中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2020, Vol. 38 ›› Issue (3): 279-285.doi: 10.12140/j.issn.1000-7423.2020.03.004
TAN Xiao*(), XIAO Chu-li, XIAO Fei, WANG Shuo, QING Rui, HUANG Ze-zhi
摘要:
目的 探讨白细胞介素18(IL-18)是否能增强DNA疫苗候选抗原pcDNA3.1/SjOST48对日本血吸虫病感染的免疫保护效果。 方法 构建pcDNA3.1/SjOST48和pcDNA3.1/IL-18真核载体,表达重组蛋白。Western blotting检测HeLa细胞内重组质粒pcDNA3.1/SjOST48和pcDNA3.1/IL-18表达情况,ELISA检测细胞培养基中IL-18的表达情况。100只雌性BALB/c小鼠随机均分为PBS组(空白对照组)、pcDNA3.1组(空质粒组)、pcDNA3.1/IL-18组、pcDNA3.1/SjOST48组和pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组等5组,各组小鼠左后腿股四头肌肌内注射相应的重组质粒(30 μg),共免疫3次,每次间隔14 d。末次免疫后2周,各组取5只小鼠采集血样,ELISA检测各组小鼠血清IgG抗体及其亚类(IgG1和IgG2a)水平。末次免疫后3周,各组取5只小鼠脾组织,无菌分离小鼠脾淋巴细胞,ELISA检测小鼠脾淋巴细胞上清中TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6和IL-17含量及脾淋巴细胞增殖水平。末次免疫后2周,各组取15只免疫小鼠感染血吸虫尾蚴(20 ± 1)条/鼠。感染后6周处死小鼠,无菌分离肝,计算减卵率;门静脉灌注法收集成虫,计算减虫率;另取肝组织,切片后行HE染色,显微镜下观察肝虫卵肉芽肿数量及炎症浸润情况。 结果 末次免疫后2周,ELISA结果显示,pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组、pcDNA3.1/SjOST48组、pcDNA3.1/IL-18组小鼠的IgG抗体水平分别为0.82 ± 0.07、0.41 ± 0.06、0.16 ± 0.05,均高于pcDNA3.1组的0.12 ± 0.03(P < 0.05);pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组较pcDNA3.1/SjOST48组和pcDNA3.1/IL-18组均增高(P < 0.05);pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组和pcDNA3.1/SjOST48组的IgG2a/IgG1比值分别为4.02 ± 0.01、2.51 ± 0.01(P < 0.05),均>1,其他3组均<1。末次免疫后3周,pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组小鼠脾淋巴细胞上清中的IL-2、TNF-α、INF-γ、IL-6和IL-17含量分别为(101.82 ± 8.90)、(738.02 ± 146.22)、(593.41 ± 51.07)、(685.64 ± 171.2)、(261.32 ± 48.19)pg/ml,高于pcDNA3.1/SjOST48组[(55.82 ± 9.69)、(538.21 ± 85.26)、(393.41 ± 51.07)、(335.64 ± 62.63)、(118.32 ± 8.91)pg/ml](P < 0.05)和pcDNA3.1/IL-18组[(35.16 ± 6.43)、(284.40 ± 69.96)(141.91 ± 24.48)、(198.44 ± 38.15)、(47.66 ± 14.33)pg/ml](P < 0.05),三者均高于pcDNA3.1组[(12.91 ± 8.01)、(74.86 ± 6.64)(23.75 ± 6.06)、(82.75 ± 10.96)、(22.91 ± 13.80)pg/ml](P < 0.05);IL-4含量为(12.28 ± 7.08)pg/ml,与pcDNA3.1/SjOST48组[(15.03 ± 10.12)pg/ml]、pcDNA3.1/IL-18组[(13.59 ± 4.42)pg/ml]、pcDNA3.1组[(16.13 ± 10.08)pg/ml]比较差异无统计学意义(P > 0.05)。pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组脾淋巴细胞增殖水平为11.84 ± 0.16,高于pcDNA3.1/SjOST48组(5.93 ± 0.25)(P < 0.05)和pcDNA3.1/IL-18组(3.19 ± 0.36)(P < 0.05),三者均高于pcDNA3.1组(2.08 ± 0.16)(P < 0.05)。末次免疫后2周,经日本血吸虫感染后6周,pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组小鼠的平均检获成虫数为(14.33 ± 1.08);与pcDNA3.1组比较,减虫率和减卵率分别为46.19%和44.68%,高于pcDNA3.1/SjOST48免疫组(32.18%和35.78%)和pcDNA3.1/IL-18组(13.22%和16.68%)(P < 0.05)。各组小鼠肝组织切片HE染色结果显示,与其他4组比较,pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组小鼠肝组织虫卵结节较少,虫卵肉芽组织数量明显减少,炎症浸润不明显。 结论 IL-18能使pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠诱导较高水平的Th1型和Th17型免疫应答,并且增强其抗血吸虫感染的免疫保护效果。
中图分类号: