恶性疟原虫红内期不同发育阶段PfRON4基因转录水平分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (3): 4-209.

恶性疟原虫红内期不同发育阶段PfRON4基因转录水平分析

曹俊^{1, 2}, 金子修³, 高琪¹ *, 周华云¹, 夏超明², 诸葛洪祥², 坪井敬文⁴, 鸟居本美⁵

1 江苏省血吸虫病防治研究所, 无锡 214064；2 苏州大学医学院基础医学系, 苏州 215123；3 日本长崎大学热带病研究所, 长崎 8528523；4 日本爱媛大学无细胞技术研究中心, 松山 7908577；5 日本爱媛大学分子寄生虫教研室, 松山 7910295

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-06-30 发布日期:2009-06-30
通讯作者: 高琪

Transcription Profile of PfRON4 Gene in Plasmodium falciparum Erythrocytic Stage

CAO Jun^{1, 2}, Osamu KANEKO³, GAO Qi¹ *, ZHOU Hua-yun¹, XIA Cao-ming¹, ZHUGE Hong-xiang¹, Takafumi

1 Jiangsu Institute of Parasitic Diseases, Wuxi 214064, China；2 Department of Pre-clinical Medicine, School of Medicine, Suzhou Unversity, Suzhou 215123, China；3 Institute of Tropical Medicine, Nagasaki University, Nagasaki 852-8523, Japan；4 Cell-Free Science and Technology Research Center, Ehime University, Ehime 790-8577, Japan； 5 Department of Molecular Parasitology, Ehime University, Ehime 791-0295, Japan

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-06-30 Published:2009-06-30
Contact: GAO Qi1

摘要/Abstract

摘要： 目的分析恶性疟原虫棒状体颈部蛋白4基因（PfRON4）在红内期不同发育阶段的转录水平。方法用山梨醇结合等渗细胞分离液（Percoll）对实验室体外培养的恶性疟原虫进行均一化处理, 收集间隔为6 h不同发育阶段的疟原虫, 提取RNA。根据PfRON4基因及相关基因(PfAMA1和PfRhopH2)的序列设计特异性引物, 构建标准质粒并制作标准曲线, 对PfRON4及相关基因的mRNA进行定量检测分析。结果纯化并同步后的疟原虫生长发育较为同步均一, 用于定量分析的标准曲线相关性较好, PfRON4、PfAMA1和PfRhopH2的相关系数（r值）分别为-1.00、-0.98和-0.98。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示, 在恶性疟原虫红内期发育过程中, PfRON4基因的转录水平在裂殖子入侵红细胞后36～40 h（即成熟裂殖体阶段）达到高峰。结论恶性疟原虫PfRON4基因在成熟裂殖体阶段高表达。

关键词: 恶性疟原虫, PfRON4, 实时定量PCR, 转录

Abstract: Objective To reveal the transcription profile of PfRON4 gene in Plasmodium falciparum erythrocytic stage. Methods P. falciparum schizonts were purified by differential centrifugation on a Percoll-sorbitol gradient, after which the released merozoites were allowed to invade uninfected erythrocytes for 4 hours before the clearance of all remaining schizonts using 5% D-sorbitol. The cultured synchronous parasites were harvested for RNA assay immediately, 24 hours later, and then at every 6th hour. PfRON4 and related genes (PfAMA1 and PfRhopH2) were amplified by real-time PCR for establishing standard curves to evaluate the copy number of genes. Results P. falciparum parasites were well sychronized. Those quantative analyses were reliable because the R value of standard curves were more than 0.98 and the melting curve showed a single peak. When parasites were in the schizont stage, PfRON4 gene transcription reached a peak in 36-40 hours after invasion. Conclusion The transcription of PfRON4 peaks at mature schizont stage, suggesting that the PfRON4 gene may involve in erythrocyte-invasion of P. falciparum.

Key words: Plasmodium falciparum, PfRON4, Real-time PCR, Transcription

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