中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (2): 3-95-98.
焦玉萌1,方强1 *,夏惠1,王雪梅1,陶志勇1,陈兴智1,沈继龙2
JIAO Yu-meng1, FANG Qiang1 *, XIA Hui1, WANG Xue-mei1, TAO Zhi-yong1, CHEN Xing-zhi1, SHEN Ji-long2
摘要: 目的 观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+ T细胞的影响,以及CD8+ T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。 方法 取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三组(每组5只)。B组和C组每鼠右腋窝皮下接种B16F10黑色素瘤细胞2×105个,A组注射等量无菌PBS。接种后第7天,C组每只小鼠腹腔注射TgESA 100 μl。接种后第13天,处死小鼠,无菌取脾。流式细胞仪检测各组小鼠CD3+CD8+ T细胞所占脾细胞比例;采用免疫磁珠分选B组和C组脾细胞中的CD8+ T细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测两组CD8+ T细胞对B16F10细胞的杀伤作用,分别设效靶细胞比为2.5 ∶ 1、5 ∶ 1和10 ∶ 1。另取30只C57BL/6小鼠随机分为E、F和G三组(每组10只),每鼠接种B16F10细胞2×105个。接种同时,F组和G组小鼠分别尾静脉注射分离自B组和C组的CD8+ T细胞(2×105个/鼠)。观察小鼠瘤体生长情况,记录各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。 结果 流式细胞仪检测结果显示,A、B和C组脾脏CD3+CD8+ T细胞占脾细胞的比例分别为(13.86±0.13)%、(14.18±0.27)%和(15.74±0.28)%,C组显著高于其他两组(P<0.05)。LDH释放试验结果显示,不同效靶细胞比时,C组的CD8+ T细胞杀伤活性均显著高于B组(均P<0.05)。G组的平均出瘤时间[(14.9±1.2)d]晚于F组[(11.9±0.7)d]和E组[(9.4±1.2)d](P<0.05)。3组小鼠自出瘤后瘤体均不断增长,但增长速度无明显差异,G组的瘤体面积始终小于其他两组(均P<0.05)。E、F和G组小鼠分别于B16F10细胞接种后第26、29和30天开始出现死亡,至观察终点(第35天),3组小鼠存活的数量分别为3、5和7只。 结论 TgESA可上调B16F10黑色素瘤小鼠CD8+ T细胞的数量和杀伤功能,上调的CD8+ T细胞具有早期延缓肿瘤生长的作用。