中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (1): 10-46-48,53.
闻晓波,冉旭华*,王春仁,宋佰芬,魏晓曼,李晓娟,王密,苗艳
WEN Xiao-bo,RAN Xu-hua*,WANG Chun-ren,SONG Bai-fen,WEI Xiao-man, LI Xiao-juan,WANG Mi,MIAO Yan
摘要: 目的 分析肝片形吸虫重组谷胱甘肽?鄄S?鄄转移酶(FhGST)对SD大鼠的免疫原性。 方法 将已构建重组原核表达质粒pET30a?鄄FhGST转化大肠埃希菌BL21(DE3)宿主菌,以异丙基?鄄β?鄄D?鄄硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性。20只SD大鼠随机均分为蛋白免疫组和佐剂对照组,蛋白免疫组以纯化的重组蛋白皮下注射免疫SD大鼠,抗原免疫剂量为200 μg/(只·次),共免疫3次,每次间隔3周。佐剂对照组以PBS代替免疫抗原同法注射。免疫前、每次免疫后和末次免疫后3周、6周鼠尾采血,分离血清。利用间接ELISA法检测免疫大鼠血清IgG抗体水平的动态变化,噻唑兰法(MTT法)检测脾淋巴细胞增殖情况。 结果 经纯化获得重组FhGST蛋白,SDS-PAGE电泳结果显示,在相对分子质量Mr 31 300处出现单一条带。Western blotting分析结果表明,纯化重组FhGST蛋白能识别自然感然肝片形吸虫的山羊阳性血清,在Mr 31 300处可见特异的免疫反应带。重组FhGST蛋白免疫SD大鼠后,可诱导产生特异性IgG抗体,在免疫后第9周,抗体效价达到顶峰(1 ∶ 89 144),且明显高于佐剂对照组(1 ∶ 1 000)。重组蛋白能显著刺激大鼠脾细胞的生长和增殖。 结论 重组FhGST蛋白能诱导SD大鼠产生特异性免疫应答,具有良好的免疫原性。