中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2004, Vol. 22 ›› Issue (4): 1-198.
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江莉,冯正,薛海筹,许学年,裘丽姝
JIANG Li,FENG Zheng,XUE Hai-chou,XU Xue-nian,QIU Li-shu
摘要: 目的 克隆从我国四川省分离的多房棘球绦虫Em18抗原基因片段,表达重组抗原,用于多房棘球蚴病(AE)的诊断,并用患者血清对其诊断价值进行评价。 方法 PCR扩增目的基因片段与质粒载体pET28a(+)连接构建表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株表达重组蛋白,用镍次氮基三乙酸琼脂糖树脂(NI NTAagarose)亲和层析纯化重组抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)评价重组抗原的血清学诊断效果。 结果 获得两个高效表达克隆ReEm181和ReEm182。其中ReEm181与预期序列一致,ReEm182为同一序列,但有27bp的核苷酸缺失。两个克隆表达的融合蛋白相对分子质量(Mr)分别为28000和26000。对101例AE、47例细粒棘球蚴病、30例囊尾蚴病、10例肝癌、9例血吸虫病和40名健康人共237份血清进行ELISA检测 ,结果显示,ReEm181和ReEm182重组抗原对AE血清诊断的敏感性为861%和901%、特异性为934%和941%、阳性预期值为906%和919%、阴性预期值为901%和928%、诊断效率分别为903%和924%;对58例AE患者肝脏病灶大小与重组抗原检测血清平均吸光度(A)的相关性比较分析结果表明,抗体反应水平在病程早期有较好的相关性。 结论 Em18重组抗原对AE具有特异性诊断价值