猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白45WB2基因在毕赤酵母中的表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (3): 11-174.

猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白45WB2基因在毕赤酵母中的表达

王谨1,2;骆学农1;岳城2;胡志敏2;才学鹏1

1 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室, 兰州 730046; 2 新疆农业大学化工学院, 乌鲁木齐 830052

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-06-30 发布日期:2005-06-30
通讯作者: 才学鹏

Expression of Taenia solium Oncosphere 45WB2 Gene in Pichia pastoris System

WANG Jin;LUO Xue-nong;YUE Cheng;HU Zhi-min;CAI Xue-peng

Key Laboratory of Animal Virology, Ministry of Agriculture/Lanzhou VeterinaryResearch Institute, CAAS, Lanzhou 730046, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-06-30 Published:2005-06-30
Contact: CAI Xue-peng

摘要/Abstract

摘要： 目的从猪带绦虫六钩蚴总RNA中扩增45WB2基因,并在甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K中获得高效表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR), 从孵化激活的六钩蚴克隆获得459 bp的基因, 亚克隆至酵母分泌表达载体pPIC9K中, 经测序验证读码框正确后, 重组质粒电转化毕赤酵母SMD1168菌株。用PCR方法检测结果表明, 目的基因整合进毕赤酵母染色体DNA中。重组菌株用1%甲醇诱导, 分别取诱导 72和96 h的上清和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果重组菌株在毕赤酵母中的表达蛋白分子量为Mr 16 000, 表达产物占上清总蛋白量的32.8%, 且能被猪囊尾蚴病患者血清识别。结论基因在毕赤酵母中成功表达, 表达产物有望作为免疫原用于猪囊尾蚴病的免疫预防。

关键词: 猪带绦虫, 六钩蚴表膜结合蛋白基因, 毕赤酵母菌, 基因表达

Abstract: Objective To amplify and express the gene from Taenia solium oncosphere in Pichia pastoris system. Methods Total RNA was extracted from hatched and activated oncospheres. A 459bp specific fragment was amplified by RT-PCR. It was subcloned into the secreted expression vector pPIC9K, and identified by sequencing and then transformed into P. pastoris SMD1168 by electroporation. PCR analysis showed that 45WB2 was integrated into the genomic DNA of yeast. The recombinants were induced by 1% methanol and the culture supernatant was collected and tested by SDS-PAGE and Western blotting. Results 45WB₂ gene was expressed successfully in P. pastoris and the product was recognized by human positive serum against cysticercosis. Conclusion The recombinant 45WB2 expressed in P. pastoris may be used to prevent pigs from the infection of Taenia solium.

Key words: Taenia solium, 45WB2 gene, Pichia pastoris, Gene expression

王谨;骆学农;岳城;胡志敏;才学鹏. 猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白45WB2基因在毕赤酵母中的表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2005, 23(3): 11-174.

WANGJin;LUOXue-nong;YUECheng;HUZhi-min;CAIXue-peng. Expression of Taenia solium Oncosphere 45WB2 Gene in Pichia pastoris System[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2005, 23(3): 11-174.

[1]	段曰黎, 喻一奇, 朱浩翔, 王新宇. 非典型脑囊尾蚴病1例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(1): 128-130.
[2]	成钢, 王芊薄, 龚强, 熊德慧. 东方田鼠HSP90α和KPNA2基因表达及体内抗日本血吸虫效果比较观察[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(5): 552-556.
[3]	茅光耀, 郭云海, 张仪, 肖宁. Cu²⁺胁迫对福寿螺金属硫蛋白基因mRNA表达的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(3): 375-378.
[4]	茅光耀, 周鸿让, 黄芸, 岳志远, 段磊, 许秋利, 郭云海, 党志胜, 张仪, 肖宁. Cu²⁺胁迫下福寿螺谷胱甘肽S转移酶基因表达分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(2): 213-218.
[5]	邓艳1，张雅兰1，李素华1，陈伟奇1，蔺西萌1，陈曦2，王庭柱3，李蓬1，张红卫1，许汴利1*. 2016年河南省方城县猪带绦虫病和囊尾蚴病知识、态度和行为的调查结果分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 19-242-245.
[6]	王楠1, 滕飞翔1, 俞黎黎1, 杨李1, 张承伯1, 周鹰1,2, 崔玉宝1,2*. 粉尘螨变应原Der f 8全长基因克隆及表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(4): 8-351-356.
[7]	于爱萍, 沈玉娟. 长链非编码RNA在寄生虫中的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(3): 294-299.
[8]	刘光学1，张少华1，郭爱疆1,2，侯俊玲1，魏艳玲1，王帅1，骆学农1,2*. 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2016, 34(4): 7-334-338,345.
[9]	魏艳玲1，郭爱疆1,2，张少华1，刘光学1，侯俊玲1，骆学农1,2 *. 猪带绦虫胰岛素受体TsIR-1316的鉴定及其配体结合结构域的表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2016, 34(2): 1-93-98.
[10]	马承旭1,2 *，王宏伟1,2，杨艺萱1,2. 猪带绦虫基因组学及猪囊尾蚴病候选疫苗的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2016, 34(2): 15-161-165.
[11]	臧炜, 卢潍媛, 徐馀信, 曹建平. 日本血吸虫酪氨酸激酶TK4保守区编码基因的克隆和分析（英文）[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2014, 32(3): 1-167-171.
[12]	周必英, 刘美辰, 贺莉芳. 猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B. longum的构建及鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2014, 32(3): 18-239-241.
[13]	周必英1 *，周泠2，刘美辰1，刘晖1，张曦1. 猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2013, 31(5): 9-372-375.
[14]	黄江1，2，李波1，戴佳琳1，张爱华2 *. 猪带绦虫CDC37基因的克隆、表达与组织定位研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2013, 31(1): 5-23-26.
[15]	蔡辉霞, 沈玉娟, 韩秀敏, 袁忠英, 王虎, 徐馀信, 胡媛, 卢潍媛, 官亚宜, 曹建平. 细粒棘球蚴抗原EPC1基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(3): 2-167-171.