旋毛虫Ts87抗原基因在毕赤酵母中的构建及表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (4): 12-239.

旋毛虫Ts87抗原基因在毕赤酵母中的构建及表达

王少华,诸欣平,顾园,杨雅平,杨静

首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室,北京 100054

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-08-30 发布日期:2005-08-30

Construction and Expression of the Ts87 Gene of Trichinella spiralis in Pichia pastoris

WANG Shao-hua,ZHU Xin-ping*,GU Yuan,YANG Ya-ping,YANG Jing

Department of Parasitology,School of Basic Medicine,Capital University of Medical Sciences,Beijing 100054,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-08-30 Published:2005-08-30

摘要/Abstract

摘要： 目的构建旋毛虫Ts87抗原基因并在毕赤酵母中分泌表达。方法通过PCR特异性扩增Ts87抗原基因,构建重组质粒P^PICZαA-Ts87。其线性化后,转化毕赤酵母GS115,抗生素Zeocin筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。表型鉴定后进行甲醇诱导表达,收集培养不同天数的上清液。斑点杂交法分析上清液以确定有无重组蛋白分泌表达。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析鉴定表达蛋白。结果与结论成功构建了P^PICZαA-Ts87毕赤酵母表达重组质粒,确定了Ts87抗原基因在毕赤酵母中获得分泌表达。

关键词: 旋毛虫, 蠕虫基因, 毕赤酵母菌, 基因表达

Abstract: Objective To construct the recombinant plasmid P^PICZαA-Ts87 and obtain secretive protein in Pichia pastoris. Methods Ts87 was amplified by PCR and cloned into the expression vector P^PICZαA of P. pastoris to form P~PICZαA-Ts87. After the recombinant was isolated and linearized, it was transformed into P. pastoris GS115 by EasyComp^TMkit and screened for zeocin resistant with different conditions and Mut phenotype. The high resistant Mut~+ clones were cloned and the product induced by methanol was tested by dot-hybridization. The expression product was further identified by SDS-PAGE and Western blotting. Results and Conclusion The recombinant plasmid P^PICZαA-Ts87 has been constructed. Ts87 gene has been expressed and secreted in Pichia pastoris GS115 strain.

Key words: Trichinella spiralis, Helminth genes, Pichia pastoris, Gene expression

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