弓形虫ROP2-SAG1重组复合蛋白及其重组质粒的免疫效应

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (5): 8-363.

弓形虫ROP2-SAG1重组复合蛋白及其重组质粒的免疫效应

李文姝，谢自新，陈庆新，陈韶，张丽芳^*

温州医学院微生物学免疫学教研室，温州 325032

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-10-30 发布日期:2010-11-09
通讯作者: 张丽芳

Immune response elicited by the recombinant protein and plasmid DNA of complex antigen ROP2-SAG1 from Toxoplasma gondii

LI Wen-shu， XIE Zi-xin， CHEN Qing-xin， CHEN Shao， ZHANG Li-fang^*

Department of Microbiology and Immunology of Wenzhou Medical College, Wenzhou 325032, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-10-30 Published:2010-11-09
Contact: ZHANG Li-fang

摘要/Abstract

摘要： 目的研究弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（SAG1）重组复合抗原（ROP2?鄄SAG1）的核酸和蛋白两种疫苗的免疫效应。方法 60只雌性BALB/c小鼠随机均分为4组（每组15只），即rROP2-SAG1蛋白组、无菌生理盐水组、pcROP2-SAG1质粒组和pcDNA3.1质粒组，rROP2-SAG1组以2.5 μg rROP2-SAG1重组蛋白与等体积佐剂乳化后，背部皮下多点免疫小鼠；无菌生理盐水组以等体积无菌生理盐水替代重组蛋白，首次免疫使用福氏完全佐剂，其余使用福氏不完全佐剂。pcROP2-SAG1组和pcDNA3.1组分别以pcROP2-SAG1和空质粒pcDNA3.1腿部肌肉注射免疫，剂量为100 μg/次；以上各组小鼠共免疫3次，每次间隔2周。采用间接ELISA方法检测免疫后25、45和70 d小鼠血清中特异性IgG抗体，及末次免疫后2周小鼠血清特异性IgG1和IgG2a抗体。用CCK-8细胞增殖法检测小鼠脾细胞增殖，间接ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白介素2（IL-2）表达水平。结果 rROP2-SAG1组小鼠血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间的延长持续升高，pcROP2-SAG1质粒组抗体则随着免疫时间的延长相对稳定。末次免疫后2周，rROP2-SAG1组小鼠血清IgG1抗体水平（1.538±0.183）显著高于IgG2a（0.618±0.122）（P＜0.05），而pcROP2-SAG1组IgG1抗体水平（1.107±0.137）与IgG2a（0.830±0.185）间的差异无统计学意义（P＞0.05）。以特异性抗原rROP2-SAG1为刺激物时，rROP2-SAG1组小鼠脾细胞受特异性抗原刺激的增殖效果（A₄₅₀值=0.348±0.042）显著高于pcROP2-SAG1组（0.123±0.018）（P＜0.05）。rROP2-SAG1组小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ含量［（149.37±30.51） pg/ml］、 IL-2含量［38.58±9.10） pg/ml］，分别与pcROP2-SAG1组IFN-γ［（138.58l±29.92） pg/ml］、 IL-2［37.47l±9.26） pg/ml］比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 ROP2-SAG1重组复合蛋白诱导的抗体水平、脾细胞增值效应显著高于重组质粒pcROP2-SAG1。

关键词: 刚地弓形虫, 棒状体蛋白2, 速殖子主要表面蛋白1, 疫苗

Abstract: Objective To study the immune response elicited by the recombinant protein vaccine and DNA vaccine of the complex antigen ROP2-SAG1 from Toxoplasma gondii. Methods Sixty female BALB/c mice were randomly divided into 4 groups （15 per group）. Mice in rROP2-SAG1 group were immunized subcutaneously with 2.5 μg rROP2-SAG1 protein formulated in Freund′s adjuvant. Mice in control group received only adjuvant emulsified with normal saline. Mice in recombinant plasmid pcROP2-SAG1 and control plasmid pcDNA3.1 groups were each injected intramuscularly with 100 μg of pcROP2-SAG1 and pcDNA3.1, respectively. All the mice received three immunizations at 2-week intervals. Serum samples were collected at 25, 45, and 70 days after immunization for determining antibody IgG, and at 2 weeks after the last immunization IgG1 and IgG2a were detected all by ELISA. Cell counting kit-8 （CCK-8） was used to determine the splenocyte proliferation, and the supernatant of cultured splenocytes was collected for the detection of IFN-γ by ELISA. Results The level of IgG continued to rise in rROP2-SAG1 group after immunization, and similarly in pcROP2-SAG1 group. At 2 weeks after the last immunization, level of IgG1 （1.538±0.183） was higher than that of IgG2a （0.618±0.122）（P＜0.05） in rROP2-SAG1 group. Whereas no significant difference between IgG1 （1.107±0.137） and IgG2a （0.830±0.185） was observed in pcROP2-SAG1 group （P＞0.05）. Compared with the pcROP2-SAG1 group （A₄₅₀=0.123±0.018）, more significant proliferation response of splenocytes was observed in rROP2?-SAG1 group （0.348±0.042）（P＜0.05）. There was no significant difference（P＞0.05） of IFN-γ and IL-2 in the supernatant of cultured splenocytes between the groups of rROP2-SAG1 and pcROP2-SAG1. Conclusion The antibody level and splenocyte proliferation have been significantly higher in mice immunized with recombinant protein rROP2-SAG1 than those with recombinant plasmid pcROP2-SAG1.

Key words: Toxoplasma gondii, Rhoptry protein 2, Major surface protein 1, Vaccine

李文姝;谢自新;陈庆新;陈韶;张丽芳. 弓形虫ROP2-SAG1重组复合蛋白及其重组质粒的免疫效应[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(5): 8-363.

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