抗弓形虫β微管蛋白小分子抗原肽多克隆抗体的制备及鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2014, Vol. 32 ›› Issue (4): 19-322-323.

抗弓形虫β微管蛋白小分子抗原肽多克隆抗体的制备及鉴定

毛小勇1，华倩倩2，李相志2，姚丽丽2，谭峰2 *

1 温州医科大学附属诸暨医院，诸暨 311800；
2 温州医科大学基础医学院，温州 325035

出版日期:2014-08-30 发布日期:2014-10-31

Preparation and Identification of Polyclonal Antibody against Small Peptides of β-tubulin of Toxoplasma gondii

MAO Xiao-yong1，HUA Qian-qian2，LI Xiang-zhi2，YAO Li-li2，TAN Feng2 *

1 The Affiliated Zhuji Hospital of Wenzhou Medical University，Zhuji 311800，China；2 School of Basic Medical Sciences，Wenzhou Medical University，Wenzhou 325035，China

Online:2014-08-30 Published:2014-10-31

摘要/Abstract

摘要： 对弓形虫GT1株、ME49株和人的β微管蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析。根据生物信息学分析结果，人工合成弓形虫β微管蛋白氨基酸序列C端小分子抗原肽。用合成的抗原肽免疫日本大耳兔，每2周免疫1次，0.5 mg/（只·次），共5次。末次免疫后2周，收集兔血清，ELISA检测血清中特异性抗体效价，蛋白质印迹（Western blotting）检测该多克隆抗体与弓形虫RH株、ME49株和PRU株速殖子蛋白的免疫反应。生物信息学分析结果表明，弓形虫GT1株与ME49株的β微管蛋白的氨基酸序列完全一致，与人的β微管蛋白氨基酸序列同源性为98%，差异氨基酸主要集中在C端。经5次免疫后，ELISA证实兔血清中抗体效价为1 ∶ 52 800。Western blotting分析结果显示，该多克隆抗体可分别与弓形虫RH株、ME49株和PRU株的β微管蛋白特异性结合。

关键词: 刚地弓形虫, &beta, -微管蛋白, 多克隆抗体

Abstract: The amino acid sequences of β-tubulin from Toxoplasma gondii stains （GT1 and ME49） and human were aligned by ClustalW2 software. Based on the alignment result， the C-terminal peptides of β-tubulin of T. gondii were artificially synthesized. Rabbits were immunized with 0.5 mg synthesized peptides for five times at 2-week intervals. Serum samples were collected at the second week after the final immunization， and were analyzed for specific antibodies by ELISA. Finally， the specific-β-tubulin polyclonal antibody was evaluated by Western blotting with the total protein of RH strain， ME49 strain， and PRU strain of T. gondii， respectively. The results showed that β-tubulin of T. gondii stains（GT1 and ME49） shared 100% amino-acid sequence identity， and there was 98% amino acid homology between T. gondii and human. The main variable region was the C-terminus. After the fifth immunization， the titers of polyclonal antibody reached 1 ∶ 52 800. Western blotting result indicated that the specific-β-tubulin polyclonal antibody reacted with β-tubulin in all the three strains （RH， ME49， and PRU）， respectively.

Key words: Toxoplasma gondii；&beta, -tubulin；Polyclone antibody

毛小勇1, 华倩倩2, 李相志2, 姚丽丽2, 谭峰2 *. 抗弓形虫β微管蛋白小分子抗原肽多克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2014, 32(4): 19-322-323.

MAO Xiao-Yong-1, HUA Qian-Qian-2, LI Xiang-Zhi-2, TAO Li-Li-2, TAN Feng-2 *. Preparation and Identification of Polyclonal Antibody against Small Peptides of β-tubulin of Toxoplasma gondii[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2014, 32(4): 19-322-323.

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