内脏利什曼病患者骨髓及血内病原体特异性kDNA片段PCR扩增用于诊断的研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 1997, Vol. 15 ›› Issue (1): 2-10.

内脏利什曼病患者骨髓及血内病原体特异性kDNA片段PCR扩增用于诊断的研究

胡孝素1,杨文天1,马莹1,陈建平1,何生全2,许庭玺3,谢孝全3

1　华西医科大学寄生虫学研究室　成都6100412　四川省南坪县人民医院内儿科　南坪6234003　四川省汶川县人民医院　　　　汶川623000

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:1997-02-28 发布日期:1997-02-28

STUDIES ON DIAGNOSIS OF VISCERAL LEISHMANIASIS BASED ON PCR AMPLIFICATION OF LEISHMANIA DONOVANI kDNA FRAGMENT FROM BONE MARROW AND BLOOD SAMPLES OF VISCERAL LEISHMANIASIS PATIENTS

Hu Xiaosu1, Yang Wentian1, Ma Ying1, Chen Jianping1, He Shengquan2, Xu Tingxi3, Xie Xiaoquan3

1　Laboratory of Parasitology , West China University of Medical Sciences, Chengdu 6100412　Nanping County People's Hospital, Nanping 6234003　Wenchuan County People's Hospital, Wenchuan 623000

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:1997-02-28 Published:1997-02-28

摘要/Abstract

摘要：

目的: 建立简易、准确的诊断内脏利什曼病和病原体鉴定技术。方法: 采用作者设计的杜氏利什曼原虫(L. d.) 种特异引物I和II , 经PCR 扩增样品内病原体kDNA 297 bp 片段, 检测22 例确诊内脏利什曼病(VL) 患者骨髓、血、血清共55 份样品和4 例临床疑诊为黑热病患者的骨髓(共26 例, 59 份样品)。结果: (1) PCR 法与骨髓涂片镜检符合率为96.2% (25/26) ;(2) PCR 法检测骨髓、血及血清的总阳性率为95.4% (21/22) ; (3) PCR 法检测22 例骨髓、16 例血样品及17 例血清样品, 阳性率分别为91% (20/22)、68.8% (11/16) 及29.4% (5/17)。15 例骨髓对照样品得自9 例白血病患者及6 例健康人。血及血清对照样品各得自5 例健康人。全部对照未见扩增产物, 均为阴性。结论: 采用引物I 和II 进行PCR 扩增检测血内kDNA 特异片段诊断内脏利什曼病有较好前景。

关键词: 内脏利什曼病, 诊断, PCR, kDNA, 骨髓, 血, 血清

Abstract:

AIM: To develop a simple and accurate technique for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) and identification of Leishmania pathogen. METHODS: Based on a set of oligonucleotide primers I and II designed by the authors with L. donovani specificity, a polymerase chain react ion (PCR ) was conducted to amplify a minicircle kDNA fragment (297 bp ) for identification and detection of L. donovani in the bone marrow , blood and serum samples from 22 confirmed VL patients and 4 bone marrow samples from 4 clinically diagnosed cases (59 samples collected from 26 cases). RESULTS: (1) The coincidence rate between PCR and bone marrow smear method was 96.2% (25/26) ; (2) The total positivity of PCR with the bone marrow , blood and serum was 95.4% (21/22) ; (3) The positive rate of PCR amplification with bone marrow , blood and serum specimens were 91.0% (20/22) , 68.8% (11/16)and 29.4% ( 5/17) , respectively. The controls included 15 bone marrow samples from 9 leukemia patients and 6 normal persons; 5 blood and 5 serum samples of normal persons. No amplification product was showed from all of the controls. CONCLUSION: The result shows that the diagnosis of visceral leishmaniasis based on detecting kDNA in blood by PCR amplification with primers I and II is promising.

Key words: Visceral leishmaniasis, diagnosis, PCR, kDNA, bone marrow, blood, serum

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