华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2007, Vol. 25 ›› Issue (5): 8-393.

华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析

周红娟1,2;胡旭初1;胡凤玉1;徐劲1;马长玲1,3;郑小凌1;陈晓湘1,3;余新炳1

1 中山大学中山医学院寄生虫教研室，广州 510080；2 杭州市红十字会医院风湿免疫肾病重点实验室，杭州 311121；3 广州医学院病原生物学教研室，广州 510182

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-10-30 发布日期:2007-10-30
通讯作者: 余新炳

Cloning and Expression of the F0-ATP Synthase b Chain ofClonorchis sinensis and Immunogenicity Identificationof the Recombinant Protein

ZHOU Hong-juan1,2;HU Xu-chu1;HU Feng-yu1;XU Jing1;MA Chang-ling1,3;
ZHENG Xiao-ling1;CHEN Xiao-xiang1,3;YU Xin-bing1

1 Department of Parasitology，Zhongshan Medical College of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China; 2 Rheumatology Immunology Nephrology Laboratory，Hangzhou Red Cross Hospital，Hangzhou 311121，China; 3 Department of Pathogenic Biology，Guangzhou Medical College，Guangzhou 510182，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-10-30 Published:2007-10-30
Contact: YU Xin-bing

摘要/Abstract

摘要： 目的对华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基（CsF₀-ATP-synt_B）基因进行克隆、表达及重组蛋白的免疫原性分析。方法以华支睾吸虫成虫cDNA文库中含有F₀-ATP合酶b亚基基因的质粒为模板，扩增该基因（去除线粒体靶向序列的成熟肽基因），将其克隆到原核表达质粒pET-28a（+）中，转化大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，经亲和层析获得的纯化表达产物免疫SD大鼠，制备抗血清。蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白的免疫原性。结果华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基成熟肽基因的编码区含813个碱基，编码271个氨基酸，相对分子质量（Mr）为31 171.9。经亲和层析获得的重组蛋白可被其免疫的大鼠血清识别。结论华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达。

关键词: 华支睾吸虫, F₀-ATP合酶b亚基, 基因克隆, 原核表达, 免疫原性

Abstract: Objective To clone and express the Clonorchis sinensis F₀-ATP synthase b chain （CsF₀-ATP-synt_B） gene and analyze immunogenicity of the recombinant protein. Methods The coding region F₀-ATP synthase b chain gene with the mitochondrial targeting sequence （MTS） removed was amplified with PCR using the cloned plasmid as template， and the product was cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a（+）， transformed into E.coli BL21（DE3） and induced with IPTG. The expressed product was purified by Ni-IDA affinity chromatography，and analyzed by SDS-PAGE for its expression and identified by Western blotting for its immunogenicity. Results The coding sequence of the F₀-ATP synthase b-chain like gene removed off the MTS contains 813 base pairs encoding 271 amino acids with a theoretical molecular weight of 31 171.9. PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant plasmid pET-28a（+）-CsF0-ATP-synt_B was constructed successfully， and the resoluble expression was obtained in E.coli BL21. Highly purified recombinant protein was prepared through affinity chromatography. The recombinant protein could be recognized by the immune serum of the SD rat immunized with the recombinant protein. Conclusion The CsF₀-ATP-synt_B like gene has been efficiently expressed in prokaryotic expression system with immunogenicity.

Key words: Clonorchis sinensis, F₀-ATP synthase b chain, Molecular cloning, Prokaryotic expression, Immunogenicity

周红娟;胡旭初;胡凤玉;徐劲;马长玲;郑小凌;陈晓湘;余新炳. 华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2007, 25(5): 8-393.

ZHOUHong-juan;HUXu-chu;HUFeng-yu;XUJing;MAChang-ling;ZHENGXiao-ling;CHENXiao-xiang;YUXin-bing. Cloning and Expression of the F0-ATP Synthase b Chain ofClonorchis sinensis and Immunogenicity Identificationof the Recombinant Protein[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2007, 25(5): 8-393.

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华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析

Cloning and Expression of the F0-ATP Synthase b Chain ofClonorchis sinensis and Immunogenicity Identificationof the Recombinant Protein

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