中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (4): 5-265.
王玲1， 胡慧霞2， 曾素祥3， 武伟华3， 甘文佳3， 胡黎平1， 胡旭初3 *
WANG Ling1， HU Hui-xia2， ZENG Su-xiang3， WU Wei-hua3，
GAN Wen-jia3， HU Li-ping1， HU Xu-chu3 *
摘要： 目的 构建细粒棘球绦虫脂肪酸结合蛋白（FABP）和Eg95两个保护性抗原基因的融合基因，并研究其重组蛋白的免疫学特性。 方法 以细粒棘球绦虫青海绵羊株保护基因FABP和Eg95的cDNA为模板，通过编码4个甘氨酸残基的连接序列，用非对称聚合酶链反应扩增融合基因FABP·Eg95，克隆至表达载体pET28a（+）中， 在大肠埃希菌BL21（DB3）中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，表达产物以十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定。通过Ni?鄄IDA亲和层析获得高纯度目的蛋白，利用蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白的免疫反应性。 结果 获得的融合基因FABP·Eg95长约795 bp，双酶切和测序鉴定结果均显示pET-28a（+）-FABP-Eg95重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明，重组质粒pET-28a（+）-FABP-Eg95在大肠埃希菌BL21（DB3）中获得高效表达，表达相对分子质量（Mr）约为31 000的重组蛋白，主要以包涵体形式存在，经亲和层析获得目的蛋白。Western blotting分析结果显示，重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清有良好的免疫反应性，而不与健康人血清和血吸虫病患者血清反应。 结论 FABP·Eg95融合基因构建成功，纯化的重组蛋白具有一定的抗原性。
