日本血吸虫童虫表膜结合多肽的亲和筛选与初步鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (3): 3-175.

日本血吸虫童虫表膜结合多肽的亲和筛选与初步鉴定

魏琦^1，2，刘彦²，曾庆仁²，陈欲晓^1*，周军³，刘碧源^1，2，邹艳⁴，
杨胜辉²，蔡力汀²，李立新¹，兰玲梅²

1 中南大学基础医学院免疫学教研室，长沙 410013；2 中南大学基础医学院细胞与分子生物学实验中心，长沙 410013；3 中南大学湘雅三医院实验中心，长沙 410013；4 湖南中医药高等专科学校基础医学部，株洲 410013

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-06-30 发布日期:2010-06-30

Screening and Characterization of Peptides Specifically Binding to the Schistosomulum Tegument of Schistosoma japonicum

WEI Qi^1，2， LIU Yan²， ZENG Qing-ren²， CHEN Yu-xiao^1*， ZHOU Jun³， LIU Bi-^yuan1，2，ZOU Yan⁴， YANG Sheng-hui²， CAI Li-ting²， LI Li-xin¹， LAN Ling-mei²

1 Department of Immunology，Xiangya Medical School，the Central South University，Changsha 410013，China；2 Cell ＆ Molecular Biological Experiment Xiang Ya School of Medicine Center，the Central South University，Changsha 410013，China；3 the Third Xiangya Hospital of Central South University，Changsha 410013，China；4 Hunan Traditional Chinese Medical College，Zhuzhou 412012，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-06-30 Published:2010-06-30

摘要/Abstract

摘要： 【摘要】目的筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫（Schistosoma japonicum）童虫表膜特异性结合的多肽并鉴定。方法利用噬菌体十二肽库与日本血吸虫活童虫靶分子之间的亲和力结合，经3轮吸附-洗脱-扩增，从末次回收的结合噬菌体中随机挑取20个克隆进行测序。根据测序结果，选取出现次数最多的噬菌体克隆作为目标噬菌体，免疫组化检测目的噬菌体，并回输到已感染日本血吸虫的小鼠体内，2.5 h后处死小鼠，回收肝脏和日本血吸虫童虫，分别洗脱与肝脏和童虫结合的噬菌体，进行统计学分析。结果经3轮筛选后，噬菌体回收率从第1轮的0.77×10-8到第3轮的0.75×10-5，说明噬菌体得到了有效富集。DNA测序结果表明，20个噬菌体克隆中的15个克隆呈现QHPRIRKOOOOO序列。免疫组化结果显示，表达该序列的噬菌体能与童虫表膜有效结合；体内回输试验证实，该噬菌体能有效地靶向结合于体内日本血吸虫童虫表膜。结论筛选获得的短肽QHPRIRKOOOOO能有效地靶向结合日本血吸虫童虫表膜。

关键词: 日本血吸虫, 童虫, 噬菌体展示技术, 表膜, 靶向性

Abstract:

【Abstract】 Objective To screen and analyze the peptides in 12 phage-display peptide library specifically binding to the schistosomulum tegument of Schistosoma japonicum. Methods A 12 phage-display peptide library was screened with the S. japonicum schistosomula as the target cells for biopanning by degrees, positive clones picked randomly were deduced by DNA sequencing. According the sequencing result, immunohistochemical staining was performed to determine the specificity of the phages to the tegument. To test their targeting efficacy, the interested phage clones were infused back to the mice infected with S. japonicum, mice were sacrificed 2.5 hours later, and the phage distribution in the liver and the tegument of schistosomula was appraised, respectively. Results After 3 rounds of biopanning, the phage recovery rate increased from 0.77×10-8 to 0.75×10-5, indicating that the phage library was successfully enriched in the tegument of schistosomula. Seventy-five percent （15/20） of the analyzed sequences were identical with a sequence of QHPRIRKOOOOO. The immunohistochemical stainings showed this sequence specifically binding to the tegument. In vivo titering displayed that this sequence selectively targeted the tegument. Conclusion The peptide of QHPRIRKOOOOO specifically binds to the schistosomulum tegument.

Key words: Schistosoma japonicum, Schistosomulum, Phage display, Tegument, Target

魏琦;刘彦;曾庆仁;陈欲晓;周军;刘碧源;邹艳;杨胜辉;蔡力汀;李立新;兰玲梅. 日本血吸虫童虫表膜结合多肽的亲和筛选与初步鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(3): 3-175.

WEIQi;LIUYan;ZENGQing-ren;CHENYu-xiao*;ZHOUJun;LIUBi-yuan;ZOUYan;YANGSheng-hui;CAILi-ting;LILi-xin;LANLing-mei. Screening and Characterization of Peptides Specifically Binding to the Schistosomulum Tegument of Schistosoma japonicum[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(3): 3-175.

[1]	谭潇, 朱琪, 刘众齐, 李佳, 彭丁晋. 日本血吸虫Sj26gst mRNA候选疫苗的免疫原性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 546-551.
[2]	刘华熳, Bikash Giri, 方传涛, 郑亚萌, 吴慧欣, 曾敏浩, 李姗, 程国锋. 日本血吸虫m6A修饰的性别相关circRNA鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 552-558.
[3]	兰炜明, 徐慧, 徐银, 邱婷婷, 谢曙英, 邓凤林, 胡绍良, 刘欢, 郭家钢, 曾小军. 荧光定量PCR用于日本血吸虫感染高危环境早期预警的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 502-505.
[4]	王晓玲, 张卫, 易存, 陈祥宇, 杨文彬, 徐斌, 胡薇. SjGPR89蛋白对日本血吸虫生长发育的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(6): 701-707.
[5]	陈果, 朱丹丹, 段义农. 免疫调节蛋白B7家族在日本血吸虫感染免疫调节中的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(6): 774-779.
[6]	严晓岚, 闻礼永, 熊彦红, 郑彬, 张剑锋, 汪天平, 俞丽玲, 许国章, 林丹丹, 周晓农. 《日本血吸虫抗体检测标准酶联免疫吸附试验法》解读[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(6): 798-800.
[7]	汤宪时, 季文翔, 熊春蓉, 周永华, 许永良, 仝德胜. 晚期日本血吸虫感染小鼠焦虑样行为学研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 622-628.
[8]	梁乐, 张璟, 沈玉娟, 胡媛, 曹建平. 环鸟苷酸腺苷酸促日本血吸虫感染小鼠肝虫卵肉芽肿形成及纤维化[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(4): 441-445.
[9]	章孝成, 高元, 胡媛, 曹建平. 日本血吸虫感染小鼠脾多核型髓源抑制细胞变化的初步研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 330-336.
[10]	高元, 章孝成, 胡媛, 曹建平. 自然杀伤细胞抑制血吸虫病肝纤维化作用的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(2): 168-174.
[11]	洪炀, 林矫矫. 日本血吸虫蛋白质组学研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 725-730.
[12]	黄爱龙, 张蓓, 沈函宇, 陈果, 李静, 朱丹丹, 段义农. 日本血吸虫感染小鼠肝髓样细胞触发受体-1的表达及其功能[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(5): 621-626.
[13]	赵成思, 秦敏, 谭明娟, 缪婷婷, 邵天业, 刘新建, 王勇. 吡喹酮对日本血吸虫急性感染小鼠肾脏功能损伤的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 200-209.
[14]	莫筱瑾, 吴群峰, 冯正, 徐斌, 张颋, 陈绅波, 胡薇. SCAR-PCR技术鉴定日本血吸虫尾蚴性别的应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 777-780.
[15]	王伟, 赵成思, 缪婷婷, 周春雷, 张成诚, 秦敏, 邵天业, 王勇. 吡喹酮治疗对日本血吸虫感染小鼠脾巨噬细胞增殖和炎症反应的抑制作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(3): 263-270.