细粒棘球蚴原头节3种重组抗原的双向电泳定位分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (3): 8-198-200,205.

细粒棘球蚴原头节3种重组抗原的双向电泳定位分析

朱明星1,2,3，李君良1,2，巨艳1,2，高鹏1,2，赵巍1,2 *

1 宁夏医科大学医学科学技术研究中心，银川 750004；2 宁夏医学科学研究所，银川 750004；3 宁夏医科大学实验动物中心，银川 750004

出版日期:2013-06-30 发布日期:2013-07-17

Position Analysis of Three Recombinant Proteins of Echinococcus granulosus Protoscolex with Two-dimensional Electrophoresis

ZHU Ming-xing1,2,3, LI Jun-liang1,2, JU Yan1,2，GAO Peng1,2, ZHAO Wei1,2 *

1 Research Center of Medical Science and Technology of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 2 The medical scientific institute of Ningxia, Yinchuan 750004, China; 3 The Experimental Animal Center of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China

Online:2013-06-30 Published:2013-07-17

摘要/Abstract

摘要： 目的利用已有的细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）原头节3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29获得特异性抗体，以识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点。方法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）初步分离细粒棘球蚴原头节蛋白，预判断蛋白分布情况。应用双向电泳技术分离原头节蛋白，PDquest软件分析原头节的蛋白质数量、相对分子质量（Mr）和等电点（IP）。用原头节的3种重组蛋白rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29分别免疫新西兰家兔，制备血清，纯化抗体。蛋白质印迹（Western blotting）鉴定特异性抗体对原头节双向电泳图谱中相应蛋白的识别。结果 SDS-PAGE结果显示，细粒棘球蚴原头节蛋白主要分布于Mr 18 000~90 000区域。双向电泳分离出240个蛋白位点，为Mr 15 790~117 050，IP为4.0~9.5，其中85.8%（206/240）蛋白等电点为5~9。Western blotting结果显示，rEg14-3-3特异性抗体可识别细粒棘球蚴原头节双向电泳图谱中约为Mr 33 000、IP为4.86的14-3-3蛋白位点，rEgZW-5特异性抗体可识别约为Mr 23 000、IP为4.98的ZW-5蛋白位点，rEgP-29特异性抗体可识别约为Mr 29 000、IP为5.65的P-29蛋白位点。结论细粒棘球蚴原头节的3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29的抗体可识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点。

关键词: 细粒棘球蚴, 原头节, 重组抗原, 双向电泳

Abstract: Objective To obtain specific antibodies of the three recombinant antigens obtained previously, rEgZW-5, rEg14-3-3 and rEgP-29, for identifiying the corresponding proteins in two-dimensional electrophoretogram of Echinococcus granulosus protoscolex. Methods The distribution of proteins from E. granulosus protoscoleces was judged by SDS-PAGE previously. Two-dimensional electrophoresis was used to separate proteins from E. granulosus protoscoleces, and the result was scanned and analyzed by the PDquest software to get the information about the quantity of proteins as well as their isoelectric point （IP） and relative molecular mass （Mr）. Rabbits were immunized with the 3 recombinant antigens and antibodies were purified from antisera. Western blotting was used to identify the protein as marker in two-dimensional electrophoretogram of protoscolex. Results SDS-PAGE displayed that the proteins separated from Echinococcus granulosus protoscoleces mainly distributed in the Mr region of 18 000-90 000. 240 proteins were obtained by two-dimensional electrophoresis with Mr 15 790-117 050 and IP 4.0-9.5, and 85.8% （206/241） of the proteins showed the IP ranged from 5 to 9. Western blotting showed that the specific antibody of rEg14-3-3 identified the 14-3-3 protein in two-dimensional electrophoretogram of protoscolex with Mr 33 000 and IP 4.86, the specific antibody of rEgZW-5 identified the ZW-5 protein with Mr 23 000 and IP 4.98, and the specific antibody of rEg P-29 identified the P-29 protein with Mr 29 000 and IP 5.65. Conclusion The antibodies against the three recombinant proteins from Echinococcus granulosus protoscoleces can identify corresponding proteins in the two-dimensional electrophotoregrams.

Key words: Echinococcus granulosus, Protoscolex, Recombinant protein, Two-dimensional electrophoresis

朱明星1,2,3，李君良1,2，巨艳1,2，高鹏1,2，赵巍1,2 *. 细粒棘球蚴原头节3种重组抗原的双向电泳定位分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2013, 31(3): 8-198-200,205.

ZHU Ming-xing1,2,3, LI Jun-liang1,2, JU Yan1,2，GAO Peng1,2, ZHAO Wei1,2 *. Position Analysis of Three Recombinant Proteins of Echinococcus granulosus Protoscolex with Two-dimensional Electrophoresis[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2013, 31(3): 8-198-200,205.

[1]	逯君霞, 许军英, 赵彬, 王芊文, 李文华, 耿玉庆, 侯隽, 吴向未, 陈雪玲. 细粒棘球蚴感染诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR抑制炎症反应[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 559-566.
[2]	蒉嫣, 薛垂召, 王旭, 刘白雪, 王莹, 王立英, 杨诗杰, 韩帅, 伍卫平, 肖宁. 2021年全国棘球蚴病防治进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 142-148.
[3]	郭刚, 任远, 焦红杰, 武娟, 郭宝平, 齐文静, 李军, 张文宝. 腹腔感染棘球蚴微囊对小鼠肝脏多房棘球蚴感染及致病的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 156-162.
[4]	路伟民, 杨小涛, 朱瑛, 张鸿, 李霁伟, 王艳春. 儿童肺细粒棘球蚴病1例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 253-256.
[5]	郭璐, 吴小霞, 段兰利, 王冰洁, 徐宁, 阿热艾·阿哈太, 乌云花, 赵莉, 班万里, 陈云英, 余婉蓉, 刘帅, 潘星羽, 吾力江·卡马力, 徐晶, 穆尼拉·特列吾汗, 张壮志. 新疆部分地区牛、羊细粒棘球蚴感染情况调查及基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 603-609.
[6]	毋德芳, 付永, 任宾, 张耀刚, 许晓磊, 庞明泉, 樊海宁. 青海人源两型棘球绦虫（棘球蚴）遗传多样性及分化时间研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 610-615.
[7]	卓怡呈, 杨海成, 刘程豪, 张宝财, 多小勇, 张示杰. 骨桥蛋白表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 299-304.
[8]	侯娇, 温浩, 王明坤, 蒋铁民, 房彬彬, 李静, 张传山, 王慧. 肝细粒棘球蚴病手术患者病灶活性状态的影响因素分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 309-314.
[9]	乔世源, 周雪, 刘程豪, 姜慧娇, 卜媛媛, 陈雪玲, 吴向未. 阿苯达唑载药囊泡对细粒棘球蚴原头节活性的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 324-329.
[10]	严积灿, 于文昊, 侯立朝, 张灵强, 许晓磊, 王海久, 卢倩, 樊海宁. 高龄腹腔-皮下细粒棘球蚴病诊疗1例报告[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 132-135.
[11]	朱江, 黄海军, 张望, 梅虎, 朱时雨, 宋思凯, 张军. 合并囊内胆漏的肝细粒棘球蚴病患者手术方式的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 50-55.
[12]	马文梅, 桑伟, 艾麦提·牙森, 佐力克, 付莉, 苗娜. 核因子-κB/髓样分化分子88在细粒棘球蚴病患者肝纤维化中的作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 779-783.
[13]	史琦琪, 刘丛珊, 霍乐乐, 魏玉芬, 姜斌, 殷梦, 薛剑, 陶奕, 张皓冰. 氨基醇类化合物HT24对多房棘球蚴原头节微管蛋白表达水平的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 437-443.
[14]	周文正, 孙俊刚, 赵喜滨, 曹力. 三维适形调强放疗对大鼠继发性股骨细粒棘球蚴感染的疗效研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 443-448.
[15]	黄燕, 喻文杰, 尚婧晔, 何伟, 张光葭, 王奇, 杨柳, 廖沙, 李汭芮, 姚人新, 曾明才, 张福斌, 李树成, 刘阳, 钟波, 王谦. 阿苯达唑和吡喹酮交替联合用药治疗藏族牧民棘球蚴病的效果观察[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 171-177.