溴氰菊酯抗性白纹伊蚊抑制消减cDNA文库的构建

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2006, Vol. 24 ›› Issue (4): 10-284.

溴氰菊酯抗性白纹伊蚊抑制消减cDNA文库的构建

吴家红1,2;赵彤言1;董言德1

1 军事医学科学院微生物流行病研究所，北京 100071;2 贵阳医学院寄生虫学教研室，贵阳 550004， China

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-08-30 发布日期:2006-08-30
通讯作者: 赵彤言

Construction of Suppression Subtracted cDNA Library of Deltamethrin-resistant Aedes albopictus

WU Jia-hong 1,2;ZHAO Tong-yan1;DONG Yan-de1

1 Institute of Microbiology and Epidemiology， Academy of Military Medical Sciences， Beijing 100071， China; 2 Department of Parasitology， Guiyang Medical College， Guiyang 550004， China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-08-30 Published:2006-08-30
Contact: ;ZHAO Tong-yan

摘要/Abstract

摘要： 目的构建溴氰菊酯抗性白纹伊蚊抑制消减cDNA文库。方法分别提取白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株（R-lab株）和敏感株（S-lab株）总RNA，纯化后获得mRNA，并反转录为双链cDNA。以R-lab株mRNA作为实验方（tester）， S-lab株mRNA作为驱动方（driver），以及R-lab株mRNA为driver方，S-lab株mRNA为tester方，进行正、反双向抑制性消减。富集的差异表达cDNA克隆到pMD18-T载体，构建白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性和敏感双向消减文库。结果分别从正向文库和反向文库中获得580和477个阳性克隆，从所构建文库随机挑选150个克隆进行PCR鉴定，阳性克隆率为93%，cDNA片段主要分布于150～750 bp。结论构建了抗溴氰菊酯白纹伊蚊抑制消减cDNA文库。

关键词: 白纹伊蚊, 溴氰菊酯, 抗性, 抑制消减杂交, 基因文库

Abstract: Objective To construct the suppression subtracted cDNA library of deltamethrin-resistant Aedes albopictus. Methods Total RNA was extracted from the deltamethrin-resistant （R-lab） and -sensitive （S-lab） isolates， mRNA was obtained after purification. Double stranded cDNAs were synthesized after reverse transcription. Two subtractions were performed by suppression subtractive hybridization with S-lab as tester and R-lab as driver or S-lab as driver and R-lab as tester. Enriched different expressed cDNA was cloned into pMD18-T vector to construct subtractive libraries. Results The subtracted cDNA libraries contained 580 and 477 positive clones respectively. The PCR results of 150 clones picked randomly from each library showed that the positive ratio of constructed cDNA libraries was 93%， with a length of cDNA fragments ranged from 150 bp to 750 bp. Conclusion The suppression subtracted cDNA library of deltamethrin-resistant Ae. albopictus is constructed.

Key words: Aedes albopictus, Deltamethrin, Resistance, Suppression subtractive hybridization, Gene library

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