猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (4): 5-317.

猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析

方文¹,包怀恩2^*,肖靓靓²,牟荣²

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-08-30 发布日期:2009-08-30

Screening，Identification and Bioinformatic Analysis of Taenia solium Cysticercus

^{FANG Wen¹,BAO Huai-en^{2 *},XIAO Liang-liang²,MU Rong²}

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-08-30 Published:2009-08-30

摘要/Abstract

摘要：

目的对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析。方法四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者，口服槟榔-南瓜子驱虫，收集、制备虫卵悬液（8万个/ml）。将6头20 d龄三元杂交乳猪均分实验组和空白对照组，实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml。40 d后，分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清；收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白，进行双向电泳（2-DE）分析。将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜），用实验组混合血清及对照组混合血清（均为1 ∶ 10）为一抗，羊抗猪HRP-IgG（1 ∶ 200）为二抗，进行蛋白质印迹（Western blot-ting）分析，比较两组杂交蛋白点的差异，确定猪囊尾蚴抗原抗体阳性杂交斑点，据此挖取双向电泳与之对应的蛋白点，用电喷雾离子阱型质谱仪（ESI-Trap MS）进行质谱鉴定。搜索美国国家生物技术信息中心（NCBI）网站信息进行生物信息学分析。结果双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点，相对分子质量为Mr 14 400～94 000，等电点（pI）为3.0～10.0。筛选出7个特异性抗原，其中的4个分别为AF239799-1膜联蛋白（AF239799-1 annexin）、细胞支架肌动蛋白-2（cytoskeletal actin-2）、原肌球蛋白（tropomyosin）和肌动蛋白-1（actin-1）。前1个蛋白已被鉴定为猪带绦虫特异性抗原，后3个蛋白抗原与NCBI网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致，为猪囊尾蚴特异性抗原。结论共获得3个猪囊尾蚴特异性抗原，即细胞支架肌动蛋白-2、原肌球蛋白和肌动蛋白-1。

关键词: 猪带绦虫, 囊尾蚴, 抗原, 双向电泳, 蛋白质印迹, 质谱

Abstract:

Objective To screen and identify specific antigens of Taenia solium cysticercus， and predict the function of target proteins using bioinformatics method. Methods Patients infected with Taenia solium were dewormed by decoction arecae and pumpkin seeds to collect worms， and eggs were then prepared. Six three-way crossed hybrid pigs were randomly divided into experimental group and control group， and each experimental pig was infected with 80 000 T. solium eggs. Serum samples were collected at 40 days after infection. The total protein of T. solium cysticercus was separated by two-dimensional electrophoresis， and Western blotting was performed to find out distinct antigens. Proteins from the two groups were identified by ESI-Trap MS. Query in NCBI database was made to confirm function of the proteins. Results 207±9 spots were detected through Coomassie brilliant blue-stained gels with Mr 14 400-94 000 and pI 3.0-10.0. Western blotting showed 7 specific antigen spots with pool sera of infected pigs. Four of the 7 antigens with known functions were respectively ascribed to cytoskeletal actin-2（adult-specific）， tropomyosin（cysticercus-specific）， AF239799-1 annexin （cysticercus-specific） and actin-1（cysticercus-specific）. Conclusion Three specific antigens of Taenia solium cysticercus have been identified.

Key words: Taenia solium, Cysticercus, Antigen, Two-dimensional electrophoresis, Western blotting, MS/MS spectrometry

方文;包怀恩;肖靓靓;牟荣. 猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(4): 5-317.

FANGWen;BAOHuai-en*;XIAOLiang-liang;MURong. Screening，Identification and Bioinformatic Analysis of Taenia solium Cysticercus[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2009, 27(4): 5-317.

[1]	姜文静, 孟雅莉, 赵利娜, 王春苗, 张晓磊. 刚地弓形虫棒状体蛋白18和膜表面抗原30复合核酸疫苗对小鼠的免疫保护作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 532-538.
[2]	刘文虎, 黄铭, 梁金, 刘建雄, 温兆孟, 马少波. 脑室型脑囊尾蚴病伴脑积水1例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 644-646.
[3]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[4]	叶井明, 何威, 刘慧媛, 鱼潇, 罗波, 刘美辰, 周必英. 猪囊尾蚴排泄分泌抗原TPx对仔猪树突状细胞活化的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 286-293.
[5]	陈国梁, 王立群, 李艳萍, 刘婷丽, 李红, 张少华, 骆学农, 强文军. 基于novel-miR1检测家兔豆状囊尾蚴感染的滚环扩增方法的建立和应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 294-299.
[6]	段曰黎, 喻一奇, 朱浩翔, 王新宇. 非典型脑囊尾蚴病1例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(1): 128-130.
[7]	焦红杰, 齐文静, 郭刚, 包建玲, 吴川川, 宋传龙, 李军, 张文宝, 严媚. 细粒棘球蚴抗原B对小鼠巨噬细胞RAW264.7的极化作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(1): 23-28.
[8]	邹伟浩, 吴蔚玲, 廖远鹏, 陈敏, 彭鸿娟. 刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 587-593.
[9]	李润花, 殷国荣. 刚地弓形虫病多表位疫苗的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 661-667.
[10]	张少华, 刘婷丽, 骆学农, 王帅, 郭爱疆, 白雪, 陈国梁, 才学鹏. 豆状囊尾蚴体外培养方法的建立及其分泌产物的分离鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(4): 500-506.
[11]	陈兵, 张国莉, 张高红. 血吸虫病候选疫苗临床研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(4): 511-515.
[12]	于嘉利, 刘蕾, 杨博, 楚瑞林, 孙毅凡, 刘耀宝, 程洋. 重组卵形疟原虫裂殖子表面蛋白1 N端的抗原性及免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 746-752.
[13]	蔡子涵, 曹颖, 朱逢龙, 李倩, 和艳红, 杨毅梅. 纳米金棒标记技术应用于旋毛虫感染诊断的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(5): 652-658.
[14]	吕立红, 张金成, 胡永红. 蜱类保护性抗原研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 542-547.
[15]	李美, 涂宏, 夏志贵, 王真瑜, 周何军. 快速诊断靶蛋白恶性疟原虫富组氨酸蛋白Ⅱ和疟原虫乳酸脱氢酶的热稳定性[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 245-248.