微小隐孢子虫cDNA文库的构建及P23、CP15/60基因的克隆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2002, Vol. 20 ›› Issue (5): 7-284.

微小隐孢子虫cDNA文库的构建及P23、CP15/60基因的克隆

徐卫东,张西臣,孔庆昌,刘明远,尹继刚,李建华,杨举,何宏轩,吕亚坚

中国人民解放军军需大学;中国人民解放军军需大学;吉林省兽医科学研究所;中国人民解放军军需大学;中国人民解放军军需大学;中国人民解放军军需大学;中国人民解放军军需大学;中国人民解放军军需大学;吉林省兽医科学研究所长春130062;长春130062;长春130062;长春130062;长春130062;长春130062;长春130062;长春130062;长春130062

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2002-10-30 发布日期:2002-10-30

Construction of Cryptosporidium parvum cDNA Library and Cloning of P23、CP15/60

XU Wei dong ¹;ZHANG Xi chen ¹;KONG Qing chang ²;LIU Ming yuan ¹;YIN Ji gang¹;LI Jian hua¹;YANG Ju ¹;HE Hong xuan ¹;L Ya jian ²

1 Quatermaster University of PLA;Changchun 130062; 2 Veterinary Research Institute of Jilin Province;Changchun 130062

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2002-10-30 Published:2002-10-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　微小隐孢子虫地方株cDNA文库构建及P2 3、CP15 60基因的克隆。　方法　提取微小隐孢子虫总RNA、mRNA ,逆转录合成cDNA。将cDNA与 pUC18DNA连接 ,导入DH5α宿主细胞中生成cDNA文库。根据文献分别设计并合成两对PCR引物 ,从上述文库中筛选保护性基因 ,对PCR产物克隆、测序。　结果　文库容量为 1.9× 10 6个重组子 ,文库中cDNA插入片段大小介于 0 .4× 10 3～ 6.5× 10 3bp。从该文库中克隆出编码 2 3kDa、15 60kDa子孢子表面蛋白的核苷酸序列。　结论　成功地用 pUC18质粒载体构建了C .parvumcDNA文库。

关键词: 微小隐孢子虫, cDNA文库, 子孢子, 表面抗原

Abstract: 　Objective To study the genetic background of Cryptosporidium parvum local strain and to provide a DNA source of the parasite. Methods With Promega′s kits, total RNAs and mRNAs were isolated from C. parvum and cDNAs were synthesized by reverse transcription. A cDNA library was prepared with pUC18 vector and host cells of E. coli strain DH5 alpha. Two PCR primers were designed and synthesized to screen protective genes. PCR products were cloned and sequenced. Results There are 1.9×10 6 recombinants in this library. The cDNA fragments ranged between 0.4×10 3 bp and 6.5×10 3 bp. Two genes encoding 23 kDa and 15/60 kDa sporozoite proteins of C. parvum respectively from the library were cloned and sequenced. Conclusion A cDNA library of Cryptosporidium parvum was prepared successfully.

Key words: Cryptosporidium parvum, cDNA library, sporozoite, surface antigen

徐卫东;张西臣;孔庆昌;刘明远;尹继刚;李建华;杨举;何宏轩;吕亚坚. 微小隐孢子虫cDNA文库的构建及P23、CP15/60基因的克隆[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2002, 20(5): 7-284.

XUWeidong;ZHANGXichen;KONGQingchang;LIUMingyuan;YINJigang;LIJianhua;YANGJu;HEHongxuan;LYajian. Construction of Cryptosporidium parvum cDNA Library and Cloning of P23、CP15/60[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2002, 20(5): 7-284.

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