是住院费用的独立影响因素(校正后R² = 0.553,P < 0.05)。间接经济负担分析显示,研究期间棘球蚴病共造成10 007.3个DALY损失,人均损失2.0个DALY;15~44岁年龄组疾病负担最重,DALY损失合计5 465.0人年,占总DALY损失的54.6%。人力资本法测算结果显示,总间接经济负担为42 382.3万元,人均间接经济负担为8.2万元。结论 新疆棘球蚴病患者经济负担呈现显著的结构性差异,多房棘球蚴病是导致高额医疗费用的核心病种,其资源消耗模式与细粒棘球蚴病存在本质区别。15~44岁青壮年群体承担了过半的生产力损失,是间接经济负担主要受影响人群。

    西藏自治区巴青县人群多房棘球蚴病影响因素分析:病例对照研究
    旦增曲珍, 边巴卓玛, 次多杰, 索朗拉姆, 索郎旺杰, 康珠益西, 拉巴桑珠, 贡桑曲珍
    2026, 44(2):  284-289.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.020
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    目的 探讨西藏自治区巴青县人群多房棘球蚴病(AE)的主要影响因素,为牧区棘球蚴病防控提供科学依据。方法 2023年1月—2024年10月在西藏自治区巴青县开展人群棘球蚴病筛查,以经腹部B超检查并依据WS 257—2006《包虫病诊断标准》确诊的AE患者为病例组,同期筛查排除棘球蚴病的居民为对照组,按性别相同、年龄相近(± 5岁)、居住于同一或地理相邻行政村的匹配原则,采用1∶2匹配病例,每个匹配集包含1例病例和2名对照。由统一培训的调查员进行面对面问卷调查。问卷内容包括一般人口学特征、犬只饲养与管理情况、环境暴露因素、个人行为习惯等。采用R软件进行统计学分析,组间比较采用χ2检验;AE患病影响因素采用条件logistic回归分析。结果 共调查258人,其中病例组86人,对照组172人,均为藏族。病例组平均年龄为(44.6 ± 14.2)岁,对照组为(44.1 ± 14.1)岁,两组差异无统计学意义(t = 0.26,P > 0.05)。病例组与对照组在性别、职业、教育水平、身体质量指数值、婚姻状况、家庭常住人口等方面差异均无统计学意义(χ2 = 0.00、1.53、0.83、4.09、0.71、0.53,均P > 0.05)。单因素条件logistic回归分析结果显示,养犬[OR = 2.82,95%置信区间(CI):1.45~5.48]、犬只从不驱虫(OR = 3.22,95% CI:1.09~9.48)、犬粪不规范处理(OR = 4.86,95% CI:2.09~11.30)、经常与犬接触(OR = 2.98,95% CI:1.42~6.24)、家周围有狐狸(OR = 2.42,95% CI:1.37~4.27)、主要饮用江河水(OR = 2.55,95% CI:1.26~5.16)、饮用生水(OR = 2.02,95% CI:1.17~3.48)以及经常食用未清洗新鲜虫草(OR = 3.87,95% CI:1.55~9.67)与AE患病风险相关(均P < 0.05)。多因素条件logistic回归分析结果显示,养犬时间 > 5年(OR = 4.68,95% CI:1.09~20.17)、犬粪不做处理(OR = 9.35,95% CI:2.39~36.64)、与犬经常接触(OR = 6.92,95% CI:1.21~39.51)及饮用水来源为江河湖泊沟塘水(OR = 4.97,95% CI:1.07~23.20)等4个因素是AE患病的主要危险因素。结论 巴青县人群AE的发生与犬源管理及饮水安全密切相关,应加强犬只管理和犬粪规范处理、改善饮水卫生条件并强化牧民健康教育。

    综述
    纳米颗粒在重要寄生虫病疫苗研究中的应用
    吴珂珂, 王立群, 骆学农
    2026, 44(2):  290-295.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.021
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    寄生虫病仍然是全球性的重大公共卫生问题,其传统化学药物治疗常面临不良反应明显及无法阻断再感染等局限。尽管接种预防性疫苗是实现寄生虫病长效控制的理想策略,但寄生虫复杂的生命周期、高度的抗原变异性以及精密的免疫逃避机制,严重制约了传统疫苗的研发进程。近年来,纳米颗粒凭借独特的理化优势,集抗原保护、靶向递送与免疫协同激活功能于一体,为突破寄生虫疫苗研发瓶颈提供了新契机。基于此,本文系统综述了各类纳米颗粒的理化特征及其在血吸虫病、弓形虫病及棘球蚴病等重要寄生虫病疫苗研究中的最新进展,并深入探讨了其在优化抗原递送与免疫调节方面的作用机制;同时,客观剖析了当前纳米疫苗在临床转化与产业化应用中面临的挑战及未来发展趋势,以期为新型寄生虫病疫苗的设计与研发策略提供理论参考。

    脑型疟神经损伤与后遗症研究进展
    崔巍巍, 程洋
    2026, 44(2):  296-304.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.022
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    脑型疟是恶性疟原虫感染最致命的并发症之一,临床多表现为意识障碍或昏迷,外周血可检出无性期疟原虫。该病病死率高达20%,15%~25%的康复者遗留不同程度的长期神经功能障碍,生活质量与社会功能受严重影响。当前研究已明确感染红细胞在脑微血管中的滞留、神经炎症级联反应及血脑屏障破坏是其核心发病机制,但其分子调控网络仍未完全阐明。本综述系统梳理近年来脑型疟发病机制与神经后遗症的研究进展,聚焦中枢神经系统损伤的关键环节,以期为开发靶向性辅助治疗与干预措施提供理论依据。

    病例报告
    1例神经及皮下肌肉囊尾蚴病诊疗分析
    张艳, 温杨, 朱渝
    2026, 44(2):  305-307.  doi:10.12140/j.issn.1000-7423.2026.02.023
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    1例8岁藏族男性患儿,2024年10月25日以间断发热、头痛、呕吐收入四川大学华西第二医院。患儿长期居住于西藏自治区昌都市芒康县,家中饲养牛羊,有生食牛羊肉史。查体发现左侧上臂内侧近肘关节端可扪及一包块,大小为2 cm × 1.5 cm,无明显压痛;血清学检查示棘球蚴抗体IgG阳性;肝功能检查示谷丙转氨酶59 U/L,谷草转氨酶58 U/L;呼吸道病原体多重核酸检测示鼻病毒核酸阳性。10月29日、10月30日及11月6日粪样中均查见绦虫卵。头颅MRI(平扫 + 增强)示双侧大脑半球实质内多发占位,多发类圆形长T1长T2信号影;左上臂浅表超声示左侧肱二头肌肌层内囊实性占位。2024年11月1日予以左上臂皮下及肌肉结节切除,行病理活检,于肌肉及纤维组织内查见虫体,确诊为神经、皮下及肌肉囊尾蚴病。予阿苯达唑[15 mg/(kg·d)]联合吡喹酮[50 mg/(kg·d)]抗寄生虫治疗10 d,地塞米松抗炎治疗后好转出院,停药3 d后再次服药10 d。出院后3个月、6个月电话回访,均未见明显异常。