弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1重组嵌合抗原免疫血清的制备与鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2007, Vol. 25 ›› Issue (5): 10-400.

弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1重组嵌合抗原免疫血清的制备与鉴定

李文姝1;朱珊丽1;王鹏飞1;张丽芳1;闵太善2;黄伟达2

1 温州医学院微生物学免疫学教研室，温州 325032； 2 复旦大学生化与分子生物学实验室，上海 200433

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-10-30 发布日期:2007-10-30

Preparation and Identification of Immune Serum againstRecombinant Fusion Protein of Rhoptry 2 andMajor Surface Protein 1 from Toxoplasma gondii

LI Wen-shu1;ZHU Shan-li1;WANG Peng-fei1;ZHANG Li-fang1;MIN Tai-shan1;HUANG Wei-da1

1 Department of Microbiology and Immunology of Wenzhou Medical College，Wenzhou 325032，China；2 Laboratory of Biochemistry and Molecular Biology of Fudan University，Shanghai 200433，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-10-30 Published:2007-10-30

摘要/Abstract

摘要： 目的制备与鉴定弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（P30）重组嵌合抗原的特异性免疫兔血清。方法将已构建的重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus（DE3）-RIL菌株，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后，分离上清液和包涵体，包涵体用2 mol/L和4 mol/L尿素梯度洗涤去杂蛋白，最后用8 mol/L尿素溶解洗涤后的包涵体，进行十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），割胶回收目的蛋白，研磨成乳浊状后以背部多点注射免疫大白耳兔，制备免疫兔血清，以免疫扩散试验检测生成的特异性抗体，间接ELISA法测定免疫血清的抗体效价，蛋白质印迹（Western blotting）分析免疫血清的抗体特异性。结果免疫结束后，通过对流免疫扩散试验检测到了针对rROP2-P30的特异性抗体，间接ELISA法测定到其抗体滴度最高可达1 ∶ 12 800，Western blotting分析结果表明，此免疫血清与可溶性的重组蛋白、包涵体形式的重组蛋白均能特异性结合。结论得到了针对rROP2-P30重组嵌合抗原的特异性免疫血清。

关键词: 弓形虫, 重组嵌合抗原, ROP2-P30, 免疫血清

Abstract: Objective To prepare and identify immune serum against the recombinant fusion protein of rhoptry 2 （ROP2） and major surface protein 1（P30） from Toxoplasma gondii. Methods The constructed recombinant plasmid of pET28b/ROP2-P30 was transformed to a bacterium BL21-Codon Plus（DE3）-RIL strain and was expressed under IPTG induction. Cells were lysed by multiple rounds of sonication to obtain supernatant and inclusion body respectively. The inclusion body was washed with 2 mol/L and 4 mol/L urea to remove the nonspecific protein. The washed products diss-olved in 8 mol/L urea were received by SDS-PAGE. Two rabbits were immunized with the fusion protein rROP2-P30 and sera from the rabbits were collected. Immune diffusion test， indirect ELISA and Western-blot were used to detect anti-body titer and specificity of the immune serum against rROP2-P30. Results Immune diffusion test demonstrated that specific immune serum were obtained. Indirect ELISA confirmed that the antibody titer in the serum reached 1:12 800 and the rROP2-P30 was recognized by specific IgG in this serum by Western-blot analysis. Conlusion Specific immune serum against the recombinant fusion protein rROP2-P30 has been prepared.

Key words: Toxoplasma gondii, Recombinant fusion protein, ROP2-P30, Immune serum

李文姝;朱珊丽;王鹏飞;张丽芳;闵太善;黄伟达. 弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1重组嵌合抗原免疫血清的制备与鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2007, 25(5): 10-400.

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