周瑞敏1，王轶楠2，钱丹1，李素华1，刘颖1，杨成运1，赵玉玲1，许汴利1，张红卫1*
ZHOU Rui-min1，WANG Yi-nan2，QIAN Dan1，LI Su-hua1，LIU Ying1，YANG Cheng-yun1，ZHAO Yu-ling1，XU Bian-li1，ZHANG Hong-wei1*
摘要： 目的 对河南省2015年输入性恶性疟患者血样的恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白（Plasmodium falciparum chloroquine resistant transporter，Pfcrt）基因进行检测，分析其基因多态性。 方法 采集河南省2015年132例输入性恶性疟患者的血样，并收集患者相关信息。提取患者血样中恶性疟原虫基因组DNA，采用已有的Pfcrt基因序列引物，进行巢式PCR扩增，扩增产物经ApolⅠ酶切和测序，分析输入性恶性疟原虫Pfcrt基因多态性及其分布情况。 结果 132例输入性恶性疟患者以男性青壮年为主，均为自非洲19个国家的劳务返乡人员，其中以西非居多，占38.6%（51/132），其他依次为中非（占26.5%，35/132）、南非（25.0%，33/132），东非（占8.3%，11/132）和北非（占1.5%，2/132）。患者血样DNA经巢式PCR扩增，均获得约145 bp的特异性片段。扩增产物经ApolⅠ酶切，66.7%（88/132）患者血样的扩增产物被完全酶切，出现114 bp和31 bp两个片段；32.6%（43/132）不能被酶切，仅出现145 bp单个片段；0.8%（1/132）则酶切不完全，产生145 bp、114 bp和31 bp等3个片段。测序结果显示，132份患者血样的扩增产物经测序获得的Pfcrt基因序列，与氯喹敏感株3D7序列比对，其中43份血样（占32.6%）的Pfcrt基因序列编码的74、75和76位氨基酸碱基由ATG、AAT和AAA突变为ATT、GAA和ACA，即M74I、N75E和K76T，为突变型（CVIET）；1份血样（占0.8%）的Pfcrt基因序列编码的74～76位氨基酸碱基则突变为ATG/T、A/GAA/T和AA/CA，为混合型（CVM/I、N/E/D/K、T/K）；88份血样（占66.7%）的Pfcrt基因序列未发生改变，为野生型（CVMNK）。自西非输入的恶性疟病例突变型所占比例最多，为41.2%（21/51），其他依次为东非（4/11）、南非（30.3%，10/33）和中非（22.9%，8/27），三者比较差异无统计学意义（χ2=4.07，P＞0.05）。自北非输入的2例均为野生型；1例基因混合型自西非输入。 结论 2015年河南省自非洲19个国家输入的恶性疟原虫Pfcrt基因存在3种类型，野生型（CVMNK）、突变型（CVIET）和混合型（CVM/I、N/E/D/K、T/K），野生型（CVMNK）所占比例最高（66.7%）；自西非地区输入的突变型（CVIET）所占比例最多（41.2%）。
