中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (2): 8-124.
蔡玉春, 陈家旭*, 郭俭, 陈韶红, 童小妹, 田利光
CAI Yu-chun, CHEN Jia-xu*, GUO Jian, CHEN Shao-hong, TONG Xiao-mei, TIAN Li-guang
摘要: 目的 对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。 方法 7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1 500/只)42 d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50 μg/(只·次)。取两组免疫前,以及首次免疫后2~18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化。IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8~18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性。 结果 静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降。纯化后IgY浓度约为6.5~9.0 mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1 ∶ 16和1 ∶ 51 200。经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25 000和68 000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应。 结论 静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性。