PCR扩增环子孢子蛋白基因3’ 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 1997, Vol. 15 ›› Issue (6): 382-385.

PCR扩增环子孢子蛋白基因3’ 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究

陈志辉²; 吴少廷¹; 管惟滨²; 高世同¹; 林敏¹

1 深圳市卫生防疫站;2 第二军医大学寄生虫学教研室

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:1997-12-28 发布日期:1997-12-28

A PRELIMINARY STUDY ON DETECTING PLASMODIUM FALCIPARUM BASED ON PCR AMPLIFICATION OF 3~, -END FRAGMENT OF CSP GENE

Chen Zhihui²; Wu Shaoting¹; Guan Weibin²; Gao Shitong¹; L in Min¹

1 Shenzhen Sanitary and Epidemic Disease Prevention Station, Shenzhen 518020 2 Department of Parasitology, The Second Military Medical University, Shanghai 200433

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:1997-12-28 Published:1997-12-28

摘要/Abstract

摘要： 目的 :建立 PCR检测恶性疟原虫的新方法。方法 :作者采用自行设计并合成的一对恶性疟原虫特异引物 ,经 PCR扩增环子孢子蛋白 ( CSP)基因 3 端保守区序列 2 4 5bp片段 ,观察了它的特异性、敏感性和稳定性。结果 :1从 4株培养的恶性疟原虫和 2例恶性疟患者血样中均扩增出约 2 4 5bp的 DNA目的片段 ,用业已鉴定的 CSP基因序列作模板再行扩增证实其为恶性疟原虫CSP基因片段 ;2对间日疟原虫、利什曼原虫、弓形虫和健康人血样进行 PCR反应 ,均未见扩增条带 ;3本检测系统可检出恶性疟原虫感染血样中 0 .18个原虫所含的 DNA模板 ;4采用不同方法制备模板及不同反应方式均能获得满意结果 ;结论 :PCR扩增恶性疟原虫 CSP基因 3端片段用于恶性疟原虫检测具有灵敏、高度特异且稳定性好等优点。

关键词: 恶性疟原虫, 环子孢子蛋白基因, 聚合酶链反应, 诊断

Abstract: AIM:To develop a new method based on polymerase chain reaction(PCR) for detecting Plasmodium
falciparum. METHODS:Using 2 oligonucleotide primers with P.falciparum specificity designed and synthesized by the
authors, a PCR was conducted to amplify the highly conserved region(245 bp) at 3 end of CSP gene. The specificity, sensitivity and stability of the detection system were investigated. RESULTS:A 245 bp fragment from 4 cultured P.falciparum strains and two falciparum malaria patients’ blood samples was amplified, while the extracted DNA from P. vivax, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii, and the normal blood sample could not. The amplified DNA was confirmed by using the known CSP gene as template to amplify the same size DNA fragmen t. As little as DNA of 0.18 parasite was sufficient for a specific detection by the PCR assay. CONCLUSION: The results show that the PCR assay for the detection of P.falciparum is specific, sensitive and stable.

Key words: Plasmodium falciparum, circumsporozoite protein gene, polymerase chain reaction, diagnosis

陈志辉;吴少廷;管惟滨;高世同;林敏. PCR扩增环子孢子蛋白基因3’ 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1997, 15(6): 382-385.

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