旋毛虫p49基因的克隆、序列分析及表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2002, Vol. 20 ›› Issue (6): 6-341.

旋毛虫p49基因的克隆、序列分析及表达

温艳;甘绍伯;劳为德;高虹;张传生;刘思国

北京热带医学研究所;北京热带医学研究所;中国科学院遗传发育生物学研究所;中国科学院遗传发育生物学研究所;中国科学院遗传发育生物学研究所;中国科学院遗传发育生物学研究所北京 100050;北京 100050;北京 100080;北京 100080;北京 100080;北京 100080

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2002-12-30 发布日期:2002-12-30

Cloning, Sequencing and Expression of Trichinella spiralis p49 Gene

WEN Yan;LAO Wei-de;GAO Hong;ZHANG Chuan-sheng;LIU Si-guo;GAN Shao-bo

1 Beijing Tropical Medicine Research Institute;Beijing 100050; 2 Institute of Genetics and Developmental Biology;Chinese Academy of Sciences;Beijing 100080

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2002-12-30 Published:2002-12-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的获得旋毛虫排泄分泌抗原(excretory antigen,ES)p49基因的克隆、测序及表达。方法通过RT-PCR,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异片段,利用TA克隆将PCR产物克隆入pUC-T载体中并进行测序及同源性比较,并定向克隆到表达载体pEG-4T-3中,转化感受态细胞,诱导表达。结果 RT-PCR扩增得到p49基因,其核苷酸序列与已发表的p49基因序列一致;BLAST分析表明其与旋毛虫p49基因、43 KDa分泌性糖蛋白同源性均为99％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,重组蛋白诱导表达在67 KDa处有一新蛋白带。结论提取旋毛虫幼虫总RNA,用RT-PCR方法克隆并表达了p49基因。

关键词: 旋毛虫, p49基因, 基因克隆, 表达

Abstract: 　Objective To conduct cloning, sequencing and expression of Trichinella spiralis ES antigen p49 gene. Methods RT-PCR was used to amplify the specific gene fragment from the total RNA of Trichinella spirais larvae. The PCR product was ligated to the T-vector and the recombinant plasmid was verified by sequencing. T-p49 and pGE-4T-3 were treated by both BamHI and XhoI. The ligation reaction was catalyzed by T4 DNA ligase. Results The p49 gene was cloned by using RT-PCR. Sequence analysis showed that the p49 gene obtained was consistent to the p49 sequence reported in the database. The expressed protein was shown as a new band at SDS-PAGE. BLAST analysis demonstrated that this p49 gene was 99% identical to the p49 gene reported and to the 43 kDa secreted glycoprotein gene in the database. Conclusion p49 gene from Trichinella spiralis larvae was cloned, sequenced and expressed.

Key words: Trichinella spiralis, p49 gene, gene cloning, expression

温艳;甘绍伯;劳为德;高虹;张传生;刘思国. 旋毛虫p49基因的克隆、序列分析及表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2002, 20(6): 6-341.

WENYan;LAOWei-de;GAOHong;ZHANGChuan-sheng;LIUSi-guo;GANShao-bo. Cloning, Sequencing and Expression of Trichinella spiralis p49 Gene[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2002, 20(6): 6-341.

[1]	王之谦, 王敬文, 宋秀梅. 斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2调节共生菌稳态的功能分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 397-403.
[2]	张旭, 孙希萌. 旋毛虫感染免疫逃逸机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 492-496.
[3]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[4]	郝会囡, 程永康, 张茹, 韩璐璐, 宋艳艳, 龙绍蓉, 刘若丹, 张玺, 王中全, 崔晶. 旋毛虫新生幼虫可溶性抗原的免疫蛋白组学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 176-182.
[5]	侯昕伶, 李德伟, 施阳, 王茂林, 孜比姑·肉素, 阿比旦·艾尼瓦尔, 郑旭然, 康雪娇, 王慧, 李静, 张传山. 多房棘球蚴感染小鼠腹腔ST2⁺ T细胞亚群功能及其免疫检查点分子表达变化[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(6): 708-716.
[6]	邹伟浩, 吴蔚玲, 廖远鹏, 陈敏, 彭鸿娟. 刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 587-593.
[7]	曹天行, 刘军龙, 张志刚, 史康妍, 石苗, 关贵全, 李有全, 殷宏, 罗建勋. 环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 362-368.
[8]	张雅兰, 蒋甜甜, 贺志权, 邓艳, 陈伟奇, 朱岩昆, 张红卫, 赵东阳. 小鼠感染肝毛细线虫肝脏microRNA的差异表达分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 56-60.
[9]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[10]	蔡子涵, 曹颖, 朱逢龙, 李倩, 和艳红, 杨毅梅. 纳米金棒标记技术应用于旋毛虫感染诊断的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(5): 652-658.
[11]	苏雅静, 乔霞, 汪澎涛, 康宇婷, 杨宁爱, 贾伟, 赵志军. 弓形虫毒力相关效应分子ROP16Ⅲ诱导人肺腺癌A549细胞的基因表达谱[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 473-480.
[12]	王龙江, 李瑾, 尹昆, 徐超, 刘功振, 黄炳成, 魏庆宽, 孙慧. 刚地弓形虫入侵人包皮成纤维细胞前后转录组差异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 480-486.
[13]	周岩, 陈韶红, 李浩, 程娜, 洪加林, 许学年. 卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 20-26.
[14]	朱吉海, 曹得萍, 赵珺, 刘珺, 史虎祥, 刘燕. 多房棘球蚴病患者肝病灶组织差异表达基因的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 48-54.
[15]	范俊杰, 韩秀敏, Nur Fazleen Binti Idris, 李锴, 谭青青, 曹纹侨, 李想, 廖鹏, 叶彬. 细粒棘球绦虫蛋白激酶A的生物信息学特征及免疫反应性[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 682-687.