旋毛虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响

摘要/Abstract

摘要：

目的研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响。方法旋毛虫肌幼虫培养24 h，收集培养液，取上清，即为旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白。将人小细胞肺癌NCI-H446细胞（编号A054）随机分为3组，实验组（A组）和细胞凋亡组（B组）的NCI-H446细胞（5×106/ml）分别与旋毛虫排泄分泌蛋白（终浓度为0.3 mg/ml）和顺铂（6.4 μg/ml）共培养24 h，空白对照组（C组）的NCI-H446细胞培养24 h，不作任何处理。RT-PCR检测3组NCI-H446细胞中凋亡抑制基因Bcl-2、凋亡相关基因Fas和Fas配体(Fasl)mRNA的表达水平。以抗原癌基因C-myc标签鼠单克隆抗体为一抗，蛋白质印迹（Western blotting）检测3组细胞C-myc蛋白的表达情况。免疫荧光检测3组NCI-H446细胞中C-myc蛋白阳性表达情况。结果 RT-PCR结果显示，经旋毛虫排泄分泌蛋白处理的NCI-H446细胞（A组），Bcl-2 mRNA相对表达水平最低，为（0.575±0.047），与B（0.850±0.073）、C组（0.975±0.069）比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。A组Fas mRNA相对表达量最高，为（0.975±0.115），B（0.817±0.121）、C组（0.769±0.061）相对较低（P<0.05）。A、B和C组细胞Fasl mRNA相对表达水平分别为0.669±0.051、0.787±0.124、0.875±0.125（P<0.05）。A、B和C组细胞Fas/Fasl mRNA比值分别为1.475、1.038和0.878。Western blotting分析结果显示，A组C-myc相对表达水平最低（0.566±0.054），B（1.074±0.069）、C组（1.172±0.026）相对较高（P<0.05）。免疫荧光定位结果显示，旋毛虫排泄分泌蛋白和顺铂作用后24 h，C-myc蛋白在细胞浆/细胞核表达。结论旋毛虫排泄分泌蛋白可促进人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞凋亡，可能是通过调节凋亡蛋白C-myc表达、进而抑制Bcl-2 mRNA的表达并调节Fas/Fasl mRNA比例来实现的。

关键词: 旋毛虫, 排泄分泌蛋白, 小细胞肺癌, NCI-H446, 凋亡基因, 凋亡蛋白

Abstract:

Objective To investigate the effect of excretory/secretory proteins from Trichinella spiralis on apoptosis of NCI-H446 small-cell lung cancer cells. Methods Trichinella spiralis muscle stage larvae （5×106/ml）were cultured in culture media for 24 h， the excretory/secretory proteins were collected from the supernatant of culture media. NCI-H446 small-cell lung cancer cells（No. A05） were randomly divided into three groups： experiment group（A）， standard control group （apoptosis group， B）， and control group （C）. NCI-H446 cells in groups A and B were cultured with 0.3 mg/ml T. spiralis excretory/secretory proteins， and 6.4 μg/ml cisplatin for 24 h， respectively. NCI-H446 cells of group C were cultured for 24 h without any treatment. The expression of Bcl-2， Fas and Fasl mRNA was detected by RT-PCR. C-myc protein expression level was examined by Western blotting and immunofluorescence assay. Results The level of Bcl-2 mRNA was lowest in group A（0.575±0.047） , Bcl-2 mRNA level in group C （0.975±0.069） was higher than that of group B （0.850±0.073）（P<0.05）. Fas mRNA level was highest in group A（0.975±0.115）， followed by group B（0.817±0.121） and group C（0.769±0.061）（P<0.05）. The level of Fasl mRNA in groups A， B， and C was 0.669±0.051， 0.787±0.124， and 0.875±0.125， respectively（P<0.05）. Fas/Fasl mRNA ratio in groups A， B， and C was 1.475，1.038，and 0.878. Western blotting showed that the expression of C-myc protein in group C（1.172±0.026） was highest， followed by group B （1.074±0.069） and A（0.566±0.054）（P<0.05）. Immunofluorescence test indicated that the C-myc protein was found in the cytoplasm and the nucleus 24 h after treated with 0.3 mg/ml T. spiralis excretory/secretory proteins and 6.4 μg/ml cisplatin. Conclusion Trichinella spiralis excretory/secretory proteins may inhibit apoptosis of NCI-H446 small-cell lung cancer cells by reducing the apoptosis protein C-myc and Bcl-2 mRNA levels， and causing the increase of Fas/Fasl mRNA ratio.

Key words: Trichinella spiralis, Excretory/secretory protein, Apoptotic gene, Small-cell lung cancer cell, NCI-H446, lApoptotic protein

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旋毛虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响

Effect of the Excretory/Scretory Proteins from Trichinella spiralis on Apoptosis of NCI-H446 Small-cell Lung Cancer Cells

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