驽巴贝虫病间接ELISA检测方法的建立

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (3): 9-204.

驽巴贝虫病间接ELISA检测方法的建立

龚真莉，刘光远^*，谢俊仁，柴慧萍，张丽艳，李知新，田占成，王路，刘建刚

中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫原病原生物学国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-06-30 发布日期:2010-06-30

An Indirect ELISA for the Detection of Babesia caballiin Equine Animals

GONG Zhen-li， LIU Guang-yuan^*， XIE Jun-ren， CHAI Hui-ping， ZHANG Li-yan，LI Zhi-xin， TIAN Zhan-chen， WANG Lu， LIU Jian-gang

Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province，State Key Laboratory of Veterinary Etio-logical Biology，Lanzhou Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences， Lan zhou 730046， China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-06-30 Published:2010-06-30

摘要/Abstract

摘要： 【摘要】目的克隆表达驽巴贝虫诊断抗原基因BC48，建立间接ELISA诊断方法。方法从感染驽巴贝虫的毛驴血液中提取虫体基因组DNA，利用PCR技术扩增BC48基因，将其克隆入表达载体pET-28a，转化大肠埃希菌感受态细胞，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达，用镍柱亲和层析法纯化蛋白。以该蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA诊断方法，对反应条件进行优化，并对该方法的特异性和敏感性进行评价。结果扩增获得1 272 bp的BC48基因片段。重组表达质粒pET-28a-BC48诱导后获得大小约为M_r46 000的可溶性融合蛋白，纯化后蛋白浓度为12.98 mg/ml。间接ELISA方法条件优化的结果显示，最佳抗原包被浓度为65 μg/ml，最适血清稀释度为1 ∶ 80，该融合蛋白可特异性地与驽巴贝虫感染血清结合，而不与马泰勒虫感染血清及阴性血清反应。使用该方法与镜检法检测17份散养毛驴血清样品，阳性检出率分别为3/17和2/17。结论以BC48重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于马属动物驽巴贝虫病的检测。

关键词: 驽巴贝虫, BC48, 表达, 纯化, ELISA

Abstract: 【Abstract】 Objective To clone and express BC48 gene of Babesia caballi， and to establish an indirect ELISA for the diagnosis of B. caballi in equine animals. Method The genomic DNA of B. caballi was extracted from the infected donkey blood. BC48 gene was amplified by PCR. The PCR product was cloned into expression plasmid pET-28a， and expressed in E. coli BL21 with IPTG induction. The recombinant protein was purified by Ni-NTA affinity chro-matography and was used as a diagnostic antigen to establish an indirect ELISA. The reaction conditions of the indirect ELISA were optimized. Specificity and sensitivity of this method were evaluated. Result BC48 gene of B. caballi was 1 272 bp. The recombinant protein was expressed in E. coli BL21 as a soluble protein with a molecular weight of about Mr 46 000 under induction of IPTG. The concentration of purified protein was 12.98 mg/ml. The best conditions were obtained for the ELISA when the antigen concentration was 65 μg/ml with the serum dilution of 1 ∶ 80. The protein specifically reacted with serum from donkey infected by B. caballi， but did not react with serum from donkey infected by Theileria equi （B. equi）. Both ELISA and microscopy were applied to examine 17 donkeys in the field， 3 were positive by ELISA and 2 were found parasite-positive， respectively. Conclusion The indirect ELISA method may be used to detect B. caballi infection in equine animals.

Key words: Babesia caballi, BC48, Expression, Purification, ELISA

龚真莉;刘光远;谢俊仁;柴慧萍;张丽艳;李知新;田占成;王路;刘建刚. 驽巴贝虫病间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(3): 9-204.

GONGZhen-li;LIUGuang-yuan*;XIEJun-ren;CHAIHui-ping;ZHANGLi-yan;LIZhi-xin;TIANZhan-chen;WANGLu;LIUJian-gang. An Indirect ELISA for the Detection of Babesia caballiin Equine Animals[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(3): 9-204.

[1]	王之谦, 王敬文, 宋秀梅. 斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2调节共生菌稳态的功能分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 397-403.
[2]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[3]	侯昕伶, 李德伟, 施阳, 王茂林, 孜比姑·肉素, 阿比旦·艾尼瓦尔, 郑旭然, 康雪娇, 王慧, 李静, 张传山. 多房棘球蚴感染小鼠腹腔ST2⁺ T细胞亚群功能及其免疫检查点分子表达变化[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(6): 708-716.
[4]	邹伟浩, 吴蔚玲, 廖远鹏, 陈敏, 彭鸿娟. 刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 587-593.
[5]	曹天行, 刘军龙, 张志刚, 史康妍, 石苗, 关贵全, 李有全, 殷宏, 罗建勋. 环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 362-368.
[6]	张雅兰, 蒋甜甜, 贺志权, 邓艳, 陈伟奇, 朱岩昆, 张红卫, 赵东阳. 小鼠感染肝毛细线虫肝脏microRNA的差异表达分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 56-60.
[7]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[8]	苏雅静, 乔霞, 汪澎涛, 康宇婷, 杨宁爱, 贾伟, 赵志军. 弓形虫毒力相关效应分子ROP16Ⅲ诱导人肺腺癌A549细胞的基因表达谱[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 473-480.
[9]	王龙江, 李瑾, 尹昆, 徐超, 刘功振, 黄炳成, 魏庆宽, 孙慧. 刚地弓形虫入侵人包皮成纤维细胞前后转录组差异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 480-486.
[10]	周岩, 陈韶红, 李浩, 程娜, 洪加林, 许学年. 卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 20-26.
[11]	朱吉海, 曹得萍, 赵珺, 刘珺, 史虎祥, 刘燕. 多房棘球蚴病患者肝病灶组织差异表达基因的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 48-54.
[12]	范俊杰, 韩秀敏, Nur Fazleen Binti Idris, 李锴, 谭青青, 曹纹侨, 李想, 廖鹏, 叶彬. 细粒棘球绦虫蛋白激酶A的生物信息学特征及免疫反应性[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 682-687.
[13]	郭楚桐, 欧阳春艳, 何俊贤, 季树宇, 杨礼腾, 刘晓宇. 屋尘螨第十类变应原的克隆、表达、纯化及免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 723-729.
[14]	郑文琪, 冯学敏, 曹雅明, 韩艳秋, 王俊瑞. 伯氏疟原虫静息巯基氧化酶的生物信息学分析和体外酶活检测[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 159-165.
[15]	颜鲁军, 李雅婷, 丁军军, 杨静, 郑亚东, 陈轶霞. 细粒棘球蚴原头节miR-71的分泌表达特征分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 188-193.