细粒棘球蚴重组抗原 B的制备、纯化及鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (5): 10-299.

细粒棘球蚴重组抗原 B的制备、纯化及鉴定

陈新华¹,温浩^2*,卢晓梅²,张金辉²,林仁勇²,郑树森¹

1 浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科，杭州 310031；2 新疆包虫病临床研究所，新疆包虫病基础医学重点实验室，乌鲁木齐 830054

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-10-30 发布日期:2005-10-30

Expression， Purification and Identification of Echinococcus granulosus Recombinant Antigen B

CHEN Xin-hua¹,WEN Hao^2*,Lu Xiao-mei²,ZHANG Jin-hui²,LIN Ren-yong²,ZHEN Shu-sen¹

Surgical Lab, The First Affiliated Hospital， Medical School， Zhejiang Universtiy，Hangzhou 310031， China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-10-30 Published:2005-10-30

摘要/Abstract

摘要： 目的制备细粒棘球蚴人工重组抗原B。方法构建pMalc2x-AgB质粒，在原核系统大肠埃希菌 JM109中诱导表达，将所得融合蛋白rAgB-MBP用蛋白水解酶Xa（Factor Xa Protease）进行消化，酶切产物用两步亲和层析进行分离纯化。经过直链淀粉树脂柱、羟基磷灰石柱，获得了纯化的细粒棘球蚴人工重组抗原B，并用Western blotting对抗原B的特异性进行了鉴定。结果制备的抗原B（rAgB）相对分子量（Mr）为12 000，rAgB经过原核表达、酶切、层析柱分离后依然保持抗原活性。结论用分子生物学手段制备并纯化了人工重组抗原B，为批量生产诊断抗原、制备单克隆抗体及筛选噬菌体抗体库奠定了基础。

关键词: 棘球蚴病, 重组抗原B, 亲和层析

Abstract:

Objective To purify and identify recombinant antigen B of hydatid disease. Methods The recombinant plasmid pMalc2x-AgB was expressed in E. coli JM109. The fusion protein rAgB-MBP was made up of antigen B and MBP（maltose binding protein） which was designed to absorb the antigen B onto the amylose column. In order to get the pure antigen as the probe for selecting phage displayed antibody library，factor Xa protease was used to digest the fusion protein rAgB-MBP so that MBP was cut off from the special cleavage site. Flowing through the amylose resin column and hydroxyapatite column， rAgB was purified by the method of affinity chromatography. Its specificity was proved by patient sera with Western blotting. Results The recombinant antigen B was Mr 12 000，and it showed the capability to combine with the specific antibody. Conclusion Hydatid disease antigen B can be produced by molecular method and applied in monoclonal antibody production and phage antibody library scanning.

Key words: Hydatid disease, Recombinant antigen B, Affinity chromatography

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