葛可1,仇晓艳2,王丽娟1,陈慧3,张璐彦3,邱竞帆1,王勇1*
GE Ke1,QIU Xiao-yan2,WANG Li-juan1,CHEN Hui3,ZHANG Lu-yan3, QIU Jing-fan1,WANG Yong1*
摘要: 目的 研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株和TgCtwh3株排泄-分泌抗原(ESA)体外诱导小鼠CD4+CD25+调节性T细胞凋亡和IFN-γ分泌方面的差异。 方法 分别制备刚地弓形虫RH株和TgCtwh3株的ESA。将分离的野生型C57BL/6小鼠脾单个核细胞随机分为3组(每孔2×106细胞),分别加入RH株ESA、TgCtwh3株ESA(均为10 μg/ml )和鸡卵清蛋白(OVA)进行诱导刺激,流式细胞术检测各组诱导刺激48 h和72 h的CD4+CD25+调节性T细胞的早期凋亡情况,ELISA检测各组诱导刺激72 h细胞培养上清中的γ干扰素(IFN-γ)分泌水平。另外,将分离的野生型C57BL/6小鼠脾单个核细胞随机分为2大组(每孔2×106细胞),其中一大组在分别加入两株ESA(10 μg/ml)和OVA的同时加入抗IFN-γ中和抗体(10 μg/ml)进行诱导刺激72 h,流式细胞术检测各组CD4+CD25+调节性T细胞早期凋亡情况。用两虫株 ESA(10 μg/ml)及OVA分别诱导刺激IFN-γ基因敲除型和野生型C57BL/6小鼠的脾单个核细胞(每孔2×106细胞)72 h后,流式细胞术检测各组CD4+CD25+调节性T细胞早期凋亡情况。 结果 制备的刚地弓形虫RH株和TgCtwh3株ESA抗原蛋白浓度分别为0.54 mg/ml和2.14 mg/ml。流式细胞术检测结果显示,RH株和TgCtwh3株ESA组诱导刺激48 h后,CD4+CD25+调节性T细胞的早期凋亡率分别为(12.90±1.26)%和(9.71±1.04)%,均显著高于OVA对照组(4.48±0.48)%(P<0.01);诱导刺激72 h后,RH株ESA组诱导CD4+CD25+调节性T细胞的凋亡率为(15.21±1.11)%,仍明显高于TgCtwh3株ESA组(11.02±0.92)%(P<0.05)和OVA对照组(10.10±1.49)%(P<0.01)。ELISA检测结果显示,RH株和TgCtwh3株ESA组诱导刺激脾单个核细胞72 h的培养上清中分泌的IFN-γ水平分别为(4 764.0±118.7)pg/ml和(3 629.0±33.6)pg/ml(P<0.01),均显著高于OVA对照组的(679.4±30.6)pg/ml(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,RH株ESA加抗IFN-γ中和抗体组诱导CD4+CD25+调节性T细胞的早期凋亡率为(10.44±1.44)%,明显低于未加抗IFN-γ中和抗体组(14.96±0.83)%(P<0.05);但TgCtwh3株ESA加抗IFN-γ中和抗体与否诱导CD4+CD25+调节性T细胞的早期凋亡率变化不大(P>0.05)。RH株ESA诱导IFN-γ基因敲除小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞凋亡率为(10.64±0.55)%,明显低于野生型小鼠的(15.21±1.11)%(P<0.01);TgCtwh3株ESA诱导两组小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞凋亡率的差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 刚地弓形虫RH株ESA在体外诱导CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及促IFN-γ分泌强于TgCtwh3株ESA。弓形虫ESA诱导机体产生IFN-γ可通过介导调节性T细胞凋亡来促进弓形虫感染早期抗感染免疫力的形成。