硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因克隆与序列分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2000, Vol. 18 ›› Issue (1): 10-32.

硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因克隆与序列分析

成军¹;斯崇文²;王勤环²;刘妍¹;钟彦伟¹;杨继珍¹;洪卫国¹

解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心!北京100039;北京医科大学第一医院感染疾病科!北京100034

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2000-02-28 发布日期:2000-02-28

CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF A GENE ENCODING AMASTIN FROM LEISHMANIA MAJOR

CHEN Jun ¹;SI Chong wen ²;WANG Qin huan ²;LIU Yan ¹;ZHONG Yan wei ¹;YANG Ji zhen ¹;HONG Wei guo ¹

1 Gene Therapy Research Center;The Institute of Infectious Diseases;302 Hospital of PLA;Beijing 100039; 2 Department of Infectious Disease,The First School of Clinical Medicine,Beijing Medical University, Beijing 100034

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2000-02-28 Published:2000-02-28

摘要/Abstract

摘要： 　　[目的 ]克隆硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白 (amastin)的编码基因序列。 [方法 ]应用核苷酸序列数据库 (GenBank)和表达序列末端片段数据库 (dbEST)的计算机检索与DNA文库的杂交筛选方法。 [结果 ]从dbEST数据库中获得一段 30 9nt的来源于硕大利什曼原虫的基因片段 ,据此设计探针 ,筛选硕大利什曼原虫的DNA文库 ,获得硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因。其开放读码框架由 5 5 2个核苷酸组成 ,编码产物由183个氨基酸残基组成。序列分析表明 ,硕大利什曼原虫与锥虫无鞭毛体蛋白一级结构的同源性为 2 3 5 %。 [结论 ]克隆的基因系硕大利什曼原虫表面蛋白编码基因 ,即无鞭毛体蛋白的编码基因。

关键词: 利什曼原虫, 无鞭毛体, 基因文库, 基因克隆

Abstract: 　Objective]To clone a gene encoding surface protein from Leishmania major .[Methods] Using T cruzi amastin DNA sequence as a reference,computer search was done on GenBank and dbEST databases by using BLAST path. A Leishmania major DNA library has been constructed and screened by in situ colony hybridization.[Results] A 309nt DNA fragment from Leishmania major was found in dbEST. Leishmania major DNA library was screened using specific primers synthesized according to 309 nt DNA sequence, and a full length coding sequence for Leishmania major amastin was cloned. The coding sequence consisted of 552 nt, and translated into 183 amino acid residues. The homology is 23 5% at amino acid sequence level between Leishmania major and T cruzi amastins. [Conclusion] A full length amastin coding gene for Leishmania major has been cloned.

Key words: Leishmania, amastin, GenBank database, gene cloning

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