中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (1): 4-17.
杨婷婷,何深一,蒋华,古钦民,丛华,周怀瑜,张加勤,李瑛,赵群力
YANG Ting-ting;HE Shen-yi *;JIANG Hua;GU Qin-min;CONG Hua;ZHOU Huai-yu;ZHANG Jia-qin;LI Ying;ZHAO Qun-li
摘要: 目的 构建弓形虫单价基因疫苗 pcDNA3.1-p30及复合基因疫苗 pcDNA3.1-p30-ROP2 ,并比较两种疫苗对小鼠的免疫保护性。 方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增编码弓形虫主要表面抗原 p30和弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )的基因片段 ,经T-A克隆 ,将p30单价基因及 p30-ROP2复合基因片段分别插入真核细胞表达载体pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒 pcDNA3.1-p30及pcDNA3.1-p30-ROP2。分别免疫BALB/c小鼠 ,设磷酸缓冲盐溶液 (PBS)组、pcDNA3.1空质粒组为对照 ;酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测血清特异性IgG抗体 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。 结果 获得 pcDNA3.1-p30、pcDNA3.1-p30-ROP2重组表达质粒 ,用 pcDNA3.1-p30-ROP2免疫的小鼠 ,其IgG抗体吸光度 (A490 =2.0 5 1± 0.3 3 7)高于用 pcDNA3.1-p30的吸光度 (A490 =1.892± 0.3 69) (P <0.0 5 )。攻击感染弓形虫后小鼠生存时间 ,用 pcDNA3.1-p30-ROP2免疫的小鼠 ,较用 pcDNA3.1-p30的明显延长 (P <0.0 1)。 结论 弓形虫不同生活阶段的抗原复合基因疫苗较单价基因疫苗具有更好的免疫保护性。