蓝氏贾第鞭毛虫基因快速标记载体的构建

摘要/Abstract

摘要： 目的构建可快速标记蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）基因的重组载体。方法采用重叠PCR法将新霉素（Neo）基因置于gdh启动子调控下，并插入pGEM-5zf载体，获得带有Neo筛选标记的重组载体pGL gdh-Neo；并将基因合成所得3′末端带有3×HA标签的多克隆位点区克隆至重组载体pGL gdh-Neo，构建可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo。以该载体标记贾第虫H2A基因验证其可用性。PCR扩增组蛋白H2A基因序列，用EcoRⅠ和SpeⅠ双酶切后克隆至重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo多克隆位点区。重组质粒线性化后转染虫体，并对G418筛选所获得的H2A贾第虫重组株进行基因组PCR、蛋白质印迹（Western blotting)和免疫荧光分析。结果构建了带有多克隆位点区和3×HA标签的可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo，其长度为4 260 bp；H2A重组质粒稳定转染至贾第虫滋养体并正确整合至其基因组，可表达相对分子质量（M_r）为16 900的H2A（含3×HA标签）。结论构建了可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo。

关键词: 蓝氏贾第鞭毛虫, HA标签, 快速标记载体

Abstract: Objective To construct a recombinant vector for rapid gene tagging in Giardia lamblia. Methods To obtain the recombinant vector pGL gdh-Neo with the Neo selection marker， the Neo gene was put under the control of gdh promoter by overlap PCR and inserted into pGEM-5zf. A DNA fragment containing multiple cloning sites (MCS) followed by triple hemagglutinin(3HA) coding sequences was synthesized and cloned into the pGL gdh-Neo to construct a recombinant vector pGL MCS-3HA-gdh-Neo. Giardia H2A gene was selected as a tagging gene to validate the effectivity of the recombinant vector pGL MCS-3HA-gdh-Neo. The histone H2A coding sequence was amplified by PCR, digested with EcoRⅠ and SpeⅠ, and inserted into MCS of pGL MCS-3HA-gdh-Neo. The resulting plasmid was then linearized and transfected into Giardia trophozoites. The H2A recombinant strain selected by G418 was analyzed by PCR，Western blotting and immunofluorescence. Results A rapid tagging recombinant vector with multiple cloning sites and triple hemagglutinin (3HA) was constructed with a length of 4 260 bp. The H2A recombinant vector was transfected into Giardia trophozoites and integrate into the Giardia genome at the correct locus. The HA-tagged H2A protein was expressed with a molecular weight（M_r） of 16 900. Conclusion A rapid tagging recombinant vector of genes in Giardia lamblia， pGL MCS-3HA-gdh-Neo， has been constructed.

Key words: Giardia lamblia, HA tag, Rapid tagging vector

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蓝氏贾第鞭毛虫基因快速标记载体的构建

Construction of Rapid Tagging Vector of Genes in Giardia lamblia

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