刚地弓形虫强毒株棒状蛋白ROP18的克隆、表达和免疫反应性分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2012, Vol. 30 ›› Issue (6): 7-446-449.

刚地弓形虫强毒株棒状蛋白ROP18的克隆、表达和免疫反应性分析

张颖，张进顺*，贾晓辉，贾天军，卢致民，周芳

河北北方学院病原生物和免疫学研究所，张家口 075000

出版日期:2012-12-31 发布日期:2013-02-05

Cloning，Expression and Immunoreactivity Analysis of Rhoptry Protein 18 （ROP18） from Toxoplasma gondii

ZHANG Ying, ZHANG Jin-Shun*, GU Xiao-Hui, GU Tian-Jun, LEI Zhi-Min, ZHOU Fang

Institute of Pathogen Microbes and Immunology，Hebei North University，Zhangjiakou，075000，China

Online:2012-12-31 Published:2013-02-05

摘要/Abstract

摘要： 目的克隆、表达刚地弓形虫棒状体蛋白ROP18基因（TgROP18），并分析其免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株基因组DNA，PCR扩增TgROP18基因。扩增产物经双酶切后连接入原核表达载体pET30a（+），重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），阳性菌落加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析重组蛋白TgROP18的表达情况。以鼠抗弓形虫血清为一抗，蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组蛋白的免疫反应性。结果 PCR扩增获得TgROP18基因，长约1 665 bp，编码554个氨基酸，其中前47个氨基酸构成信号肽序列。菌落PCR、双酶切和测序结果显示，重组质粒pET30a（+）-TgROP18构建成功。SDS-PAGE结果显示，经IPTG诱导获得相对分子质量（M_r）为 59 800的可溶性重组蛋白TgROP18。Western blotting分析结果显示，该重组蛋白可被鼠抗刚地弓形虫的血清识别。结论重组蛋白TgROP18具有一定的免疫反应性。

关键词: 刚地弓形虫, ROP18, 原核表达

Abstract: Objective To clone and express rhoptry protein 18（ROP18） gene of Toxoplasma gondii, and analyze its immunoreactivity. Methods The genomic DNA was extracted from T. gondii（RH strain） tachyzoites. TgROP18 gene was amplified by PCR, and cloned into pET30a（+） vector. The constructed pET30a（+）-TgROP18 was transformed into E. coli BL21（DE3） and followed by expression of the protein induced by IPTG. The recombinant protein was analyzed through SDS-PAGE, and identified by Western blotting with mouse anti-T. gondii serum. Results The TgROP18 gene was about 1 665 bp in length and encoded for a protein of 544 amino acid residues and the former 47 amino acids consisted signal peptide sequences. PCR, enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant plasmid pET30a（+）-TgROP18 was constructed. Bacteria containing recombinant plasmid pET30a（+）-TgROP18 expressed a soluble protein of His-TgROP18 （Mr 59 800） after being induced with IPTG. His-TgROP18 reacted positively with mouse anti-T. gondii serum by Western blotting analysis. Conclusion The soluble His-TgROP18 protein shows certain immunoreactivity.

Key words: Toxophasma gondii, Rhoptry protein 18, Prokaryotic expression

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