溶组织内阿米巴半胱氨酸蛋白酶的纯化及其活性的初步研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2001, Vol. 19 ›› Issue (3): 9-165.

溶组织内阿米巴半胱氨酸蛋白酶的纯化及其活性的初步研究

严哲;陈绳亮;毛孙忠

温州医学院生物化学教研室!温州325003(严哲;毛孙忠);中国科学院武汉病毒研究所!武汉430071(陈绳亮)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2001-06-30 发布日期:2001-06-30

Preliminary Study on Isolation, Purification and Hydrolytic Activity of Cysteine Proteinases in Entamoeba histolytica

YAN Zhe¹;CHEN Sheng-liang²;MAO Sun-zhong¹

1 Department of Biochemistry;Wenzhou Medical College;Wenzhou 325027; 2 Institute of Virology;Chinese Academy of Sciences;Wuhan 430071

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2001-06-30 Published:2001-06-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　探索溶组织内阿米巴通过基底膜进入固有膜的机制 ,了解其半胱氨酸蛋白酶 (cysteine pro-teinase,CP)与胞外基质的相互作用。　方法　阿米巴裂解液通过 laminin- Sepharose亲和层析和分离纯化 ,经分子量测定、测序及抑制剂实验 ,证明为 CP,以凝胶电泳测定其水解活性。　结果　纯化的 CP与 laminin有较强亲和力 ,其分子量为 2 7k Da,被 EC- 6 4所抑制 ,并具水解活性。　结论　溶组织内阿米巴半胱氨酸蛋白酶与胞外基质lam inin特异性结合 ,起水解作用 ,可能是入侵肠粘膜细胞基底膜的关键。

关键词: 溶组织内阿米巴, 半胱氨酸蛋白酶, 水解活性

Abstract: 　Objective To explore the invading mechanism of amebae in lamina porpria and observe the interaction between the cysteine proteinase (CP) of Entamoeba histolytica and laminin. Methods CP was identified by laminin-sepharose affinity chromatography, followed by isolation, purification and inhibitor experiment. The hydrolytic activity was measured by gelatin electrophoresis. Results Purified CP of E.histolytica showed a strong affinity with laminin. The molecular weight of CP is 27 kDa. It can be inhibited by EC-64 and exhibited a protein hydrolytic activity. Conclusion The specific affinity and hydrolytic activity of CP might play an important role in its invasion to the basement membrane of intestinal mucosa.

Key words: Entamoeba histolytica, cysteine proteinase, hydrolytic activity

严哲;陈绳亮;毛孙忠. 溶组织内阿米巴半胱氨酸蛋白酶的纯化及其活性的初步研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2001, 19(3): 9-165.

YANZhe;CHENSheng-liang;MAOSun-zhong. Preliminary Study on Isolation, Purification and Hydrolytic Activity of Cysteine Proteinases in Entamoeba histolytica[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2001, 19(3): 9-165.

[1]	李青山, 王智欣, 程训佳. 半胱氨酸蛋白酶在棘阿米巴成囊过程中作用的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(1): 120-123.
[2]	武艺, 李路, 徐永伟, 邢瑞欣, 胡静, 王书书, 沈继龙, 徐元宏, 陈熙. 日本血吸虫成虫可溶性蛋白和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白抑制小鼠结肠炎的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(2): 127-136.
[3]	白慧芳, 柯琪文, 陈韵秋, 刘芷晴, 张玲敏, 吴春云, 袁桂秀, 詹希美, 程梅. 广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(5): 469-473.
[4]	杨小迪, 李徽徽, 陶志勇, 方强, 程洋, 徐岚松, 薛仁敏, 陈勇, 夏惠, 张慧, 姜辉, 刘涛, 彭琨, 陈兴智. 两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠腹腔渗出细胞一氧化氮产生及细胞因子分泌的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(2): 110-114.
[5]	姚菊霞, 付宝权*. 寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2012, 30(2): 12-146-151.
[6]	张赛楠, 方政, 陆施娟, 王慧, 徐邦生. 周期型马来丝虫CPI基因真核表达载体的构建和免疫学研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(6): 7-434-438.
[7]	徐世三;倪芳;张少雷;刘江;罗大民. 简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(2): 11-138.
[8]	贾万忠;李志;赵亮;聂芳芳;伦照荣. 阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶3基因的克隆、表达与免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(6): 7-487.
[9]	贾万忠;李志;赵亮;伦照荣. 阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶基因变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2008, 26(3): 8-196.
[10]	陈奕综述;程训佳审校. 溶组织内阿米巴致病因子的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006, 24(6): 13-460.
[11]	陈桂凤;苏水莲;谢瑞莲;胡雅琼. 溶组织内阿米巴滋养体标本的复染[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2004, 22(5): 21-317.
[12]	舒勍;邵红霞;HiroshiTokaibana;程训佳. 溶组织内阿米巴重组人单克隆抗体Fab段的筛选与表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2004, 22(2): 1-69.
[13]	王英;张锡林;张艳玲;段建华;张敬如;黄复生. 斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆及由体定位[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2003, 21(4): 6-217.
[14]	张贵堂;王祥华. 溶组织内阿米巴阴道炎一例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1999, 17(4): 24-208.
[15]	何玉良,陶贤梅,关立华,连惟能. 甲硝唑酯体外抗阴道毛滴虫和阿米巴的效果[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1995, 13(1): 32-34.