弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (6): 9-423.

弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化

林绮萍^1*, 吴少庭^1**, 翁亚彪², 雷明军³, 潘晖榕³, 袁仕善¹,
温见翔⁴, 秦莉³, 黄达娜¹, 张仁利¹, 高世同¹

1 深圳市疾病预防控制中心,深圳 518020; 2 华南农业大学兽医学院,广州 510642; 3 华中科技大学同济医学院,武汉 430030; 4 广东医学院微生物学教研室,湛江 524023

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-12-30 发布日期:2005-12-30

Expression and Purification of Toxoplasma gondii GRA4Gene in Prokaryotic System

LIN Qi-ping,WU Shao-ting**,WENG Ya-biao,LEI Ming-jun,PAN Hui-rong,
YUAN Shi-shan,WEN Jian-xiang,QIN Li,HUANG Da-na,ZHANG Ren-li,GAO Shi-tong

Shenzhen Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen 518020,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-12-30 Published:2005-12-30

摘要/Abstract

摘要： 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白4（GRA4）的pET原核细胞表达系统，并对其表达产物进行纯化及其免疫学活性测定。方法利用PCR扩增弓形虫GRA4基因片段，定向亚克隆入原核细胞表达载体pET-23a（+），转化大肠埃希菌（E.coli BL21 DE3），以组氨酸结合柱亲和层析法纯化表达产物，并对其进行抗原活性分析。将纯化的重组蛋白免疫小鼠，用ELISA检测其特异性抗体滴度。结果成功构建了弓形虫pET-GRA4原核细胞表达系统，其表达产物相对分子质量（Mr）约为 40 000，主要以包涵体形式存在，纯化后的重组蛋白能被人工感染弓形虫RH株速殖子的兔血清识别。免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性IgG抗体。结论利用pET原核细胞表达系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白，该蛋白具有一定的免疫学活性。

关键词: 弓形虫, 致密颗粒蛋白4, 原核细胞, 基因表达, 蛋白纯化

Abstract: Objective To construct a prokaryotic expression system containing the dense granule protein 4 （GRA4） of Toxoplasma gondii，purify the expressed protein and detect its immunogenicity. Methods The specific fragment of GRA4 gene was amplified by PCR. After subcloning the prokaryotic expression recombinant pET-GRA4，the expressed product was purified with His·BindTM affinity chromatography and analyzed by Western blot. BALB/c mice were immunized with the GRA4 recombinant protein，and the antibody IgG titer was detected by ELISA. Results The pET-GRA4 prokaryotic expression system was obtained. The MW of the expressed protein was Mr 40 000 and formed in inclusion body. After purification，the recombinant protein could be specifically recognized by the T.gondii infected rabbit serum. Mice immunized with the purified recombinant protein elicited high titer of IgG antibody. Conclusion The pET-GRA4 recombinant protein was successfully expressed and purified，which shows the immunogenicity.

Key words: Toxoplasma gondii, GRA4, Prokaryotic expression, Protein purification

林绮萍;吴少庭;翁亚彪;雷明军;潘晖榕;袁仕善;温见翔;秦莉;黄达娜;张仁利;高世同. 弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2005, 23(6): 9-423.

LINQi-ping;WUShao-ting**;WENGYa-biao;LEIMing-jun;PANHui-rong;YUANShi-shan;WENJian-xiang;QINLi;HUANGDa-na;ZHANGRen-li;GAOShi-tong. Expression and Purification of Toxoplasma gondii GRA4Gene in Prokaryotic System[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2005, 23(6): 9-423.

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