细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (2): 9-128.

细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定

李洁¹，王志钢^{1 *}，郝喜燕¹，陈献威¹，王红霞¹，李树裕¹，杨娇馥¹，杨军²

1内蒙古大学生命科学学院，哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特 010021；2 内蒙古自治区呼和浩特市环境科学研究所，呼和浩特 010030

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-04-30 发布日期:2010-04-30
通讯作者: 王志钢

Prokaryotic Expression and Immunologic Identification of P-29 Gene from Echinococcus granulosus Hydatid Cyst

LI Jie¹，WANG Zhi-gang^{1 *}，HAO Xi-yan¹，CHEN Xian-wei¹，WANG Hong-xia¹，LI Shu-yu¹，YANG Jiao-fu¹，YANG Jun²

1 College of Life Science，Inner Mongolia University，Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology，Ministry of Education，Hohhot 010021，China；2 Hohhot Institute of Environmental Sciences，Hohhot 010030，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-04-30 Published:2010-04-30
Contact: WANG Zhi-gang

摘要/Abstract

摘要： 目的对细粒棘球蚴P-29基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法以细粒棘球蚴总RNA为模板，反转录PCR扩增P-29基因，将其克隆至原核表达载体pET44a（+）中，构建重组原核表达载体pET-P-29，转入大肠埃希菌BL21（DE3）中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察重组蛋白的表达情况，用蛋白纯化试剂盒纯化蛋白，蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清的免疫反应性。结果 PCR、双酶切和DNA测序结果表明，重组质粒pET-P-29构建成功。SDS-PAGE结果显示，重组蛋白Nus-P-29的相对分子质量（M_r）约为93 000，纯化后的蛋白浓度为0.78 mg/ml。重组蛋白Nus-P-29能被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论细粒棘球蚴P-29基因表达成功，纯化后的重组蛋白Nus-P-29具有较强的免疫反应性。

关键词: 细粒棘球蚴, 特异性抗原基因, 原核表达

Abstract: Objective To clone and express P-29 gene of Echinococcus granulosus, and analyze its immunore-activity. Methods Total RNA was extracted from the hydatid cyst of E. granulosus and its P-29 gene was amplified by RT-PCR. The PCR product was cloned into pET44a（+） vector. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 （DE3） and followed by expression of the protein induced by IPTG. The protein was purified, and tested by SDS-PAGE. Its immunoreactivity was examined by Western blotting. Results The recombinant expression plasmid was identified by PCR, double endonuclease digestion and sequencing. The recombinant Nus-P-29 was about M_r93 000 with a concentration of 0.78 mg/ml. It was recognized by the sera of cystic echinococcosis patients. Conclusion The P-29 gene has been expressed with adequate immunoreactivity.

Key words: Echinococcus granulosus, Specific antigen gene, Prokaryotic expression

李洁;王志钢;郝喜燕;陈献威;王红霞;李树裕;杨娇馥;杨军. 细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(2): 9-128.

LIJie;WANGZhi-gang*;HAOXi-yan;CHENXian-wei;WANGHong-xia;LIShu-yu;YANGJiao-fu;YANGJun. Prokaryotic Expression and Immunologic Identification of P-29 Gene from Echinococcus granulosus Hydatid Cyst[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(2): 9-128.

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