猪带绦虫胰岛素受体TsIR-1316的鉴定及其配体结合结构域的表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

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猪带绦虫胰岛素受体TsIR-1316的鉴定及其配体结合结构域的表达

魏艳玲1，郭爱疆1,2，张少华1，刘光学1，侯俊玲1，骆学农1,2 *

1 中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046；2 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009

出版日期:2016-04-30 发布日期:2016-06-30

Identification of Taenia solium Insulin Receptor TsIR-1316 and Expression of Its Ligand Binding Domain

WEI Yan-ling1，GUO Ai-jiang1,2，ZHANG Shao-hua1，LIU Guang-xue1，HOU Jun-ling1，LUO Xue-nong1,2 *

1 State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology，Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province，Lanzhou Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou 730046，China；2 Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonosis，Yanzhou 225009，China）

Online:2016-04-30 Published:2016-06-30

摘要/Abstract

摘要： 目的分析鉴定猪带绦虫（Taenia solium）胰岛素受体TsIR-1316的结构特征，并对其配体结合结构域（LBD）进行表达。方法参考GeneDB数据库猪带绦虫基因组注释信息，设计特异性引物，克隆获得TsIR-1316基因，用BLASTN和BLASTP分别对其核苷酸和氨基酸序列进行同源性比对，并用在线软件对该蛋白的信号肽和结构域进行预测分析。将其LBD克隆至原核表达载体pET-30a（+），表达、纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，用猪囊尾蚴阳性血清和TsIR-LBD免疫兔血清进行蛋白质印迹（Western blotting）鉴定。结果 TsIR-1316的开放阅读框为5 196 bp，编码1 732个氨基酸，与多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）的同源性为84%，具有典型的酪氨酸激酶家族的结构特征和“V”型三级结构。SDS-PAGE结果显示，所表达的重组蛋白相对分子质量（Mr）为59 000，与预期一致。Western blotting检测结果显示，重组蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清及TsIR-LBD免疫兔血清发生特异性反应，在Mr 59 000处出现特异条带。结论克隆并鉴定了猪带绦虫TsIR-1316基因，其LBD的表达产物可被猪囊尾蚴阳性血清所识别，具有良好的反应原性。

关键词: 　猪带绦虫, TsIR-1316, 鉴定, 表达分析

Abstract: Objective To characterize the structure of insulin receptor of Taenia solium（TsIR-1316） and express its ligand binding domain（LBD）. Methods Primers for TsIR-1316 were designed according to the genomic data of T. solium, and the TsIR-1316 gene was amplified by PCR. The nucleotide and amino acid sequences of TsIR-1316 were aligned using BLASTN and BLASTP, and the putative signal peptide and structure domains were predicted. The LBD fragment of TsIR-1316 was cloned into the pET-30a（+） vector and expressed. The expressed proteins were purified, separated by SDS-PAGE and analyzed with Western blotting using cysticercus cellulosae-positive serum and TsIR-LBD-immunized rabbit serum. Results The open reading frame of TsIR-1316 was 5 196 bp, encoded a protein of 1 732 amino acids which had a typical conserved domain of tyrosine kinase family, was 84% homologous with Echinococcus multilocularis, and had a“V”-shaped tertiary structure. As expected, SDS-PAGE showed that the expressed protein had a band at Mr 59 000. Western blotting showed that the recombinant protein had specific reactions with cysticercus cellulosae positive serum and TsIR-LBD immunized rabbit serum, resulting in a specific band at Mr 59 000. Conclusion The TsIR-1316 gene was successfully cloned and identified. The expressed protein of TsIR-1316 LBD can be recognized by cysticercus cellulosae positive serum, which suggests a good antigenicity of this protein.

Key words: Taenia solium, TsIR-1316, Identification, Expression

魏艳玲1，郭爱疆1,2，张少华1，刘光学1，侯俊玲1，骆学农1,2 *. 猪带绦虫胰岛素受体TsIR-1316的鉴定及其配体结合结构域的表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

WEI Yan-ling1，GUO Ai-jiang1,2，ZHANG Shao-hua1，LIU Guang-xue1，HOU Jun-ling1，LUO Xue-nong1,2 *. Identification of Taenia solium Insulin Receptor TsIR-1316 and Expression of Its Ligand Binding Domain[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

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猪带绦虫胰岛素受体TsIR-1316的鉴定及其配体结合结构域的表达

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