猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (4): 5-317.

猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析

方文¹,包怀恩2^*,肖靓靓²,牟荣²

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-08-30 发布日期:2009-08-30

Screening，Identification and Bioinformatic Analysis of Taenia solium Cysticercus

^{FANG Wen¹,BAO Huai-en^{2 *},XIAO Liang-liang²,MU Rong²}

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-08-30 Published:2009-08-30

摘要/Abstract

摘要：

目的对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析。方法四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者，口服槟榔-南瓜子驱虫，收集、制备虫卵悬液（8万个/ml）。将6头20 d龄三元杂交乳猪均分实验组和空白对照组，实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml。40 d后，分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清；收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白，进行双向电泳（2-DE）分析。将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜），用实验组混合血清及对照组混合血清（均为1 ∶ 10）为一抗，羊抗猪HRP-IgG（1 ∶ 200）为二抗，进行蛋白质印迹（Western blot-ting）分析，比较两组杂交蛋白点的差异，确定猪囊尾蚴抗原抗体阳性杂交斑点，据此挖取双向电泳与之对应的蛋白点，用电喷雾离子阱型质谱仪（ESI-Trap MS）进行质谱鉴定。搜索美国国家生物技术信息中心（NCBI）网站信息进行生物信息学分析。结果双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点，相对分子质量为Mr 14 400～94 000，等电点（pI）为3.0～10.0。筛选出7个特异性抗原，其中的4个分别为AF239799-1膜联蛋白（AF239799-1 annexin）、细胞支架肌动蛋白-2（cytoskeletal actin-2）、原肌球蛋白（tropomyosin）和肌动蛋白-1（actin-1）。前1个蛋白已被鉴定为猪带绦虫特异性抗原，后3个蛋白抗原与NCBI网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致，为猪囊尾蚴特异性抗原。结论共获得3个猪囊尾蚴特异性抗原，即细胞支架肌动蛋白-2、原肌球蛋白和肌动蛋白-1。

关键词: 猪带绦虫, 囊尾蚴, 抗原, 双向电泳, 蛋白质印迹, 质谱

Abstract:

Objective To screen and identify specific antigens of Taenia solium cysticercus， and predict the function of target proteins using bioinformatics method. Methods Patients infected with Taenia solium were dewormed by decoction arecae and pumpkin seeds to collect worms， and eggs were then prepared. Six three-way crossed hybrid pigs were randomly divided into experimental group and control group， and each experimental pig was infected with 80 000 T. solium eggs. Serum samples were collected at 40 days after infection. The total protein of T. solium cysticercus was separated by two-dimensional electrophoresis， and Western blotting was performed to find out distinct antigens. Proteins from the two groups were identified by ESI-Trap MS. Query in NCBI database was made to confirm function of the proteins. Results 207±9 spots were detected through Coomassie brilliant blue-stained gels with Mr 14 400-94 000 and pI 3.0-10.0. Western blotting showed 7 specific antigen spots with pool sera of infected pigs. Four of the 7 antigens with known functions were respectively ascribed to cytoskeletal actin-2（adult-specific）， tropomyosin（cysticercus-specific）， AF239799-1 annexin （cysticercus-specific） and actin-1（cysticercus-specific）. Conclusion Three specific antigens of Taenia solium cysticercus have been identified.

Key words: Taenia solium, Cysticercus, Antigen, Two-dimensional electrophoresis, Western blotting, MS/MS spectrometry

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