恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域的克隆表达和抗原性分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域的克隆表达和抗原性分析

仰梦佳1，王素蓉1，诸葛洪祥1 *，陈军虎2

1 苏州大学基础医学与生命科学学院，苏州 215123；2 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海 200025

出版日期:2014-10-30 发布日期:2015-01-06

Cloning，Expression and Antigenic Analysis of Merozoite Surface Protein MSPDBL2-DBL2 Domain from Plasmodium falciparum

YANG Meng-jia1，WANG Su-rong1，ZHUGE Hong-xiang1 *，CHEN Jun-hu2

1 School of Biology and Basic Medical Sciences，Soochow University，Suzhou 215123，China；2 National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Center for Disease Control and Prevention；the Key Laboratory of Parasite and Vector Biology，Ministry of Health；WHO Collaborating Center for Malaria，Schistosomiasis and Filariasis，Shanghai 200025，China

Online:2014-10-30 Published:2015-01-06

摘要/Abstract

摘要：

目的克隆、表达恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2 （PF10_0355）的DBL2结构域，并分析其抗原性。方法 PCR扩增实验室培养的恶性疟原虫标准株3D7的基因组DNA，采用无缝克隆技术快速连接目的片段和质粒载体，构建重组表达质粒pET28a-DBL2，转化至大肠埃希菌BL2l（DE3）中，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并经亲和层析获得纯化的重组蛋白rDBL2。分别以恶性疟患者血清、健康者血清、恶性疟患者混合血清和健康者混合血清作为一抗，蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组蛋白的抗原性。结果 PCR扩增恶性疟原虫疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2 的DBL2基因，获得长约950 bp片段，与理论值相符。菌落PCR鉴定和测序结果均显示，重组质粒pET28a-DBL2构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示，经IPTG诱导并经亲和层析纯化后获得相对分子质量（Mr）约为34 000的包涵体蛋白。Western blotting分析结果显示，重组蛋白rDBL2可被恶性疟患者血清识别，而与健康者血清无特异反应。结论克隆和表达了恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域，重组蛋白rDBL2有良好的抗原性。

关键词: 恶性疟原虫, 裂殖子, 原核表达, 抗原性

Abstract:

Objective To clone and express the DBL domain of Plasmodium falciparum merozoite surface protein MSPDBL2（DBL2）, and investigate its antigenicity. Methods The DBL2 fragment was amplified by PCR and cloned into pET28a vector. The recombinant pET28a-DBL2 plasmid was transformed into E. coli BL21（DE3） and protein expression was induced by IPTG. The expressed product was purified by Ni-NTA affinity chromatography, and analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. Results DBL2 gene fragment of Plasmodium falciparum merozoite surface protein MSPDBL2（950 bp） was obtained by PCR. The recombinant pET28a-DBL2 plasmid was identified by PCR， double enzyme digestion, and DNA sequencing. The recombinant DBL2 protein was expressed in an inclusion body form with Mr 340 000 after being induced with IPTG. Moreover, the purified recombinant DBL2 protein was recognized by sera from patients with falciparum malaria. Conclusion The recombinant pET28a-DBL2 plasmid has been constructed. The purified rDBL2 protein shows adequate antigenicity.

Key words: Plasmodium falciparum, Merozoite, Prokaryotic expression, Antigenicity

仰梦佳1，王素蓉1，诸葛洪祥1 *，陈军虎2. 恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域的克隆表达和抗原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

YANG Meng-jia1，WANG Su-rong1，ZHUGE Hong-xiang1 *，CHEN Jun-hu2. Cloning，Expression and Antigenic Analysis of Merozoite Surface Protein MSPDBL2-DBL2 Domain from Plasmodium falciparum[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

[1]	周瑞敏, 纪鹏慧, 李素华, 杨成运, 刘颖, 钱丹, 邓艳, 鲁德领, 赵玉玲, 赵东阳, 张红卫. 河南省自赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 593-600.
[2]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[3]	徐少杰, 陈绅波, 陈军虎. 恶性疟原虫重复散布家族基因转录调控的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 374-379.
[4]	曹天行, 刘军龙, 张志刚, 史康妍, 石苗, 关贵全, 李有全, 殷宏, 罗建勋. 环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 362-368.
[5]	田斌, 廖瑜, 文岚, 肖芳, 张兵, 申晓君. 长沙市122例输入性恶性疟原虫多药抗性基因1拷贝数变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 127-131.
[6]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[7]	于嘉利, 刘蕾, 杨博, 楚瑞林, 孙毅凡, 刘耀宝, 程洋. 重组卵形疟原虫裂殖子表面蛋白1 N端的抗原性及免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 746-752.
[8]	史善美, 陈军虎. 恶性疟原虫RIFIN蛋白的结构和功能研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 249-255.
[9]	周岩, 陈韶红, 李浩, 程娜, 洪加林, 许学年. 卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 20-26.
[10]	张苍林, 聂仁华, 徐丹, 吕高伟, 王剑, 杨亚明, 邓艳, 刘言, 周红宁. 中缅边境地区恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和PfK13基因多态性与体外药物敏感性相关性的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 580-588.
[11]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 我国恶性疟原虫主要药物抗性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 631-636.
[12]	周水茂, 涂祖武, 杨燕, 陈芳, 贾西帅. 环介导等温扩增检测恶性疟原虫与其他疟原虫的效果评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 423-428.
[13]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 恶性疟原虫抗药性分子标记检测方法研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 490-495.
[14]	金行一, 张玲玲, 朱素娟, 徐卫民, 陈珺芳, 阮卫, 姚立农, 陈华良. 间日疟原虫裂殖子表面蛋白1和环子孢子蛋白基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(3): 323-331.
[15]	宋宏宇, 梁雨晴, 华瑞其, 史媛, 阳爱国, 郭莉, 袁东波, 谢跃, 杨光友. 细粒棘球绦虫磷酸甘油酸变位酶的表达、定位和诊断价值的初步评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 194-201.