猪囊尾蚴一种蛋白抗原基因的分子克隆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2004, Vol. 22 ›› Issue (5): 14-305.

猪囊尾蚴一种蛋白抗原基因的分子克隆

刘殿武,李文玲,张丽梅

河北医科大学流行病学教研室,石家庄 050017

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-10-30 发布日期:2004-10-30

Molecular Cloning of a Protein Antigen Gene of Cysticercus cellulosae

LIU Dian wu,LI Wen ling,ZHANG Li mei

Department of Epidemiology,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2004-10-30 Published:2004-10-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出编码某种蛋白抗原的基因。　方法　提取猪囊尾蚴mRNA,经反转录合成cDNA,构建cDNA文库。以兔抗猪囊尾蚴多克隆抗体筛选cDNA文库,得到阳性克隆后,将其亚克隆到pBlue scriptSK质粒中,以载体臂上的通用引物采用双脱氧末端终止法测定插入片段的核苷酸序列,GENETYX软件分析核苷酸序列编码的氨基酸序列,在GenBank中进行核苷酸序列同源性检索。　结果与结论　经过3次筛选,从cDNA文库中筛选出一个长度为1320bp的基因片段。此克隆的开放阅读框为1260bp,编码420个氨基酸,含有两个糖基结合位点。与GenBank中的基因进行同源性分析,其部分核苷酸序列与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)红细胞膜内蛋白和恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)红细胞表面抗原高度同源

关键词: 猪囊尾蚴, 分子克隆, cDNA文库, 序列分析, 同源性分析

Abstract: 　Objective To immunoscreen one protein antigen gene from a cDNA library of Cysticercus cellulosae . Methods A cDNA library of C. cellulosae was constructed after cDNA was synthesized, and immunoscreened using rabbit anti C. cellulosae polyclone antibody. The gene structure and its possible function were analyzed by comparing with the sequences available in the GenBank, after the insert of positive clone was subcloned to pBluescript SK plasmid and the nucleotide sequence of the cDNA was determined by dideoxynucleotide chain termination method using a Taq DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit. The amino acid sequence was deduced from nucleotide sequence using GENETYX software. Homological search of the nucleotide sequences was done using BLAST in GenBank. Results and Conclusion A cDNA clone of 1 320bp was isolated. The clone contained one open reading frame composed of 1 260bp encoding 420 amino acids, in which two potential glycosylation sites were found. The partial nucleotide sequence of the gene fragment showed high homology with the essential spectrin gene of Caenorhabditis elegans and the erythrocyte surface antigen gene of Plasmodium falciparum , when the gene fragment was homologically analyzed in GenBank.

Key words: Cysticercus cellulosae, Molecular cloning, cDNA library, Sequencing, Homology analysis

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