卡氏肺孢子虫p55抗原片段免疫原性的研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (6): 9-497.

卡氏肺孢子虫p55抗原片段免疫原性的研究

陈金铃1,段义农1 *,王建新2,朱丹丹1,秦永伟1

1 南通大学医学院，南通 2260012 南通大学附属医院，南通 226001

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-12-30 发布日期:2009-12-30

Immunogenicity of p55 Gene Fragment from Pneumocystis carinii

CHEN Jin-ling1,DUAN Yi-nong1* ,WANG Jian-xin2,ZHU Dan-dan1,QIN Yong-wei1

1 Department of Parasitology，School of Medicine，Nantong University，Nantong 226001，China2 Laboratory Medicine Centre，Affiliated Hospital of Nantong University，Nantong 226001，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-12-30 Published:2009-12-30

摘要/Abstract

摘要： 目的研究卡氏肺孢子虫p55基因片段重组质粒表达产物的免疫原性。方法原核表达质粒pGEX-570的表达产物融合蛋白GST-p55/570，经谷胱甘肽（GST）琼脂糖凝胶纯化后，十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察。将33只BALB/c小鼠随机分为3组（每组8~13只），分别用GST?鄄p55/570（50 μg/只）、GST（50 μg/只）和PBS免疫，每2周1次，共4次。末次免疫后7 d，分离小鼠脾细胞，用噻唑蓝（MTT）法检测淋巴细胞增殖反应；分别于免疫前和初次免疫后14、28、42和49 d，采血分离血清，ELISA检测血清中GST-p55/570抗体水平。用GST-p55/570组初次免疫后49 d的血清分别与GST-p55/570和GST反应，进行蛋白质印迹（Western blotting）分析。结果表达产物GST-p55/570的相对分子质量（Mr）约为47 000。MTT法结果显示，GST-p55/570组小鼠淋巴细胞的刺激指数（2.063 0±0.160 2）显著高于GST组（1.134 5±0.073 5）和PBS组（1.124 8±0.041 6）（P值均<0.01）。免疫后14~49 d，GST-p55/570组小鼠的血清抗体水平均显著高于GST组和PBS组（P值均<0.01）。Western blotting结果显示，免疫后血清能与GST-p55/570发生特异性反应。结论融合蛋白GST-p55/570能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫。

关键词: 卡氏肺孢子虫, p55抗原, 免疫原性

Abstract: Objective To evaluate immunogenicity of the recombinant protein GST-p55/570 of Pneumocystis carinii. Methods The fusion protein GST-p55/570 was expressed from the prokaryotic expression plasmid pGEX-570, and purified by using glutathione-agarose. The expressed product was analyzed by SDS-PAGE. Thirty-three mice were randomly divided into three groups, immunized with GST-p55/570， GST and PBS, respectively. Each group was immunized for four times at 2 week intervals. At the 7th day after final immunization, spleen was removed to obtain single cell suspension. Proliferation ability of lymphocytes was determined by MTT. Serum samples were collected at pre-immunizaton and two weeks after each immunization. Antibody level in sera of mice was determined by ELISA. The immune response to the recombinant GST-p55/570 recognized by sera of immunized mice was examined by Western blotting. Results The expressed fusion protein GST-p55/570 showed a Mr 47 000. Compared with GST group （1.134 5±0.073 5） or PBS group （1.124 8±0.041 6）, a higher stimulation index （2.063 0±0.160 2） was revealed in GST-p55/570-immunized mice（P＜0.01）. At the 14th to 49th day after immunization, the antibody titer against GST-p55/570 in the immunized group was significantly higher than that of GST or PBS groups （P＜0.01）. Western blotting indicated that the fusion protein （GST-p55/570） had specific immune response to positive serum. Conclusion The fusion protein GST-p55/570 elicits significant humoral and cellular immune responses.

Key words: Pneumocystis carinii, p55 antigen, Immunogenicity

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