微小牛蜱Bm86基因的原核表达与表达条件的优化

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (6): 18-533.

微小牛蜱Bm86基因的原核表达与表达条件的优化

马米玲,关贵全,李有全,刘爱红,任巧云,牛庆丽,殷宏,罗建勋*

家畜疫病病原生物国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州 730046

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-12-30 发布日期:2009-12-30

Prokaryotic Expression of Bm86 Gene of Boophilus microplus and Optimization of the Expression Condition

MA Mi-ling,GUAN Gui-quan,LI You-quan,LIU Ai-hong,REN Qiao-yun,NIU Qing-li,YIN Hong,LUO Jian-xun*

State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology，Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province，Lanzhou Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou 730046，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-12-30 Published:2009-12-30

摘要/Abstract

摘要： 根据微小牛蜱Bm86基因序列设计引物，在重组质粒pMD18-T-Bm86中克隆，并将其定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1，转化至大肠埃希菌BL21（DE3）株，用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在不同时间进行诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测结果表明，37 ℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导8 h后，目的重组蛋白表达量最大，表达相对分子质量（Mr）约为94 000的包涵体蛋白，与预期大小一致，目的蛋白约占蛋白总量的29%。蛋白质印迹（Western blotting）分析表明，该重组蛋白可被兔抗微小牛蜱全蜱阳性血清所识别。

关键词: 微小牛蜱, Bm86基因, 表达

Abstract: A pair of specific primers was designed based on the reported Bm86 gene of Boophilus microplus，the Bm86 gene was cloned by PCR using the plasmid pMD18-T-Bm86 as templates，and subcloned into the prokaryotic plasmid pGEX-4T-1. The recombined plasmid was transformed into E. coli BL21（DE3） and followed by expression of the protein induced by different concentration of IPTG for different time. SDS-PAGE showed that the recombinant plasmid pGEX-4T-1/Bm86 expressed a fusion protein Bm86-GST （Mr 94 000） after being induced with IPTG. High level expression of Bm86-GST was found at 1 mmol/L IPTG condition after incubation for 8 h at 37 ℃， and the expression level of the recombinant Bm86-GST reached up to 29% of total E. coli proteins. Western blotting analysis showed that the recombinant Bm86-GST was recognized by the rabbit anti-B. microplus positive serum．

Key words: Boophilus microplus, Bm86 gene, Expression

马米玲;关贵全;李有全;刘爱红;任巧云;牛庆丽;殷宏;罗建勋. 微小牛蜱Bm86基因的原核表达与表达条件的优化[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(6): 18-533.

MAMi-ling;GUANGui-quan;LIYou-quan;LIUAi-hong;RENQiao-yun;NIUQing-li;YINHong;LUOJian-xun*. Prokaryotic Expression of Bm86 Gene of Boophilus microplus and Optimization of the Expression Condition[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2009, 27(6): 18-533.

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