中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (2): 6-110-113.
祖力皮也·吐尔逊1,德力夏提·依米提2,曹春宝2,马海梅2,李玉娇1,周晓涛2,朱明2,马秀敏1,温浩1,丁剑冰1,2 *
Zulipiye·TUERXUN1,Delixiati·YIMITI2,CAO Chun-bao2,MA Hai-mei2,LI Yu-jiao1,ZHOU Xiao-tao2,ZHU Ming2,MA Xiu-min1,WEN Hao1,DING Jian-bing1,2 *
摘要: 目的 构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。 方法 通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(E. coli)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化E. coli后进行扩增。重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR和双酶切鉴定后,进行测序。将鉴定正确的rpMV-EgG1Y162通过电穿孔技术转化至感受态BCG菌株中,构建rBCG-EgG1Y162。经PCR和双酶切鉴定正确后,扩增培养2周,并于45 ℃放置30 min,诱导目的蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达情况,并以兔抗原核表达重组蛋白EgG1Y162血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。 结果 重组质粒rpMV-EgG1Y162经PCR扩增和双酶切后,均获得约360 bp的EgG1Y162目的基因片段,与预期片段长度一致,测序结果表明插入序列正确。将其通过电穿孔转化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生长良好,经酶切和PCR鉴定正确。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的表达产物的相对分子质量(Mr)约为71 000。 结论 构建和表达了细粒棘球绦虫rBCG-EgG1Y162菌株。