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2004年 第22卷 第4期    刊出日期：2004-08-30

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论著

多房棘球蚴病特异性诊断抗原Em18的基因克隆、表达和血清学评价

江莉;冯正;薛海筹;许学年;裘丽姝

2004, 22(4):  1-198. 

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　　目的　克隆从我国四川省分离的多房棘球绦虫Em18抗原基因片段,表达重组抗原,用于多房棘球蚴病(AE)的诊断,并用患者血清对其诊断价值进行评价。　方法　PCR扩增目的基因片段与质粒载体pET28a(+)连接构建表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株表达重组蛋白,用镍次氮基三乙酸琼脂糖树脂(NI NTAagarose)亲和层析纯化重组抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)评价重组抗原的血清学诊断效果。　结果　获得两个高效表达克隆ReEm181和ReEm182。其中ReEm181与预期序列一致,ReEm182为同一序列,但有27bp的核苷酸缺失。两个克隆表达的融合蛋白相对分子质量(Mr)分别为28000和26000。对101例AE、47例细粒棘球蚴病、30例囊尾蚴病、10例肝癌、9例血吸虫病和40名健康人共237份血清进行ELISA检测 ,结果显示,ReEm181和ReEm182重组抗原对AE血清诊断的敏感性为861%和901%、特异性为934%和941%、阳性预期值为906%和919%、阴性预期值为901%和928%、诊断效率分别为903%和924%;对58例AE患者肝脏病灶大小与重组抗原检测血清平均吸光度(A)的相关性比较分析结果表明,抗体反应水平在病程早期有较好的相关性。　结论　Em18重组抗原对AE具有特异性诊断价值


洞庭湖渔民血吸虫感染情况及化疗效果分析

曾庆仁;侯建伟;何永康;罗新松;张顺科;舒衡平;司马衍祥;喻鑫林;李岳生

2004, 22(4):  2-203. 

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　　目的　调查洞庭湖渔民感染血吸虫的严重程度,评估其化疗防治效果。　方法　 2 0 0 1年11月选择湖南省岳阳县麓角镇洞庭湖水上作业渔民,询问血吸虫感染与化疗史。用改良加藤法检查虫卵和毛蚴孵化法检查毛蚴,酶联免疫吸附测定(ELISA)和间接血凝试验(IHA)检测抗可溶性虫卵抗原(SjSEA)的抗体,B超检查肝/脾病变程度。人群顿服吡喹酮40mg/kg,一个感染季节过后复查。用SPSS软件进行分析。 　结果　①询问调查渔民268人,“经常”或“间常”接触疫水的人数占907%;近5年每年平均化疗人数占240%,从未化疗者占394%;②粪检阳性率为681%(111/163),克粪虫卵数(EPG)为4877,男性均显著高于女性。 11～20岁阳性率最高(83 3 %),“经常”或“间常”接触疫水与从未化疗的两种人群阳性率分别为 763 %(106/139)和797%(51/64);③IHA检测阳性率为880%,ELISA检测阳性率为787%,均明显高于粪检阳性率;④肝/脾受损率为774%(82/10 6),其中,肝实质呈Ⅱ～Ⅲ级纤维化病变者占377%,肝肿率为585%,脾肿率为198%;⑤多次化疗人群感染率和EPG显著低于从未化疗人群;⑥复查结果表明,化疗人群粪检阳性率(354%)和EPG(3613)较未化疗人群(565%和684


细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗体外瞬时表达及对小鼠诱导的免疫应答

林仁勇;丁剑冰;卢晓梅;王笑峰;阿孜古丽;魏晓丽;王俨;温浩

2004, 22(4):  3-208. 

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　　目的　检测细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗(pcDNA3 Eg95)体外瞬时表达,探讨其诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。　方法　pcDNA3 Eg95经脂质体转染HeLa细胞瞬时表达。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Eg95抗原信使RNA(mRNA)在HeLa细胞中的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白质印迹法(Westernblot ting)检测Eg95蛋白的瞬时表达情况。pcDNA3 Eg95基因疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA检测IgG和IgG2a水平,四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖反应。　结果　RTPCR检测结果显示,pcD NA3 Eg95瞬时表达组有Eg95抗原基因mRNA表达,ELISA和Westernblotting检测结果表明,可在HeLa细胞中特异性表达Eg95蛋白。用pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫BALB/c小鼠,第3周出现特异性IgG免疫应答,持续升高至第10周,显著高于对照组。从第2周开始,小鼠血清IgG2a应答即为阳性,且长时间(至第10周 )维持较高水平,与pcD NA3空质粒组比较,其差异具有非常显著性意义(P<0.01)。用原核表达的Eg95重组蛋白刺激免疫小鼠脾细胞,有明显的T细胞增殖反应。pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫组刺激指数明显高于pcDNA3空质粒组(P<0.01)。结论　pcDNA3 Eg95基因疫苗可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细


人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导人肺上皮细胞凋亡

彭国华;袁铿;周宪民;彭卫东

2004, 22(4):  4-212. 

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　　目的　探讨人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导体外培养的人肺上皮细胞A549凋亡,以及提取物浓度和作用时间与细胞凋亡的相互关系。　方法　根据四氮唑盐酶还原法(MTT)结果,选用5种不同浓度的提取物诱导人肺上皮细胞凋亡。分别在诱导后的5个时间段,采用苏木素伊红(HE)染色盲法计数和二苯胺法检测DNA断裂率,观察肺上皮细胞凋亡情况。同时对某个时间和浓度组的样本,用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。　结果不同浓度人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导A549细胞凋亡,在5h之内细胞凋亡率随提取物浓度增加而增加,两者呈正相关关系,且细胞凋亡率显著高于对照组(P<005),5h细胞凋亡率达高峰(652%)。　结论　人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物可诱导人肺上皮细胞凋亡,细胞凋亡与其提取物浓度呈明显的相关关系。在时间上表现为双向变化关系,其变化程度同时受提取物浓度的影响


治疗重度脑囊尾蚴病的临床研究

袁治;任海军;丁永忠;张建生;吴小璐;王维平;裘明德

2004, 22(4):  5-217. 

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　　目的　探讨阿苯达唑减量法及外科降颅压措施治疗重度脑囊尾蚴病的方法。　方法　 74例重度脑囊尾蚴病患者经脑CT和/或磁共振成像 (MRI)证实囊尾蚴数为100～1160个。先用阿苯达唑减量法找到初始耐受剂量,之后逐渐递增到治疗剂量(口服阿苯达唑每天20mg/kg,分3次服用 ,10d为1疗程,共3～4疗程)。服药治疗期间同时用降颅压药物和抗癫痫药。使用药物降颅压无效者行外科降颅压治疗。　结果　 74例患者服用阿苯达唑后,经药物降颅压有效者7例,无效者67例。无效者,经脑室外引流术治疗48例,脑室外引流加颞肌减压术治疗19例。67例经手术降颅压治疗的患者,除1例外皆可耐受阿苯达唑治疗。74例患者中随访70例,随访期为19～52个月(平均372月)。随访中经复查CT或MRI,除1例(囊尾蚴数达 1160个)治疗失败外,其余69例均临床治愈。结论　阿苯达唑减量法并行降颅压药物或外科降颅压治疗重度脑实质囊尾蚴病,是安全、有效的治疗方法


日本血吸虫EST序列的电子延伸及结果分析

刘翰腾;吴忠道;邹赛德;邵筱

2004, 22(4):  6-222. 

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　　目的　建立日本血吸虫表达序列标签(SjEST)序列自动分析系统,筛选新基因、分析其表达谱。 　方法　建立本地化日本血吸虫专业数据库,整合序列同源性比较软件(BLAST)及片段整合分析软件(PHRAP),运用生物信息学策略编写程序控制EST自动延伸。建立本地化蛋白库,对延伸结果进行蛋白库同源性分析。实现对成批数据大规模自动分析 ,筛选出可能的新基因全长cDNA序列 ,并进行基因表达谱分析。　结果　延伸系统规则有效,延伸结果序列与原始序列高度同源。对552条EST进行自动分析,487条得到不同程度的延长,其中有104条EST原始序列检索无同源性 ,但经过延伸后获得高度同源性的联配序列信息。根据延伸结果尝试分析基因表达谱,筛选出27个可能新基因。　结论　建立了本地化的有效的SjEST序列自动分析系统。该系统为新基因的筛选及基因表达谱的分析提供了重要的参考信息。


七种媒介硬蜱基因组随机扩增多态性DNA分析

杨银书;赵红斌;第五进学;张继军;史智勇

2004, 22(4):  7-226. 

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　　目的　研究7种硬蜱的基因组随机扩增多态性DNA(RAPD)以及种间的遗传距离。　方法　用5条不同的多聚核苷酸单链引物对草原革蜱、森林革蜱、青海血蜱、台湾血蜱、刻点血蜱、龟形花蜱、卵形硬蜱7种硬蜱基因组DNA进行随机扩增,分析DNA图谱并计算 7种硬蜱间的遗传距离。　结果　 7种硬蜱基因组随机扩增产物均有各自独特的DNA条带,种间的平均遗传距离为071。　结论　RAPD技术可以区分这7种硬蜱。


ELISA检测云南按蚊环子孢子蛋白的评价

周红宁;张再兴;ChrisCurtis;NigelHill;李春富;吴超;王丕玉

2004, 22(4):  8-230. 

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　　目的　采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测疟疾媒介按蚊环子孢子蛋白(CSP),评价ELISA用于云南疟疾媒介按蚊传疟效能调查的可行性。　方法　现场捕获疟疾媒介按蚊经产蚊,每只蚊镜检3叶唾腺子孢子感染率,ELISA检测另3叶唾腺CSP;用含间日疟原虫配子体的患者血人工喂饲微小按蚊,11d后同法镜检唾腺子孢子感染率及ELISA检测唾腺CSP。在种植场捕获8种按蚊(微小按蚊、中华按蚊、多斑按蚊、迷糊按蚊、可赫按蚊、带足按蚊、菲律宾按蚊和须喙按蚊 )各龄成蚊,ELISA检测唾腺CSP。　结果　①现场捕获经产蚊1010只,镜检唾腺子孢子阳性7只,阳性率为0.69%;ELISA检测唾腺CSP阳性8只,阳性率为0.79%;其中6只蚊两项检测均为阳性,阳性率为0.59%。两法比较,差异无显著性意义(P>0.05)。②人工感染36只微小按蚊,镜检唾腺子孢子阳性27只,阳性率为75.0%;ELISA检测唾腺CSP阳性29只,阳性率为80.6%;其中有26只蚊两项检测(Pv2 10CSP)均阳性,阳性率为72.2%。两法比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③种植场捕获8种按蚊各龄成蚊4675只,ELISA检测唾腺CSP阳性11只,阳性率为0.24%;其中Pv210阳性9只,Pf2A10阳性2只;微小按蚊、中华按蚊和多斑按蚊ELISA检测阳性


弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析

雷明军;吴少庭;戴五星;潘晖榕;林绮萍;温见翔;黄达娜;高世同;张仁利

2004, 22(4):  9-234. 

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　　目的　构建原核重组表达质粒pET23aSAG2,并在大肠埃希菌中实现高效表达,以及检测表达产物的抗原性。　方法　PCR扩增SAG2编码基因目的片段,琼脂糖凝胶电泳回收纯化,克隆至pMD18T载体,转化大肠埃希菌DH5α。测序后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组表达质粒pET2 3aSAG2,转化大肠埃希菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基 βD硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)与免疫印迹分析表达产物。　结果　PCR扩增出约500bp的SAG2编码基因目的片段,与预期片段大小相符,经测序鉴定无基因突变;所构建的pET23aSAG2重组表达质粒阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;含有pET23aSAG2重组质粒的大肠埃希菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS PAGE显示表达产物约Mr19000;免疫印迹结果表明表达产物具有良好的抗原性。　结论　成功构建了pET23aSAG2表达质粒,实现了全长成熟SAG2蛋白在大肠埃希菌中的高效表达;表达产物具有良好的抗原性。


旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选

吴秀萍;付宝权;刘明远;张亚兰;原丽红;李莲瑞;卢强;PascalBoireau

2004, 22(4):  10-239. 

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　　目的　获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。　方法　以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序及分析。结果　从45×105旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得158个阳性克隆。序列分析结果表明,其中有36个新的cDNA序列,已报道的序列有5个,有12个序列无开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。　结论　获得具有抗原性的旋毛虫抗原编码cDNA分子


用组织化学方法鉴别日本血吸虫细胞来源的研究

林雪迟;曾庆仁;龚燕飞;言敢威;沈杰

2004, 22(4):  11-242. 

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　　目的　探讨用组织化学方法鉴别血吸虫体外培养细胞来源或种类的可能性。　方法　取日本血吸虫肝期童虫,经酶消化处理后取混合细胞涂片,用成虫制作组织切片。将细胞涂片和组织切片分别平行作高碘酸希夫氏(PAS)、硫堇 (Thionin)、嗜银反应(根据Grimelius)、苦味酸 酸性品红(根据VanGieson,VG)、甲苯胺蓝(Tolui dineblue,TB)和苏木素伊红(HE)6种组织化学方法染色。光镜下比较观察,判定结果。　结果　PAS染色的大细胞呈亮红色与组织切片中卵黄腺着色接近,表明着色的大细胞来源于卵黄腺;含特有尼氏体的神经细胞胞浆被硫堇染色呈深蓝色 ;Grimelius染色的细胞和消化道上皮细胞均呈黑色;VG染色,部分细胞和虫体肌纤维组织均呈黄色;TB染色,细胞涂片仅见1个紫红色细胞,组织切片未见相同颜色的组织和细胞。　结论　PAS、硫堇、Grimeliu s、VG、TB和HE 6种组织化学染色,对体外培养的血吸虫细胞的显色特征与虫体相应器官或组织细胞的化学染色定位相一致。本法可用于鉴别血吸虫体外培养细胞的来源或种类,且操作简便、快速。


屋尘螨特异性变应原的定位研究

付仁龙;刘志刚;;邢苗;李荔;邹泽红

2004, 22(4):  12-244. 

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　　目的　探讨过敏性疾病主要变应原屋尘螨特异性抗原的定位。　方法　选用屋尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,制作屋尘螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构,免疫组织化学染色分析其特异性抗原定位。　结果与结论　内部形态结构,消化系统占据大部分体腔,可见口咽部、前中肠 (胃 )、中肠、后中肠等结构。中肠 (尤其是后中肠)见明显的粪便颗粒,体腔见生殖腺等器官。免疫组织化学染色,见雌、雄屋尘螨的多种组织抗原定位均呈阳性反应,其特异性抗原主要定位于口咽部、中肠组织及肠内容物


肾移植后并发卡氏肺孢子虫肺炎12例临床研究

孙明;杨宇如;卢一平;王莉;唐科仕;魏强;李虹

2004, 22(4):  13-247. 

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　　目的　探讨肾移植后并发卡氏肺孢子虫 (Pc)肺炎 (PCP)的诊断、治疗和预防方法。　方法　总结12例肾移植后确诊为PCP患者的临床表现、实验室检查、X线胸片及肺部CT、支气管镜检和活检等诊断方法和预防措施。结果　肺泡灌洗液涂片Pc检出率为167%,纤维支气管镜肺组织活检Pc包囊检出率为667%。2例痰标本PCR法检出Pc病原体。X线胸片呈间质性肺炎表现占583% ,CT肺部呈多发毛玻璃样改变占50%,肺泡实变影改变占25%。预防和治疗药物为复方磺胺甲基口恶唑(即磺胺甲基口恶唑SMZ/甲氧苄氨嘧啶TMP)。除1例呼吸衰竭死亡,其余均治愈,肾功能维持正常水平。　结论　肾移植后并发PCP患者早期表现为发热、干咳等非特异症状,实验室检查无明显特异性,X线胸片可提示PCP的存在,CT可帮助对PCP病理改变的进一步理解。支气管镜肺组织活检,查见卡氏肺孢子虫包囊可确诊。SMZ/TMP为首选的综合预防、治疗药物。


邻苯二甲酸二丁酯乳化液治疗蠕形螨病的研究

夏惠;胡守锋;马维聚;葛继华

2004, 22(4):  14-249. 

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　　目的　观察抗蚴灵邻苯二甲酸二丁酯乳化液治疗蠕形螨病的疗效。　方法　应用该药治疗面部蠕形螨感染者447例,其中随机观察有粉刺、皮疹和脓疱疹患者30例,治疗20d后复查阴转例数并观察其治疗效果,并与市售肤螨灵、2 %灭滴灵溶液和8%灭滴灵霜的疗效做比较试验。进行体外杀灭蠕形螨试验、动物毒性试验和局部用药安全试验。　结果　治疗后20d复查,面部蠕形螨阴转率为928%(415/447),对有明显面部损害的患者治疗有效率为900%(27/30),明显高于其他3种药物(P<0.01)。体外杀灭蠕形螨试验结果显示,1h内能杀死全部蠕形螨。动物毒性试验显示LD50在安全范围,局部用药无明显刺激和过敏反应。　结论　邻苯二甲酸二丁酯乳化液有望成为安全、高效的治疗蠕形螨病药物


江西省卫氏并殖吸虫病流行病学调查

晏渠如;严涛;周宪民;李友松;朱春潮;石林波;马细妹;胡宁燕

2004, 22(4):  15-252. 

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　　目的　探讨江西省卫氏并殖吸虫病流行状况及其变化的原因。　方法　选择江西省靖安县、万载县2个林场和玉山县1个镇进行流行病学调查和回顾性分析,调查卫氏并殖吸虫病中间宿主放逸短沟蜷 (Semisulcospiralibertina)与华溪蟹 (Sinopotamonspp.)、保虫宿主 (猫、犬、果子狸、野猫等)感染率,以及流行区生态环境变化和人群个体行为变化。　结果　卫氏并殖吸虫病流行区中间宿主放逸短沟蜷与华溪蟹平均感染率分别为0.21%和54.3%,保虫宿主平均感染率为56%。与20年前比较,华溪蟹感染率明显下降。　结论　江西省原流行区仍有卫氏并殖吸虫病流行 ,生态环境改变可能导致华溪蟹的感染率下降。


综述

微小隐孢子虫致病相关蛋白的研究进展

陶艳琳;程训佳

2004, 22(4):  16-255. 

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教学园地

医学寄生虫学实验课教学的现状及改革

耿志辉;施雨露;刘利;李淑红

2004, 22(4):  17-226. 

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简报

重庆市涪陵区消除丝虫病后一次横向监测

杨启志;黎永成;喻珊

2004, 22(4):  18-208. 

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粪检隐孢子虫卵囊阳性幼儿血清PA和Fn的检测

崔玉宝;邢应如

2004, 22(4):  19-234. 

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青岛地区儿童蛲虫感染调查与分析

辛克盛;刘慧

2004, 22(4):  20-239. 

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对恶性疟原虫FCC1/HN分离株AMA-1序列变异的见解

钱锋;张龙兴;潘卫庆

2004, 22(4):  21-256. 

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病例报道

脑囊尾蚴病颅内高压致神经性肺水肿两例报道

程全东;于清源;侯贺文;周东光

2004, 22(4):  22-203. 

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相关文章 | 计量指标

美丽筒线虫病一例报告

刘义威;谢庆敢;钟福华

2004, 22(4):  23-212. 

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相关文章 | 计量指标

妊娠并发骨盆棘球蚴囊肿一例

陈洪俊

2004, 22(4):  24-222. 

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相关文章 | 计量指标

乳房囊尾蚴病一例

孙惠珍;常正山;邱持平

2004, 22(4):  25-252. 

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