多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用

苏梦1,2，郭小腊2，杨静2，邵忠伟2，丁军涛3，项海涛1，骆学农2,4，郑亚东2,4，孙晓林1*

1甘肃农业大学动物医学院，兰州730070；2 中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃动物寄生虫病重点实验室，兰州730046；3 新疆大学生命科学与技术学院，乌鲁木齐830046；4 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州225009

出版日期:2016-10-30 发布日期:2016-11-09

Screening and Applications of qPCR Primers for apomucin Gene of Echinococcus multilocularis

SU Meng1,2, GUO Xiao-la2, YANG Jing2, SHAO Zhong-wei2, DING Jun-tao3, XIANG Hai-tao1, LUO Xue-nong2,4, ZHENG Ya-dong2,4, SUN Xiao-lin1*

1 College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China；2 State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science, Lanzhou 730046, China；3 College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China；4 Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou 225009, China

Online:2016-10-30 Published:2016-11-09

摘要/Abstract

摘要： 目的筛选多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）apomucin基因（Em-apo）的qPCR最佳引物，探索该基因的表达水平。方法根据GeneDB中4种Em-apo序列，设计引物并通过荧光定量PCR（qPCR）对引物进行分析，确定每对引物的特异性、PCR扩增效率。利用筛选得到的最佳引物，分别检测经阿苯达唑（5 μg/ml）和胰岛素（100 ng/ml）培养处理的多房棘球绦虫原头节（1 000个）Em-apo表达水平的变化，用稀释阿苯达唑的DMSO和胰岛素的PBS作为各自的对照。结果筛选分别得到了Em-apo-1、Em-apo-2/3、Em-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对，qPCR熔解曲线分析结果显示，每对引物的扩增产物只出现单峰，且扩增效率均为95%～101%。qPCR分析结果显示，与DMSO对照组（1.00）相比，多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑处理后，Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平均有所上升，分别为1.51±0.27、1.39±0.30和1.14±0.18，三者差异无统计学意义（P>0.05）；与PBS对照组（1.00）相比，原头节经胰岛素处理后，Em-apo表达水平的变化不一，其中Em-apo-1的表达水平基本不变，Em-apo-4的表达水平有所下降，而Em-apo-2/3明显下调（0.73±0.09），但三者差异无统计学意义（P>0.05）。结论本实验筛选确定的Em-apo基因的qPCR引物特异，可用于Em-apo基因表达水平的检测。多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑和胰岛素处理后，对Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平有一定的影响。

关键词: 多房棘球绦虫, apomucin基因, qPCR, 阿苯达唑, 胰岛素

Abstract: Objective To screen for the optimal qPCR primers for Echinococcus multilocularis apomucin gene（Em-apo） and analyze Em-apo expression. Methods Primers were designed based on 4 Em-apo sequences from GeneDB. Primer specificity and PCR efficiency were determined, based on which the optimal primer pairs were selected. Alterations of Em-apo expression in 1 000 E. multilocularis protoscoleces treated with albendazole（5 μg/ml） and insulin（100 ng/ml） were separately assessed using the selected primers. DMSO used in albendazole dilution and in PBS insulin dilution were used as the control. Results Specific primers for Em-apo-1, Em-apo-2/3, Em-apo-4 and actin were selected. qPCR melting curves revealed a single peak for each primer pair and an amplification efficiency from 95% to 101%. The qPCR showed increased expression of Em-apo-1（1.51±0.27）, Em-apo-2/3 （1.39±0.30） and Em-apo-4（1.14±0.18） after albendazole treatment in comparison to the DMSO control（1.00）（P>0.05 among the three genes）; and an unaltered Em-apo-1 expression, slightly decreased Em-apo-4 expression, and significantly decreased Em-apo-2/3 expression（0.73±0.09） after insulin treatment in comparison to the PBS control（P>0.05 among the three genes）. Conclusion The selected specific primers for Em-apo genes can be used to analyze the gene expression by qPCR. Treatment with albendazole and insulin show certain effects on the expression of Em-apo genes in E. multilocularis protoscoleces.

Key words: Echinococcus multilocularis, apomucin gene, qPCR, Albendazole, Insulin

苏梦1,2，郭小腊2，杨静2，邵忠伟2，丁军涛3，项海涛1，骆学农2,4，郑亚东2,4，孙晓林1*. 多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

SU Meng1,2, GUO Xiao-la2, YANG Jing2, SHAO Zhong-wei2, DING Jun-tao3, XIANG Hai-tao1, LUO Xue-nong2,4, ZHENG Ya-dong2,4, SUN Xiao-lin1*. Screening and Applications of qPCR Primers for apomucin Gene of Echinococcus multilocularis[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

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