纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (5): 15-331.

纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原

方正明¹，王升²，苏斌涛¹，宫念樵²，刘文琪¹，明长生^{2 *}

1 华中科技大学同济医学院寄生虫学教研室，武汉 430030；2 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所，武汉 430030

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-10-30 发布日期:2010-11-09
通讯作者: 明长生

Construction and identification of a full-length cDNA library from Spirometra erinaceieuropaei

FANG Zheng-ming¹，WANG Sheng²，SU Bin-tao¹，GONG Nian-qiao²，
LIU Wen-qi¹，MING Chang-sheng^{2 *}

1 Department of Parasitology，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China；2 Institute of Organ Transplantation，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430003，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-10-30 Published:2010-11-09
Contact: MING Chang-sheng

摘要/Abstract

摘要： 取弓形虫RH株感染小鼠腹腔灌洗液20 ml，加入无菌生理盐水至250 ml，在5 μm滤膜孔径的容器过滤器上过滤。收集的滤液经1 512×g离心15 min，沉淀即为纯净虫体。超声粉碎虫体，11 200×g离心30 min，收集上清即为弓形虫可溶性抗原。采集感染弓形虫SD大鼠慢性期血清和健康SD大鼠血清，用上述抗原作间接酶联免疫吸附试验（indirect ELISA），检测抗原特异性和抗原效价。结果显示，通过改进过滤器、滤膜孔径和过滤方法纯化弓形虫速殖子，平均白细胞清除率为99.9％，红细胞清除率为80.3％，虫体回收率为71.0％。平均每只小鼠提取1.38 mg弓形虫可溶性抗原。间接ELISA试验结果表明，抗原效价为5 μg/ml。

关键词: 弓形虫, 纯化, 抗原, 纤维素滤膜

Abstract: 20 ml peritoneal lavage fluid of mice infected with Toxoplasma gondii RH strain was diluted to 250 ml with sterilized physiological saline, and filtered through cellulose membrane filters （pore size：5 μm）. The filtrate was centrifuged at 1 512×g for 15 min， and the sediment was pure T. gondii tachyzoites which were then sonicated. The soluble antigen was prepared by centrifugation at 11 200×g for 30 min. Sera of T. gondii infected SD rat and normal SD rats were collected for immunodetection of soluble antigen. The specificity and valence of soluble antigen were detected with indirect ELISA. The mean removal rates of mouse leukocytes and erythrocytes were 99.9% and 80.3%, respectively, and recovery rate of tachyzoites was 71%. The soluble antigen was extracted from purified T. gondii （1.38 mg per mouse）. Indirect ELISA showed that the lowest effective antigen concentration was 5 μg/ml.

Key words: Toxoplasma gondii, Purification, Antigen, Cellulose membrane filter

方正明;王升;苏斌涛;宫念樵;刘文琪;明长生. 纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(5): 15-331.

FANGZheng-ming;WANGSheng;SUBin-tao;GONGNian-qiao;LIUWen-qi;MINGChang-sheng*. Construction and identification of a full-length cDNA library from Spirometra erinaceieuropaei[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(5): 15-331.

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